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从组织切片上分离单个细胞的相关技术及其应用前景
1 从组织切片上分离单细胞方法的建立从组织切片上进行单个细胞分离,并扩增出靶DNA片段的技术是1993年由德国科隆大学的Hansmann等[1]建立起来的一项新技术,并将其称为分子组织学技术(molecular histology).该方法的大优点在于能够针对所需研究的细胞,将组织形态和分子生物学技术密切结合,特别适用于细胞组成复杂的病变.同年,Trumper等用霍奇金病(HD)淋巴结制备细胞悬液,结合免疫组织化学,用微操纵器从细胞悬液中提取单个Reed-Sternberg(RS)细胞,并成功地进行了聚合酶链反应(PCR)[3].两种方法相比较,前者更具优势,因为从组织切片上提取单个细胞,能密切结合形态学特征,更为直观和准确,同时也能将目的细胞与周围微环境中的背景细胞作相关性研究.获得单个细胞还有其他方法,如流式细胞仪、密度梯度离心、高梯度磁性细胞筛选,但细胞体积较大时,这些方法易导致细胞碎裂,而从组织切片上提取单个细胞不存在类似问题[4].
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面向细胞分离的微流控技术
在医学和生物学的多项研究中,能够对不同种类的细胞进行有效的分离,一直是学术界所面临和一直在研究的重要问题.如果人们能够有效地分离不同类型的细胞,那么将会给许多疾病的诊断和治疗带来巨大的便利,从而为医学和生物学带来突破.目前,传统的、主要的细胞分离和筛查方法可以分为两大类,分别是标记法和非标记法.随着微流体技术的发展,微流体芯片正在越来越广泛地应用在细胞分离的领域.本文从微流体的研究历程出发,结合现有的传统细胞分离技术,以及其与微流体技术的对比,对微流体在细胞分离领域的应用和发展作综述性介绍.
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人肝细胞离线混合生物人工肝治疗慢加急性肝衰竭一例
应用转染人肝再生增强因子(hALR)基因的Hep G2细胞筛选出一株肝细胞作为生物材料,并建立生物人工肝支持系统,经检测具有良好生物合成及转化功能.我们采用离线混合生物人工肝治疗慢加急性肝衰竭1例,报道如下.
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噬菌体抗体库中筛选血小板膜糖蛋白Ⅱ b/Ⅲa特异的人源性Fab抗体
本研究利用特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)患者产生抗血小板自身抗体的特点,从ITP患者脾脏细胞中提取RNA,扩增抗体轻链和重链Fd基因,插入噬粒载体pComb3H,构建人源性抗GP Ⅱ b/ⅢaFab噬菌体抗体库.以表达GP Ⅱ b/Ⅲa的CHO123细胞筛选抗体库,制备人源性GPⅡb/Ⅲa Fab噬菌体抗体.
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小鼠骨髓源性肝干细胞筛选及其分化潜能的研究
目的 从骨髓细胞中筛选肝干细胞.方法 供体为纯系BALB/C雄性小鼠,从其骨髓细胞中分离CD34+Lin-、CD90+Lin-、CD117+Lin-、Sca-1+Lin-细胞.受体为35 Gy全肝照射预处理的同龄同系BALB/C雌性小鼠,A、B、C、D组分别为CD34+Lin-、CD90+Lin-、CD117+Lin-、Sca1+Lin-细胞移植.术后30 d活杀小鼠,取肝作小鼠Y染色体性别决定基因Sry的原位分子杂交和白蛋白的免疫组化染色,镜下观察并记录双阳性细胞数量.结果 A、B、C、D组小鼠肝组织中均检测到双阳性细胞,其中C组的双阳性细胞数量显著多于其它各组.结论 CD34+Lin-、CD90+Lin-、CD117+Lin-、Sca-1+Lin-细胞都含有骨髓源性肝干细胞、都有分化形成肝细胞的潜能,但CD117+Lin-细胞分化形成肝细胞潜能大.
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化学微阵列:一种药物筛选和发现的新工具
随着基因组和蛋白质组学研究发现大量药靶,高通量合成产生多种化合物库,基于微孔板的高通量筛选(HTS)技术面临着严峻挑战,迫切需要发展更为快速经济的新方法.化学微阵列技术应运而生.近年来研究证明,涉及不同表面化学与活化策略的化学微阵列技术,能成功地应用于评价化合物与蛋白质之间的相互作用、酶活性的抑制、靶的识别、信号通路机制的解析和基于细胞的功能分析之中.对于平行筛选作用于多靶的各种化合物库,该法显示了前所未有的潜力.
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应用自制谱细胞鉴定不规则抗体技术的探讨
鹤岗地区输血患者每年大概在1500例,含有不规则抗体的大概有几十例,无偿献血者大约有20例左右,这些病例都得经过谱细胞鉴定诊断.应用活谱细胞这项技术后,此类抗体的检查可作为常规实验.随着聚凝胺配血法的推广,不规则抗体检出率也日益增高,应用谱细胞筛选不规则抗体的性质,为临床的疑难用血提供了筛选方法,及时的找到相合的血液,HDN的发病率在鹤岗也日趋增高.产前的预防和产后的治疗也逐渐重要,应用活谱细胞的筛选方法,可对HDN的产前预防和产后治疗提供科学诊断依据.
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RGD-TRAIL抗肿瘤作用的细胞筛选研究
目的:通过体外细胞实验,来确定对RGD-TRAIL的敏感肿瘤细胞株,为体内试验提供参考.方法:利用靶向抗肿瘤蛋白RGD-TRAIL处理30株人肿瘤细胞系72 h后,通过CTG方法测定药物在各个肿瘤细胞系中的细胞增殖50%抑制浓度(IC50),来确定对RGD-TRAIL的敏感肿瘤细胞株.结果:在所有测试的肿瘤细胞系中,对RGD-TRAIL为敏感的是COLO 205,A-673和NCI-H358,它们的IC50皆小于0.05 μg·mL-1;其次MDA-MB-231和Calu-3对RGD-TRAIL也较敏感,IC50值分别为0.3和1.9μg·mL-1;其余细胞系对RGD-TRAIL的IC50值均大于40 μg· mL-.结论:对RGD-TRAIL敏感的肿瘤细胞株为COLO 205(结肠癌)、A-673(骨癌)和NCI-H358(非小细胞肺癌).
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人CD123稳定表达细胞株的建立与鉴定
目的 探索建立人CD123稳定表达细胞株的方法,为进一步实现人CD123的抗体规模化生产提供材料.方法 构建人CDl23 CDS区真核表达载体(hCD123 CDS-PEGFP-N1);经脂质体包裹转染中国仓鼠卵巢细胞CHO-S;经流式分选结合G418筛选,并用流式细胞术和Western印迹法检测人CD123蛋白的表达情况,初步筛选出人CD123高表达的CHO-S细胞株;并进一步用经人CD123Fc重组融合蛋白免疫的小鼠血清检测该细胞株hCD123表达情况.结果 测序及GenBank中序列比较结果显示扩增到的人CD123基因序列是正确的,酶切结果表明表达质粒构建正确;流式分选结合G418筛选得到1个人CD123高表达的细胞株--克隆8G9 CHO-S,其CD123-APC阳性细胞百分数为92.07%,用融合蛋白免疫的血清检测各细胞株人CD123表达情况,结果显示克隆8G9 CHO-S细胞和对照CHO-S细胞的CD123阳性率分别为(97.94±1.93)%和( 2.84±1.35)%,差异具有统计学意义(P<0.01).结论 建立了人CD123抗原稳定高表达的细胞株克隆8G9 CHO-S,为进一步实现人CDI23的抗体规模化生产及其导向治疗奠定了坚实的基础.
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筛选后的巢蛋白阳性细胞流式鉴定及诱导分化
目的观察胎儿胰腺来源的巢蛋白阳性细胞(符合医学伦理学)是否具有与间充质干细胞类似的表面标志以及多向分化的潜能.方法从胎儿胰腺中分离的巢蛋白阳性细胞筛选后进行扩增,用流式细胞仪分析表面标志,并探讨这类细胞的成脂和成骨的分化潜能.结果筛选纯化后的巢蛋白阳性细胞的表面标志与骨髓间充质干细胞表面标志相似:此类细胞可在体外诱导为脂肪细胞或骨细胞.结论筛选纯化的胎儿胰腺来源的巢蛋白阳性细胞具有一定间充质干细胞的特性.
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单克隆抗体PD4相关抗原的鉴定
单克隆抗体PD4是本所用胃癌细胞系MGC803细胞免疫BALB/c小鼠,经细胞筛选而获得的[1]。前期工作证明,此抗体能引起MGC803细胞的凋亡[2], 抑制Ras转化细胞Rat3-3在体外的增殖及在软琼脂中的集落形成能力, 并降低其在裸鼠中的致瘤能力[3,4],这些结果提示,单克隆抗体PD4相关抗原与肿瘤的发生、发展及转归密切相关。因此,克隆PD4相关抗原基因,了解其结构及功能,将有助于我们认识肿瘤的发生发展及转归规律,为肿瘤的防治提供有益的线索和依据。
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未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞分析
近年来大量流行病学调查,宫颈癌主要发病原因为人乳头瘤病毒(HPV)感染.防治宫颈癌,关键是早期发现宫颈病变.因此宫颈脱落细胞筛选仍为首选,用薄层液基细胞学检查(TCT),显著提高了宫颈病变的检出率.
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影响尿沉渣检验结果的常见因素分析
UF-100全自动尿沉渣分析仪是近年来应用较多的尿沉渣分析仪,它采用了多项先进技术:(1)激光流式细胞检测技术;(2)电传导检测技术;(3)电阻抗细胞检测技术;(4)细胞化学技术,是一台准确性、标准化程度高、多参数分析并能定量的尿沉渣细胞筛选的先进仪器.因此深得广大检验工作者及临床医生的好评.但在检测过程中会出现一些问题,影响检验结果.根据工作中的体会,现总结如下.
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噬菌体随机肽库技术在细胞特异性多肽筛选中的研究进展
噬菌体展示肽库可筛选出与靶向细胞特异性结合的多肽,具有较好的特异性与靶向性。全细胞筛选的应用推进了噬菌体随机肽库技术的发展并拓宽了其研究应用领域,现针对噬菌体随机肽库技术的发展和在细胞特异性结合多肽筛选中的研究进展及应用进行概述。