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TNF-α多肽抑制剂的合成及初步活性筛选
目的 初步探究TNF-R1的胞外区第四功能域CRD4衍生多肽对TNF-α与受体TNF-R1结合过程的影响.方法 以CRD4的部分序列为模板设计衍生小肽片段,采用生物活性酶联免疫吸附测定法(BioLISA)观察所合成的小肽对于TNF-α与其受体TNF-R1结合情况的影响.结果 小肽Pep 3在浓度分别为20,40,60,80,100,120μM可剂量依赖性抑制TNF-α与其受体TNF-R1的结合;然而肽段Pep 1和Pep 2均未表现明显的抑制效果.结论 TNF-R1的CRD4的A1模块衍生小肽Pep 3能够有效抑制TNF-α与其受体TNF-R1结合,提示该序列所在区域是影响TNF-α与其受体TNF-R1结合的关键部位.
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一种适用于短肽制备抗体的亲和纯化方法
在免疫组织化学检测过程中,抗体的纯度对于减少检测背景和假阳性起着关键作用.为了获得高纯度的抗体,亲和纯化的方法被广泛应用[1-3].为了研究某种特定基因编码产物的时空表达模式,可将基因的序列克隆到原核表达载体上,获得目的基因的原核表达蛋白,用于制备抗体进行免疫组化研究.
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小鼠体内的短肽能阻止肺癌中肿瘤的生长
近美国Wake Forest大学医学院的研究者通过一项新的动物研究在小鼠实验中发现了一种有效的癌治疗方法 ,能阻止肿瘤的生长并缩小肿瘤的体积.肺癌是目前世界范围内导致癌症死亡的首要原因,刊登在美国癌症研究协会<分子癌症治疗杂志>上的一项研究报道称,一种特殊的,叫作血管紧张素(1-7)angiotensin-(1-7)的肽,可通过抑制组织中血管生成来减少肺部肿瘤生长.
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针对大量噬菌体展示短肽序列的生物信息学分析策略的构建
目的 建立一种生物信息学分析预测方法,针对通过噬菌体展示技术获得的大量短肽信息,从中筛选出所需的目的 功能蛋白. 方法 对应用噬菌体展示技术筛选脂多糖刺激的人外周血单核巨噬细胞株(THP-1)细胞获得的1263个七肽序列进行去冗余分析,结合混洗算法和随机排列检验(RPT),统计非冗余七肽序列中特定三肽的丰度及其显著性.利用Clustal W软件对包含丰度具有显著性的三肽的七肽序列进行多序列比对分析,并根据氨基酸的性质,寻找特征性短肽,通过在线BLAST软件与SWISS-PROT蛋白序列数据库进行同源性分析,获得包含这些特征性短肽的已知蛋白,进一步应用SignalP和TMHMM软件预测其中的分泌蛋白和膜蛋白,并终获得候选蛋白. 结果 得到TNF-α、toll样受体6(TLR-6)等炎性反应相关的细胞因子和膜蛋白及其表位模拟肽,为脓毒症等炎性反应相关疾病的研究和治疗提供依据. 结论 建立了一种生物信息学分析预测方法,该策略的建立为通过噬菌体展示技术筛选得到的短肽序列的分析提供一个全新的平台.
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VEGF受体结合抑制肽的重组表达与活性分析
通过阻断肿瘤血管新生的相关因子与受体的结合抑制肿瘤血管的形成,已成为近年肿瘤治疗的重要研究策略.VEGF和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是促进血管内皮细胞生长重要的因子.本研究前期工作中已通过筛选噬菌体随机肽库,获得阳性克隆之一7P419(所带肽序列为GWYYDAX,X代表一特定氨基酸),该短肽具有明显的抑制VEGF的活性.本文将7P419与硫氧还蛋白Trx融合表达,检测该融合蛋白的抑制效果,并与人工合成肽7P419比较.
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HPV主要壳蛋白L1的B细胞共同表位短肽免疫原性的研究
人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一类无包膜的环状小DNA病毒,可引起广泛的人类上皮细胞的增殖性病变.为了有效预防这类病毒的感染和传播,世界各国都在开展大量HPV基因工程疫苗的研究.广泛研究证实,HPV主要壳蛋白L1和次要壳蛋白L2存在中和表位.L1具备在单独表达体系中自行装配、形成病毒样颗粒,在一定程度上能够替代天然病毒,诱导产生针对天然病
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HPV L1 C-末端保守氨基酸序列的免疫生物学性质的探讨
目的 探讨HPV L1 C-末端保守氨基酸序列的免疫生物学性质.方法 以合成HPVL1保守序列短肽、点突变该序列中酰胺化酶作用位点后的短肽以及15个氨基酸残基长的该序列交错合成的4个小肽免疫动物.采用T细胞增殖实验确定各肽是否含有T细胞表位;以ELISA方法确定各肽有无B细胞表位及有效免疫位点.结果 不同肽免疫鼠T细胞增殖实验差异无统计学意义(P>0.05),两短肽免疫兔血清中IgG抗体滴度显著强于4个小肽,但兔和鼠分泌物中均未测出抗体IgG.两短肽的免疫血清对相应短肽的反应明显强于交叉反应的强度.原序列短肽的免疫血清对来自于该短肽的N-末端序列短肽的反应略强,而点突变酰胺化酶作用位点后短肽的免疫血清对C-末端序列的短肽反应略强.结论 HPV L1保守序列短肽和点突变酰胺化酶作用位点后短肽在诱导体液免疫的能力方面相似,但在交叉免疫反应性及有效免疫位点方面存在差异;两短肽的免疫原性显著强于4个小肽.
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短肽型肠内营养制剂对肠黏膜炎大鼠炎症反应和免疫功能的影响
目的 探讨短肽型肠内营养制剂(PBEN)对肠黏膜炎大鼠机体炎症反应和免疫功能的影响.方法 将48只SD雄性大鼠随机分为6组,每组8只:基础饲料组(BFG)、短肽型肠内营养制剂组(PBENG)、整蛋白型肠内营养制剂组(IPENG)、甲氨蝶呤(MTX)+基础饲料组(MTX+BFG)、MTX+短肽型肠内营养制剂组(MTX+ PBENG)和MTX+整蛋白型肠内营养制剂组(MTX+IPENG).在第0天和第6天,MTX+BFG、MTX+PBENG和MTX+ IPENG分别腹腔注射10 mg/kgMTX,造成大鼠肠道持续损伤.从第1天开始,BFG和MTX+ BFG饲喂基础饲料,PBENG和MTX+PBENG饲喂PBEN,IPENG和MTX+ IPENG饲喂整蛋白型肠内营养制剂(IPEN),每组大鼠每天按1.80 kJ/g给予膳食.在第11天处死全部大鼠,HE染色观察小肠组织病理学变化,比色法测定小肠组织中髓过氧化物酶(MPO)和诱导性一氧化氮合酶(iNOS)活力以及一氧化氮(NO)含量、胸腺指数和脾腺指数,ELISA方法检测血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM.结果 正常大鼠进食基础饲料或不同营养制剂后各指标间差异无统计学意义.MTX造模导致了大鼠肠黏膜严重损伤,MTX+ BFG各项指标与BFG之间差异有统计学意义(均P<0.05).给予PBEN后,MTX+ PBENG的小肠损伤评分(Chiu评分,2.3 ±0.69)以及小肠组织中MPO[(2.30±0.42) U/g组织]、iNOS活力[(0.37±0.06) U/mg蛋白]较MTX+BFG大鼠[2.96 ±0.75、(2.98±0.23) U/g组织、(0.44±0.10) U/mg蛋白]显著降低(P =0.003,P=0.040,P=0.030);MTX+ PBENG血清IgG[(7.45±0.67) g/L]和IgA [(0.46±0.03) g/L]均较MTX+BFG[(6.57±0.48) g/L与(0.42±0.04) g/L]明显改善(P=0.015,P=0.021);而NO和IgM含量差异无统计学意义(P =0.597,P=0.160).MTX+ IPENG与MTX+ BFG各指标间差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 PBEN可以明显减轻肠黏膜炎大鼠的炎症反应,并提高机体免疫功能.
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人骨肉瘤组织血管特异性亲和肽的筛选和测序分析
噬菌体呈现技术是一种高效的筛选体系.本研究旨在以人骨肉瘤组织血管为靶,对噬菌体随机肽库进行淘筛,阳性克隆经过测序分析,得到保守短肽序列,为骨肉瘤的靶向化疗打下基础.
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胃癌耐药细胞特异性结合小肽对多药耐药的影响
目的 研究环九肽(SY1)与胃癌耐药细胞(SGC7901/VCR)的结合特性及其对胃癌耐药性的逆转作用.方法 将细胞分为SGC7901和SGC7901/VCR 2组培养.以无关噬菌体、阴性噬菌体为对照组,用免疫荧光技术检测含有SY1的阳性噬菌体与SGC7901/VCR的结合特性;通过体外药敏试验(MTT)分析含有SY1的阳性噬菌体和化学合成的SY1对SGC7901/VCR耐药性的改变;应用流式细胞仪检测在SY1作用下SGC7901/VCR细胞内阿霉素(ADM)的蓄积和储留.结果 (1)免疫荧光分析的结果显示,含有SY1的阳性噬菌体能够结合于SGC7901/VCR的膜表面,而不与亲本细胞SGC7901结合,无关噬菌体和阴性噬菌体均不与SGC7901/VCR结合,表明SY1可与SGC7901/VCR特异性结合.(2)MTT试验结果显示,在含有SY1的阳性噬菌体及化学合成的SY1的作用下,SGC7901/VCR的存活率显著降低(P<0.05),其对长春新碱的耐药性降低.(3)在化学合成的SY1作用下,SGC7901/VCR细胞内ADM的储留蓄积高于对照组(P<0.05).结论 利用环七肽库差减筛选得到的环九肽SY1不仅能与SGC7901/VCR特异性结合,而且可部分逆转其对长春新碱的耐药性.这可能为胃癌多药耐药的逆转提供新思路.
关键词: 胃肿瘤 SGC7901/VCR细胞 逆转耐药 短肽 -
成骨生长肽羧基端衍生物G35I对骨代谢影响的初步研究
成骨生长肽(osteogenic growth peptide,OGP)是一个含有14个氨基酸的短肽.它是基质细胞有丝分裂原,可以刺激骨形成和造血[1-3].含有羧基末端10-14氨基酸序列的OGP片段是OGP的生理活性部分[4].G35I是含有5个氨基酸的成骨生长肽羧基末端的衍生物.在下述实验初步探讨G35I在体内外对骨代谢的作用.
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一种新型脂肽的抗菌活性研究
脂肽是一种两性分子,含有短肽(亲水)和脂肪酸(疏水)两部分,某些微生物在生长过程中合成脂肽,这些脂肽表现出多种生物活性.脂肽在工农业生产中具有广阔的应用前景.
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白细胞介素-1β对Hacat细胞诱导产生β防御素-2表达的研究
人类的皮肤和黏膜存在正常菌群,但正常状态时这些部位不会发生感染,其原因除了与机械屏障作用,IgA的分泌,正常菌群对致病菌的制约作用有关,还发现从人的角质形成细胞和体液中发现有内源性抗菌短肽--β防御素的存在有关.
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短肽型肠内营养剂在风湿性心脏病合并心脏恶液质患者肠内营养应用的效果评价
我科自2006年来应用短肽型肠内营养剂在风湿性心脏病合并心脏恶液质患者进行围手术期肠内营养,取得良好效果.
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喉鳞癌靶向肽的鉴定
目的 筛选出与Hep-2细胞株特异结合的短肽,作为喉癌靶向治疗的载体. 方法 采用ELISA法鉴定噬菌体与Hep-2细胞的结合活性;通过免疫荧光、流式细胞学检测技术检测鉴定F2噬菌体阳性克隆与喉癌细胞结合的特异性. 结果 ELISA分析鉴定显示5个阳性克隆能与Hep-2细胞特异结合,其中F2噬菌体克隆对喉癌细胞的结合靶向性明显高于人正常喉黏膜上皮细胞;用流式细胞仪进行定量分析,其结果显示F2与Hep-2的结合率为(53.77±4.2)%,显著高于与人正常喉黏膜上皮细胞的结合率[(12.58±3.2)%,P<0.05];免疫荧光显色证实,FITC-F2能特异性地与喉癌细胞结合. 结论 F2能与喉癌细胞特异性的结合,其可能成为喉癌靶向治疗的载体.
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1例高敏体质糖尿病患者胰岛素皮肤过敏试验和脱敏疗法的护理
胰岛素是治疗糖尿病的有效药物,其分子结构为蛋白质短肽.在临床应用中,出现胰岛素过敏反应者虽然少见,但一旦发生,将产生各种不良后果.目前临床上采用胰岛素脱敏治疗的方法以减轻或消除由胰岛素所致的过敏反应,使患者能逐步接受胰岛素治疗.本文回顾了我院1例高敏体质糖尿病患者在进行胰岛素强化治疗之前进行的胰岛素皮肤过敏试验与脱敏治疗的护理经验,现报道如下.
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抗Ⅱ型胶原短肽(260-272)抗体ELISA测定方法的建立与初步应用
目的 了解类风湿关节炎(RA),其他自身免疫病和健康对照组血清抗Ⅱ型胶原短肽,即CⅡ(260-272)抗体水平,探讨其在RA疾病诊断和病情监测中的价值.方法 将合成的CⅡ(260-272)短肽与牛血清白蛋白(BSA)耦联得CⅡ(260-272)-BSA复合物,用其作为抗原包被建立抗CⅡ(260-272)抗体的ELISA测定方法,经方法学考核后,对临床病例标本检测结果进行评价.结果 建立的抗CⅡ(260-272)抗体的ELISA法实验结果具有较好的稳定性和特异性,其批内和批间变异系数分别为8.4%和9.6%,特异阻断抑制率高达76.3%.临床检测结果发现抗CⅡ(260-272)抗体在RA中的阳性率为75.0%(30/40),显著高于其他自身免疫病和健康对照组(P<0.01).以测定吸光度(A) 0.213为临界值时,抗CⅡ260-272抗体对RA诊断特异性91.0%,阳性预测值63.8%,阴性预测值94.5%,阳性似然比8.33,阴性似然比0.275,Youden指数0.66.ROC曲线分析结果显示该抗体对RA诊断准确度为中等偏上水平(AUCROC值=0.890).未发现抗CⅡ(260-272)抗体与类风湿因子(RF)水平相关(在13例RF阴性RA患者中,该抗体阳性10例,阳性率76.9%),但抗CⅡ(260-272)抗体与抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体显著相关(P<0.01),且该抗体水平随患者临床症状的改善有逐渐降低趋势.结论 成功建立抗CⅡ(260-272)抗体ELISA测定方法,用其检测抗CⅡ(260-272)抗体水平可作为RA疾病诊断和病情监测的一种新的参考指标.
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噬菌体肽库在筛选及鉴定高转移性肝癌特异性结合肽中的应用及其意义
目的:探讨噬菌体环七肽库在筛选与肝癌高转移细胞株HCCLM3特异高效结合的短肽中的应用,为进一步探索肝癌转移的分子机制和寻找肝癌转移标志物奠定基础.方法:以人肝癌高转移细胞株HCCLM3为靶细胞、人肝癌低转移细胞株SMMC7721为吸附细胞对噬菌体环七肽库进行4轮差减筛选,采用ELISA方法进一步筛选出与HCCLM3细胞高度亲和的阳性克隆(即实验组A450nm值高于对照组3倍以上),并利用免疫细胞化学方法鉴定噬菌体阳性克隆的特异性并测序.结果:经过4轮陶筛后,噬菌体在筛选靶细胞上出现明显富集,且逐轮提高(P<0.05);利用ELISA法对筛选后随机挑取的20个噬菌体克隆进行初步鉴定,得到6个能与肝癌细胞HCCLM3亲和度较高的阳性克隆(C4、C6、C7、C10、C11和C17);通过免疫细胞化学染色鉴定阳性克隆靶向肝癌细胞HCCLM3的特异性,与对照组比较,C7噬菌体对高转移潜能肿瘤细胞具有较高特异性(P<0.05);测序显示6个阳性克隆氨基酸序列无同源性.结论:利用噬菌体环七肽库筛选得到与人肝癌高转移细胞株HCCLM3具有较高亲和力的多肽.
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防御素的研究进展
哺乳动物防御素为机体表达的抗微生物短肽,分α、β和θ 3类,均具有直接杀菌/抑菌或抵抗某些有包膜病毒的活性,参与机体的免疫.它的发现为临床寻求新型抗微生物制剂提供了思路.
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068 合成短肽与人类相容性佐剂诱导的抗HIV-1蛋白的CTL应答