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温补培元方对脾虚小鼠细胞免疫功能影响的实验研究
温补培元方是由人参、黄芪、附子、黄柏、山萸肉等13味中药组成的.是从新安温补培元医家汪机、孙一奎、郑重光、吴楚等8位医家653例运用温补培元法的医案中,用Foxpro编译程序进行统计,并根据这些医家的配伍规律,总结而成的(1).为了进一步研究该方温补培元的作用机理,我们用利血平复制成小鼠脾虚模型,用该方作用后,观察对脾虚型小鼠机体巨噬细胞吞噬作用、脾脏细胞NK活性和conA刺激的淋巴细胞掺入率影响,以阐明该方对改善脾虚证的意义.
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噬菌体抗体库中筛选血小板膜糖蛋白Ⅱ b/Ⅲa特异的人源性Fab抗体
本研究利用特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)患者产生抗血小板自身抗体的特点,从ITP患者脾脏细胞中提取RNA,扩增抗体轻链和重链Fd基因,插入噬粒载体pComb3H,构建人源性抗GP Ⅱ b/ⅢaFab噬菌体抗体库.以表达GP Ⅱ b/Ⅲa的CHO123细胞筛选抗体库,制备人源性GPⅡb/Ⅲa Fab噬菌体抗体.
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束缚应激上调小鼠脾脏淋巴细胞钾离子通道(Kv1.3)的表达
目的观察束缚应激条件下小鼠脾脏细胞Kv1.3表达的变化.方法采用RT-PCR、Western blot等分子生物学及免疫组化实验方法,分别从基因和蛋白质水平揭示束缚应激对小鼠脾脏细胞Kv1.3表达的调节.结果束缚应激16 h后小鼠脾脏细胞Kv1.3 mRNA和蛋白质表达水平明显上调(P<0.05).但是,相同束缚应激条件下小鼠脑组织Kv1.3表达无明显变化(P>0.05).结论束缚应激状态下小鼠脾脏细胞Kv1.3 mRNA和蛋白质表达水平呈明显组织特异性上调,提示束缚应激条件下免疫功能的调节可能与钾通道有关.这为进一步研究神经内分泌系统调节淋巴细胞功能的机制提供了新的思路.
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低剂量辐射诱导蛋白对紫外线、电离辐射细胞损伤的保护作用
本研究通过直接提取低剂量辐射(LDR)诱导蛋白并观察其对紫外线、电离辐射所造成细胞损伤的保护作用。 一、实验方法 昆明小鼠随机分成非照射组和照射组，分别在20℃～24℃条件下接受0 cGy及10 cGy的γ射线照射，照射后2 h颈椎脱臼致死，无菌条件下取出脾脏，制成单细胞悬液，加蒸馏水以溶解红细胞，离心后按每6×107脾细胞2 ml比例加入含PMSF 4℃0.01 mol/L PBS，在冰浴下超声破碎脾脏细胞，破碎液在高速冷冻离心机上离心，上清液即为小鼠脾脏细胞蛋白提取液及含有LDR诱导蛋白的提取液，4℃冷藏待用。 取小鼠新鲜脾脏，制成RPMI 1640单细胞悬液，培养瓶培养细胞，各培养瓶装含10%小牛血清之RPMI 1640培养基2 ml，脾细胞悬液0.2 ml(脾细胞2×106个)，接受UV(照射2 min，实测紫外线辐照强度为460 μW/cm2)或电离辐射损害(4 Gy)后分3组培养，分别加0.01 mol/L PBS、小鼠脾脏细胞蛋白提取液及含有LDR诱导蛋白的提取液0.1 ml,加3H-TdR20 μl，培养6 h、细胞收获、制膜后测放射线强度。
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氢化可的松诱导大白鼠脾脏细胞的凋亡
细胞凋亡(apoptosis)又称程度性细胞死亡(programmed cell death)，是细胞生理性死亡的主要形式，首先由Kerr[1]等提出，凋亡细胞的重要生化特征是DNA在核小体连接处断裂成为长约180～200bP或与之成倍的特征片断[2]。在医学、生物学中的细胞凋亡，日益受到人们的高度重视，目前，有关地塞米松引起胸腺细胞凋亡的研究较多，本文主要探讨氢化可的松(HYD)在体外致SD大白鼠脾脏细胞的凋亡。
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人脐血间质干细胞静脉输注对60Co γ射线照射小鼠脾脏细胞生物学效应的影响
背景:研究发现,脐血间质干细胞对辐射损伤有一定的防护作用.目的:实验拟观察脐血间质干细胞静脉输注对照射小鼠脾脏细胞生物学效应的影响,验证其防辐射损伤作用.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-04/10在广东医学院实验动物中心完成.材料:将体质量(20.0±1.5)g的雌性昆明种小鼠随机分为正常对照组、单纯照射对照组、60Coγ射线照射前静脉注射脐血间质干细胞组,每组30只.新鲜脐带血来源十本院妇产科健康产妇.方法:以无菌塑料采血袋按密闭式方法采集足月新生儿脐带血80～140 mL,无菌条件下将脐带血液采集到含有ACD-B保养液的无菌采血袋内,并按照卫生部检测血液的标准检测每一份脐带血液,采集、分离间质干细胞.60Co γ射线照射小鼠,通过尾静脉将分离获得的人脐血间质干细胞输注入小鼠体内,细胞数≥1×108份,照射后当天再次输注人脐血间质干细胞.主要观察指标:应用流式细胞仪检测脾脏细胞的凋亡指数和免疫参数.结果:与单纯照射组相比,60Co γ射线照射前静脉注射脐血间质干细胞组的G0/G1期细胞比例F降,而S、G2M期细胞比例均有不同程度的升高.经照射后,小鼠脾细胞的凋亡率明显增加,脐血间质干细胞对细胞的凋亡有一定保护作用,同时能够提高细胞的增殖率.单纯照射组的NK细胞、CD4+和CD8+标记率明显低于正常对照组,而脐血间质干细胞能显著地提高它们的活性.结论:脐血间质干细胞静脉输注对辐射造成的脾细胞损伤有一定保护作用,可促进脾脏细胞的分裂增殖,加速脾脏细胞的修复.其作用机制可能与提高NK细胞活性和CD4+、CD8+数量有关.
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细菌防护液对照射小鼠脾脏细胞生物学效应的影响
目的:探讨细菌防护液(BPL)与受照小鼠脾脏细胞生物学效应的关系.方法:应用流式细胞仪((FCM)检测细胞的凋亡指数和免疫参数(CD+4、CD+8、NK).结果:BPL能够降低细胞凋亡率(P＜0.01),同时能够提高细胞的增殖率(P＜0.05).其作用机制可能与提高NK细胞活性和CD+4、CD+8数量有关.结论:本研究进一步证实,BPL对辐射损伤细胞有一定的保护作用,为临床应用提供科学数据.
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浆细胞样树突状细胞能提呈同种抗原并介导血管性移植物的耐受
对于血管性移植物,同种抗原并不是局限于某个部位而是弥散地分布于多个淋巴器官,因此需要诱导系统性免疫耐受.论文报告通过静脉回输供者脾脏细胞以及抗CD40L的单抗,成功建立了同种血管性心脏移植达10周的耐受动物模型,并首次发现小鼠浆细胞样树突状细胞(pDC)具有吞噬功能,其在针对血管性心脏移植物的耐受中起着至关重要的作用.
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川芎提取物对电离辐照损伤实验小鼠脾脏组织细胞凋亡相关蛋白表达的影响
目的 探讨川芎提取物对60Co γ电离辐射损伤小鼠的保护作用,及其对损伤小鼠脾脏组织细胞凋亡相关蛋白表达的影响.方法 小鼠随机分为空白组(Normal)、辐照组(i-onizing radiation,IR)、氨磷汀组(AMF,腹腔注射260 mg·kg-1)和川芎提取物组(LCXE1、LCXE2、LCXE3,依次灌胃给药50、100、200 mg· kg-1).预防性给药3d后,采用5 Gy60C0 γ射线辐照建立小鼠电离辐射损伤模型.采用TUNEL标记和免疫组织化学染色法,观察川芎提取物对小鼠脾脏组织凋亡细胞数目及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、p53表达的影响.结果 与IR组相比,AMF明显降低脾组织凋亡细胞数量(P＜0.01),川芎提取物剂量依赖性降低脾组织凋亡细胞数量(P＜0.05);AMF、LCXE2、LCXE3能明显提高Bcl-2蛋白表达(P＜0.01),明显降低Bax蛋白表达(P＜0.05)及p53蛋白表达(P＜0.01).结论 川芎提取物对60Co γ射线损伤的小鼠有明显的改善作用,其作用机制可能为作用于细胞凋亡相关通路.
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金水宝胶囊清除老年虚证者氧自由基及DNA损伤后修复作用的临床和实验研究
目的：以探讨金水宝胶囊清除老年虚证者氧自由基及DNA损伤后修复作用。方法：将口服金水宝胶囊者列为治疗组，服淀粉胶囊者列为阴性药物对照组，对老年虚证氧自由基清除及DNA损伤后修复作用进行临床和实验研究。结果：治疗前青年组SOD活性明显高于老年虚证组，MDA含量两组相反(P＜0.01)；用药后老年虚证治疗组SOD活性升高，MDA含量降低(P＜0.01)。对畏寒、头晕、腰膝酸软及夜尿频、耳鸣症状有较好的疗效。动物实验与临床观察一致。老年虚证组治疗前的非程序合成(UDS)水平明显低于青年组，而老年虚证治疗组与阴性对照组在用药前后的改变比较差异性有极显著意义(P＜0.01)；动物实验表明青年鼠组活体脾脏细胞姐妹染色单体互换(SCE)频率明显低于老龄鼠组，金水宝胶囊无诱发SCE的作用。结论：金水宝胶囊能提高清除氧自由基及DNA损伤后的修复能力。
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三七对脑缺血小鼠外周淋巴细胞活化及脾细胞ROS表达的影响
目的:探讨三七对脑缺血后小鼠外周淋巴细胞活化及脾细胞ROS表达的影响.方法:结扎颈总动脉建立缺血性脑损伤小鼠模型.20只BALB/c小鼠随机分别为空白组、伪手术组、手术组、手术+三七治疗组.双色荧光抗体标记分析外周血细胞CD69的表达.H2DCFDA染色检测外周血T淋巴细胞和脾脏细胞ROS变化.结果:各组外周血T淋巴细胞的CD69的表达无明显差异.但手术组小鼠外周血CD3-淋巴细胞CD69表达和脾脏细胞ROS的表达明显增高.加用三七能降低手术组脾脏细胞ROS表达增高.结论:外周T淋巴细胞的凋亡不是由于T淋巴细胞过度活化而引起的.三七能抑制脾脏细胞ROS的过度表达.
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枸杞多糖对地塞米松诱导的小鼠脾脏细胞凋亡的影响
目的 探讨枸杞多糖(LBP)对地塞米松(DEX)诱导的小鼠脾脏细胞凋亡的影响.方法 以水提取-乙醇沉淀法制备LBP,分别给予实验小鼠每天口服LBP 25、50、100 mg,10 d后体外实验取小鼠脾脏细胞与10-5、10-6、10-7 mol/L的DEX共同孵育,6 h后检测细胞凋亡率;体内实验给予小鼠腹腔注射DEX(25 mg/kg),10 h后取脾脏细胞直接检测凋亡率.结果 实验动物预先口服LPB 10 d后,可使DEX诱导的小鼠脾脏细胞凋亡率显著降低,并呈现量效关系.结论 LPB的免疫调节和促进作用与其对免疫细胞的保护、降低免疫细胞凋亡有关.
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病毒巨噬细胞炎性蛋白ⅡN端肽调控SDF-1α/CXCR4诱导趋化机制
目的:评价病毒巨噬细胞炎性蛋白ⅡN端肽( NT21MP)是否通过干扰SDF-1α/CXCR4信号抑制人乳腺癌细胞株SKBR3细胞的趋化作用.方法:以RT-PCR和免疫组化检测SKBR3和MCF-7两种人乳腺癌细胞中CXCR4的表达；用细胞转移实验检测在NT21MP存在或缺乏的情况下SDF-1α诱导SKBR3细胞的趋化作用；以Fluo3/AM为细胞内游离钙离子的荧光指示剂,用激光扫描共聚焦显微镜测定NT21MP对SDF-1α诱导SKBR3细胞内游离钙浓度的影响；Western blot分析ERK1/2和FAK蛋白的磷酸化水平变化.结果:相对于MCF-7细胞,SKBR3细胞中CXCR4蛋白表达水平较高；经SDF-1α处理后,SKBR3的迁移能力提高,CXCR4抑制剂AMD3100可有效抑制SKBR3细胞的迁移,细胞经NT21MP预处理后,可剂量依赖性地抑制SKBR3细胞的迁移(P <0.05)；NT21MP也可抑制由SDF-1α诱导的细胞内Ca2+峰值(P<0.05),而钙离子浓度升高是SKBR3细胞迁移的重要信号之一；另外,相对于阴性对照组,NT21MP也可下调SDF-1α诱导的SKBR3中信号蛋白ERK1/2和FAK的磷酸化水平(P<0.05).结论:NT21MP可抑制SDF-1α诱导的SK-BR3细胞的迁移,可能与其上游钙离子释放和ERK1/2及FAK磷酸化阻断信号有关.
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D-半乳糖致衰老小鼠模型脾脏B细胞的改变
目的:运用D-半乳糖建立亚急性衰老小鼠模型,在对其进行生物学鉴定的基础上,分析脾脏B细胞表面重要膜型分子的改变及其意义.方法:健康昆明鼠,颈后部皮下注射100 g/L D-半乳糖溶液,0.25 mL/20 g,1次/d,连续42 d.逐日观察动物的生存状态和生物学行为并定期称量其体质量动态变化.小鼠衰老模型的生物学鉴定采用血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)浓度的测定；脾脏细胞表面与活化、记忆相关的重要膜型分子的分析采用免疫荧光和流式细胞术；血清中细胞因子IL-4的分析采用ELISA法.结果:成功建立亚急性衰老小鼠模型.免疫荧光和流式细胞术分析模型组小鼠脾脏细胞上CD20+为56.8％,CD40+为43.6％, CD20+ CD45RA+B为14.04％,CD40+ CD45RA+B为35.4％, CD20+ CD86+B为2.25％.CD40+ CD86+B为4.38％,CD20+ CD196+B为10.68％,CD40+ CD196+B为10.98％.ELISA法检测结果显示模型组小鼠血清中IL-4的平均水平为7.93 ng/L.经统计学分析模型组小鼠脾脏细胞CD20、CD40、CD45RA、CD86的表达及血清中IL-4的水平均低于对照组(P＜0.05),CD196高于对照组(P＜0.01).结论:在机体衰老过程中,脾脏B细胞表面与活化、记忆相关的重要膜型分子的表达发生改变,活化细胞减少,记忆细胞增多,血清中IL-4的表达下降,导致免疫系统功能紊乱.
