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补中益气汤影响Th1/Th2平衡的疗效研究
材料与方法:♂,无特殊病原体(SPF)和GFBALB/C小鼠,各自在SPF和GF条件下饲养;补中益气汤水提物再精炼成固体粉末(6400mg),经50Gy γ线辐射后溶于灭菌水备用;实验设计:实验一,四组小鼠,每组7只,两组用SPF小鼠①②,两组用GF小鼠③④;实验二、三组GF小鼠(1)(2)(3),每组7只;以上7组小鼠在5~6周龄时开始实验(day 0或week 0),OVA(ovalubumin)1μg/d(i.p.使机体将OVA作为抗原产生相应抗体)×3次(week 0、2、4);实验一的②④组和实验二的(2)(3)组OVA 5mg/d(口投给药,使机体产生口服免疫耐受)×4d(d-7~d-4);实验二的(3)组在day 0以前补中益气汤1g/kg/d(灌胃)连续预给药2~3weeks;以上7组小鼠在week 5时处死收集血样,同时无菌取脾脏,用已报道的细胞染色法显示脾细胞内细胞因子,用流式细胞分析法测小鼠脾脏内被染色的不同细胞因子的比率来计算Th1/Th2值;①③(1)组血清作为对照,其OVA抗体效价标定为100U/ml;ELISA法测血清抗OVA的IgG1抗体,荧光ELISA法测血清抗OVA的IgE抗体、IgG2a抗体;所有数据用x±s表示,数据分析用学生t检验.
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树突状细胞疫苗的现状与未来
1868年,Langerhans首先在人体皮肤的表皮层发现了树突状细胞,当时称之为Langerhans细胞.1973年,Steinman从小鼠脾脏分离出这种细胞,正式命名为树突状细胞(dendritic cells,DC).DC在抗肿瘤、抗感染、移植排斥、变态反应性疾病和自身免疫性疾病治疗中具有广阔的应用前景[1-2].由于这种细胞的发现,Steinman获得了2011年诺贝尔生理医学奖并被誉为树突状细胞之父.DC是人体内活跃、功能强的专职抗原递呈细胞(antigen-presentingcells,APC).
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多器官功能障碍综合征小鼠脾脏树突状细胞病理学观察
关于多器官功能障碍综合征(MODS)的发病机制,一般认为免疫系统的调节和制约是重要因素[1].树突状细胞是近年被认识到的一种极其重要的免疫辅助细胞,在启动免疫应答反应与调控细胞免疫功能方面具有关键作用[2,3].以往我们[4]经研究认识到树突状细胞参与了MODS免疫系统损伤的启动机制,是引发免疫功能紊乱和免疫抑制的重要始动因素.在此基础上,拟研究脾脏树突状细胞在MODS病程中的病变特点与意义.
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调控CD95的锤头状核酶抑制小鼠T细胞凋亡及杀伤活性的作用研究
供者淋巴细胞输注(DLI)在诱导移植物抗白血病(GVL)作用,治疗异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)后复发等方面取得了可喜效果.研究表明供者T淋巴细胞可通过CD95-CD95L途径杀伤白血病细胞,以诱导DLI后的GVL效用 [1].但在体内异常微环境及一系列细胞因子的作用下,白血病细胞表面可高表达CD95L,并可通过CD95- CD95L途径诱导CD+95的T细胞凋亡,降低其GVL效应,从而逃逸机体的免疫应答.为减少供者T细胞的凋亡进而提高其GVL效应,本课题构建了针对小鼠CD95基因596位点的锤头状核酶,将其导入小鼠脾脏T细胞,观察该核酶对T细胞凋亡及增殖的影响,探索提高T细胞GVL作用的新途径.
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低剂量辐射诱导小鼠脾脏细胞凋亡的适应性反应
低剂量辐射可诱导广泛的适应性反应,适应性反应既可发生在整体照射,也可发生在离体照射之后;既可发生在体细胞,也可在生殖细胞中出现.
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低剂量辐射诱导蛋白对紫外线、电离辐射细胞损伤的保护作用
本研究通过直接提取低剂量辐射(LDR)诱导蛋白并观察其对紫外线、电离辐射所造成细胞损伤的保护作用。 一、实验方法 昆明小鼠随机分成非照射组和照射组,分别在20℃~24℃条件下接受0 cGy及10 cGy的γ射线照射,照射后2 h颈椎脱臼致死,无菌条件下取出脾脏,制成单细胞悬液,加蒸馏水以溶解红细胞,离心后按每6×107脾细胞2 ml比例加入含PMSF 4℃0.01 mol/L PBS,在冰浴下超声破碎脾脏细胞,破碎液在高速冷冻离心机上离心,上清液即为小鼠脾脏细胞蛋白提取液及含有LDR诱导蛋白的提取液,4℃冷藏待用。 取小鼠新鲜脾脏,制成RPMI 1640单细胞悬液,培养瓶培养细胞,各培养瓶装含10%小牛血清之RPMI 1640培养基2 ml,脾细胞悬液0.2 ml(脾细胞2×106个),接受UV(照射2 min,实测紫外线辐照强度为460 μW/cm2)或电离辐射损害(4 Gy)后分3组培养,分别加0.01 mol/L PBS、小鼠脾脏细胞蛋白提取液及含有LDR诱导蛋白的提取液0.1 ml,加3H-TdR20 μl,培养6 h、细胞收获、制膜后测放射线强度。
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蓝萼甲素对小鼠脾细胞内游离钙离子浓度的影响
蓝萼甲素是由唇形科香茶菜属植物香茶菜Rabdosia amethystoieds(Benth.)Hara中分离提取出的二萜化合物.前期的实验研究表明,香茶菜能显著抑制细胞免疫反应而增加体液免疫反应.应用药理与化学密切合作的研究方法,以活性评价为导向,对香茶菜影响免疫功能的活性物质进行追踪分离,获得了具有免疫活性的化学单体蓝萼甲素.在对小鼠脾细胞增殖影响的实验中,观察到蓝萼甲素对伴刀豆蛋白A(ConA)和脂多糖(LPS)诱导的小鼠脾脏淋巴细胞增殖以及混合淋巴细胞培养反应具有抑制作用[1].为进一步探讨蓝萼甲素对免疫功能的影响,本实验应用钙荧光指标剂Fura-2/AM测定小鼠脾脏淋巴细胞内游离钙离子浓度,以观察蓝萼甲素对其的影响.
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树突状细胞与血液系统肿瘤免疫治疗研究进展
树突状细胞(Dendritic cell,DC)是1973年由Steinman首先在小鼠脾脏中发现,后来Vanvoohis在人外周血液中也发现这种细胞.树突状细胞(DC)是一类专职性的抗原提呈细胞(APC),是目前所知抗原呈递能力强的APC,是自体、异体混合淋巴细胞反应中重要的刺激细胞,因其具有膜样或树突状突起而得名.在移植免疫和抗肿瘤免疫中,DC发挥重要作用[1].近年来,DC的相关研究受到广泛关注,特别是DC参与细胞毒性 T细胞抗肿瘤免疫作用方面的研究取得了一些重要进展,为DC介导的肿瘤免疫治疗提供了有效途径.现着重就DC的生物学特性及其在血液系统肿瘤疾病免疫治疗方面的研究作一综述.
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大枣多糖对小鼠脾脏组织结构的影响
1 材料与方法1.1 药品与试剂大枣:市购,产地:山西稷山.环磷酰胺:江苏恒瑞医药股份有限公司,批号06022221.乙醇,二甲苯,石蜡.
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亚致死剂量γ射线照射后小鼠脾脏CD95阳性淋巴细胞变化规律的研究
[吴玮等.中华放射医学与防护杂志,1997,17(5):305]目的:观察γ射线照射后小鼠脾脏淋巴细胞凋亡的变化规律与CD95(Fas)表达的关系.方法:采用PI染色及双荧光流式细胞术研究不同剂量γ射线照射后不同时间,小鼠脾脏淋巴细胞凋亡及CD95表达的规律.结果:小鼠脾脏淋巴细胞对不同剂量照射的凋亡敏感性差异有显著性,4 Gy照射后凋亡率高(在2~6 Gy之间观察),淋巴细胞表面Fas的表达随照射后细胞凋亡率的变化而改变.结论:脾脏淋巴细胞在辐射后表现出明显的Fas介导的凋亡,B细胞较T细胞具有更高的辐射凋亡敏感性.
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小红参对正常人外周血T淋巴细胞的增殖反应研究
茜草科植物小红参[Rubia yunnanesi(Franch) Diels]是茜草科茜草属植物云南茜草的根,我们过去的研究表明,一定浓度的小红参体内给药(腹腔注射)能抑制小鼠脾脏T细胞增殖反应及其产生白介素(IL)-2的能力,但对小鼠脾脏B细胞增殖反应无影响[1].小红参的化学成分复杂,主要有蒽醌类、乔木烷型三萜类、环已肽配糖体、β-谷甾醇等成分[2-4].为了解其有效作用成分,我们观察了小红参提取物蒽醌类及三萜类体外给药对刀豆蛋白A(ConA)诱导的正常人外周血T淋巴细胞增殖反应的影响.
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铅暴露对机体免疫功能的影响
近几年来,人们进一步认识到铅不仅具有神经毒性,而且还具有免疫毒性。许多动物实验及临床报告均已证实,铅暴露能削弱机体的抵抗力,使机体对细菌、病毒感染的易感性增加。同时临床上也发现,铅暴露可使自身免疫功能紊乱而导致某些自身免疫性疾病。近研究表明,0.483μmol/L的血铅浓度虽然不足以引起临床症状,但已能损害免疫系统[1]。本文就近几年来关于铅暴露对机体免疫功能的影响作一综述。铅暴露对T淋巴细胞的影响 T淋巴细胞(TL)依其膜表面CD分子的差异而分为CD+4的Th细胞和CD8+的Ts及Tc细胞(CTL)。Undeger[2]等检测了25名蓄电池厂工人的静脉血T淋巴细胞,发现CD4+T细胞显著下降,CD8+T细胞无明显改变。Fischbein[3]等检测了51名射击指导的血铅和免疫功能,也证实了长期铅暴露使CD4+T细胞绝对数和相对数都明显减少,CD4+与CD8+T细胞比例显著下降。长期铅暴露对CD4+T细胞的抑制,可能与铅对免疫器官的抑制有关。Kishikawa[4]等报道,将BALB/C小鼠通过饮水暴露于2nM的醋酸铅溶液中,3周后,肌注李斯忒菌作为抗原诱导,发现小鼠胸腺发生了严重萎缩,胸腺中的CD4-、CD8-、CD4+和CD8+细胞下降,同时,小鼠脾脏重量及脾脏中T淋巴细胞数也显著下降。
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调节性B细胞的研究进展
B细胞主要通过产生抗原特异性抗体、辅助诱导CD4+T细胞活化发挥正向免疫调节作用[1].然而近年动物试验研究表明B细胞可以负向调节免疫反应[2,3],这类B细胞被称为调节性B细胞,并发现缺乏调节性B细胞会导致自身免疫性脑脊髓膜炎、慢性结肠炎、接触性过敏性皮炎、类风湿性关节炎、非肥胖型小鼠糖尿病等疾病的症状恶化.调节性B细胞主要通过产生白细胞介素10(IL-10)或转化生长因子β1(TGF-β1)等细胞因子调节免疫系统.其中产生IL-10的B细胞被称为B10细胞,而占成年小鼠脾脏B细胞1%-3%的CD19hiCD1dhiCD5+B细胞产生的IL-10占B细胞产生IL-10的大部分[4].
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弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究
用pVAC-GRA4真核表达重组质粒免疫小鼠,观察其诱导的免疫应答及对弓形虫感染的保护性作用.大量制备pVAC-GRA4真核表达重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠三次,以pVAC空质粒及不经任何处理的空白组为对照.于末次免疫4周后每组各取5只作免疫指标测定(包括MTT法测定小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性、间接免疫荧光法测定T淋巴细胞亚群数目、双夹心ELISA法测定细胞因子IFN-γ及IL-4的含量、间接ELISA法测定IgG抗体滴度),其余的作攻毒试验后观察小鼠存活情况.脾淋巴细胞增殖各组间无显著差异(P>0.05);T细胞亚群分析,pVAC-GRA4组CD3+CD4+T细胞无明显改变(P>0.05),CD3+CD8+T细胞数明显增加(与pVAC对照组比P<0.05,与空白对照组比P<0.01),其CD3+CD4+/CD3+CD8+比值也较空白对照组明显降低(P<0.01);免疫鼠细胞因子IFN-γ及IL-4检测,pVAC-GRA4免疫组IFN-γ比对照组略高,但差异不显著(P>0.05),而IL-4的检测值各组间无明显变化(P>0.05);pVAC-GRA4组虽可诱导产生GRA4蛋白抗原特异性的IgG抗体,但抗体滴度不高;抗攻击感染结果,pVAC-GRA4免疫组小鼠的存活率明显高于两个对照组,其死亡小鼠的平均存活天数与空白对照组相比,差异显著(P<0.05).用pVAC-GRA4重组质粒DNA免疫小鼠,可诱导产生以细胞免疫为主的免疫应答及对弓形虫RH强毒株攻击感染的部分保护性作用.
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贝氏柯克斯体特异的PCR检测实验感染小鼠
用10 ID50的贝氏柯克斯体新桥株感染Balb/c小鼠,感染后第2、3、4、5、7、14、21、28天分别解剖小鼠取脾脏提取DNA,用贝氏柯克斯体特异的套式PCR对脾脏DNA样本做PCR扩增.结果从感染第5和7天的小鼠脾脏DNA样本中扩出明显的贝氏柯克斯体特异DNA带(阳性),而从第3和14天的脾脏DNA样本中扩增目的DNA为弱阳性,其它时间获得的脾脏DNA样本中均未检出特异DNA带(阴性).检测结果提示感染早期立克次体进入小鼠脾脏繁殖,在感染后的5~7天达到高峰,而14天后脾脏贝氏柯克斯体的量显著减少;研究结果证明该套式PCR具有很高的特异性和敏感性,可用于贝氏柯克斯体感染的早期诊断.
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贝氏柯克斯体30kDa外膜蛋白基因表达及重组外膜蛋白免疫保护性的研究
研制贝氏柯克斯体30kDa重组外膜蛋白和分析该重组蛋白的免疫保护作用.将克隆贝氏柯克斯体30kDa外膜蛋白基因与原核表达载体pQE30重组,用重组质粒转化大肠杆菌后用IPTG诱导转化菌表达重组蛋白;用纯化的重组蛋白免疫小鼠2次,用IFA和ELISA检查免疫小鼠的特异性抗体,以及用重组蛋白体外刺激小鼠T淋巴细胞增殖;免疫4周后,用柯克斯体毒株攻击免疫小鼠,攻毒后第7d,小鼠的主要脏器作病理学检查和柯克斯体量测定.(1)贝氏柯克斯体30kDa外膜蛋白基因在大肠杆菌细胞内表达,产生的重组蛋白约占全菌蛋白的14.6%,免疫印迹显示该重组蛋白能与贝氏柯克斯体感染小鼠血清反应.(2)ELISA检测出免疫小鼠血清中有高滴度的抗重组外膜蛋白抗体,免疫小鼠的脾淋巴细胞经重组外膜蛋白刺激后,细胞增殖水平显著高于非免疫小鼠.(3)免疫小鼠的肺、肝、脾,无明显病变,仅个别小鼠脾脏存在少量柯克斯体,而非免疫小鼠的肺、肝、脾病变十分明显,脾脏明显肿大并含有大量的柯克斯体.贝氏柯克斯30kDa重组外膜蛋白诱导小鼠产生抗贝氏柯克斯体的体液和细胞免疫应答能有效地抵御贝氏柯克斯体的感染.
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狼毒大戟水浸液对L615白血病小鼠巨噬细胞产生的MΦ-CF及T淋巴细胞转化率的作用
狼毒大戟(Euphorbia Fisheriana Stead)对多种实体瘤具有明显抑制作用,可显著增加L615白血病小鼠的生命延长率.为探讨狼毒大戟对染毒小鼠脾脏免疫功能的作用,本文报告狼毒大戟对T淋巴细胞转化率和巨噬细胞产生毒性因子影响的初步研究结果.
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胃癌抗原特异性树突状细胞疫苗的抗瘤效应
我们利用液氮冻融提取胃癌细胞抗原刺激小鼠骨髓来源树突状细胞(DCs)制备肿瘤疫苗,进而诱导小鼠脾脏淋巴细胞制备肿瘤抗原特异细胞毒性淋巴细胞(CTLs),应用于胃癌裸小鼠皮下模型,探讨其多方面抗胃癌效应.
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紫金胶囊对小鼠脾脏淋巴细胞转化的影响
目的:探讨紫金胶囊对哺乳动物免疫功能的影响.方法:将小鼠脾脏制备成细胞悬液,经培养后制成淋巴细胞涂片,镜检并计算淋巴细胞转化率.结果:小剂量紫金胶囊能显著提高小鼠淋巴细胞转化率,但中、高剂量的该药对淋巴细胞转化无显著影响.结论:小剂量的紫金胶囊能促进淋巴细胞转化,增强机体的免疫功能.
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树突状细胞在榄香烯复合瘤苗主动免疫保护效应中的作用
目的:树突状细胞(DC)是体内抗原提呈功能强的抗原提呈细胞(APC),是唯一能提呈抗原给初始型T细胞使之活化扩增为效应细胞的专职APC.DC在榄香烯复合瘤苗主动免疫保护效应中的作用如何,怎样提高其作用水平值得探讨.方法:以HCa-F或L615榄香烯复合瘤苗(H-TCV或L-TCV)、H-TCV可溶性上清(TH)、CP免疫小鼠,分离制备其脾脏DC,在体外分别用相应瘤细胞上清(H或L)和瘤苗上清(TH或TL)冲激后,以MTT法检测其诱导同系小鼠脾不粘附细胞增殖的能力.结果:1.正常小鼠DC在体外可诱导同系小鼠脾脏不粘附细胞增殖,经H/L、TH/TL冲激后此作用增强,其中尤以TH/TL冲激的DC效果好,(P<0.05).同法,对H-TCV/L-TCV、H/TH免疫鼠DC的研究也得到相似结果,而且经免疫鼠DC刺激得到的增殖指数高于正常鼠相应DC的,其中H-TCV/L-TCV免疫鼠DC体外经TH/TL再冲激后其诱导作用较正常鼠初次冲激的相应DC的效果为强(P<0.05);同样,H/TH免疫鼠DC体外分别经H和TH再冲激后较正常对照鼠初次冲激的相应DC的效果为强(P<0.05).2.流式细胞仪检测显示,正常鼠、H、TH免疫鼠的DC及其经H、TH冲激后的DC与同系正常小鼠不粘附细胞共育,均能使增殖状态的为粘附细胞比例增加.3.正常鼠脾脏DC及其用H或TH冲激的DC的诱导作用可因CP免疫而增强(P<0.01),其中尤以对TH冲激的DC的增强作用显著.结论:榄香烯复合瘤苗或其上清免疫和冲激DC,可增强其诱导同系小鼠脾不粘附细胞增殖的作用;CP可进一步增强DC的这一作用.本研究也为DC瘤苗的制备与应用提供了一定的实验依据.