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癌胚抗原癌抗原125 及神经元烯醇化酶对良性恶性胸腔积液的诊断价值
胸腔积液临床常见,可分为良性和恶性,其预后截然不同,但两者的鉴别诊断有时相当困难.如何提高恶性胸腔积液的检出率是基层医院有待解决的问题.本文探讨癌胚抗原(CEA)、癌抗原125(CA125)和神经元烯醇化酶(NSE)3种肿瘤标志物联合检测对良恶性胸腔积液的鉴别诊断意义.
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激活低氧诱导因子-1的转导通路
低氧诱导因子-1(HIF-1)与心血管缺血、肺高压和癌症等有密切关系,是在低氧的肝细胞癌细胞株hep3B细胞的核提取物中发现的,是一种结合于促红细胞生成素(EPO)基因增强子的寡核苷酸序列的特异蛋白.据报道,许多类型的细胞都可被低氧诱导而产生效应,其中HIF-1起主要作用,提示细胞中普遍存在一个低氧转导机制.一些转录因子,如活化蛋白-1(AP-1)、核因子-κB(NF-κB)、HIF-1[1]都与低氧应激反应有关.哺乳动物细胞对缺氧的适应性反应主要是表达HIF-1,这一过程与某些蛋白基因如醛缩酶A、烯醇化酶α、乳酸脱氢酶LDH、丙酮酸激酶和葡萄糖转移酶-1(GLUT-1)的表达有密切关系[2].
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川芎嗪治疗妊娠期肝内胆汁淤积症所致新生儿脑缺氧损伤的疗效分析
妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)是一种严重的妊娠并发症,对围生儿可导致流产、早产、胎儿宫内发育迟缓、胎儿宫内窘迫.2003年1月-2004年10月我院收治中重度ICP母亲所产新生儿随机分为两组,分别予以常规治疗与加用川芎嗪注射液治疗,并比较两组治疗前后血清中烯醇化酶(neurone specific enolase,NSE)及脑型肌酸激酶(BB isoenzyme of creatine kinase,CK-BB)变化,现报道如下.
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动脉粥样硬化性脑梗死患者血清HCY、NSE与hs-CRP测定的临床意义
近年来实验研究表明,高同型半胱氨酸(HCY)血症可能是造成和加速动脉粥样硬化的重要的独立危险因素[1],神经烯醇化酶(NSE)是主要存在于大脑神经元和神经内分泌细胞内并参与糖酵解的特异性酶[2],超敏C-反应蛋白(hs-CRP)是预测未来心血管危险有价值的炎症标志物[3].为此我们测定了139例动脉粥样硬化性脑梗死患者的HCY、NSE、hs-CRP的水平,分析其与疾病发展的关系.报告如下:
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微小巴贝斯虫烯醇化酶蛋白主要特征与抗原表位的生物信息学分析
目的 运用生物信息学方法分析微小巴贝斯虫烯醇化酶(BmEno)基因编码蛋白的主要特征和抗原表位.方法 运用ORF Finder、PROSITE、ProtPar am、SignalP、TMpred、SOSUI、Motif Scan、Bcepred、HNN等生物信息学在线分析软件,结合DNASTAR生物信息学分析软件,预测BmEno蛋白的开放阅读框、特征结构域、理化性质、信号肽、跨膜区、翻译后修饰位点、可溶性、亲水性、表面可及性、二级结构和抗原表位.结果 该蛋白由438个氨基酸组成,在349-362位存在烯醇化酶的特征结构域,分子式为C2098H3366N570O648S18,分子质量单位为47.5203 ku,等电点理论值为5.98,有25个翻译后修饰位点,10个亲水性参数得分≥1.9的区域,6个柔韧性参数得分≥2.0的区域,18个表面可及性参数得分≥1.9的区域,7个潜在的B细胞抗原表位,15个潜在的T细胞抗原表位,为可溶性蛋白.结论 微小巴贝斯虫烯醇化酶蛋白为可溶性蛋白,有多个抗原表位,具有潜在的免疫原性,可以作为微小巴贝斯虫的疫苗候选抗原.
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日本血吸虫烯醇化酶的表达与诊断价值研究
目的 制备可溶性表达的日本血吸虫烯醇化酶,观察其免疫学特性及免疫诊断价值. 方法 采作RT-PCR方法反转录合成编码日本血吸虫烯醇化酶的cDNA片段,亚克隆到表达质粒pET28a(+)中构建重组表达质粒.将重组表达质粒转化到大肠埃希菌BL21中,在不同条件下诱导表达可溶性重组烯醇化酶(rSj Enolase),采用镍亲和层析法纯化rSj Enolase.以rSj Enolase免疫小鼠,制备抗血清,采用Western blot法分析rSj Enolase的免疫反应性与特异性.以rSj Enolase为抗原,建立检测抗Sj Enolase抗体IgG的ELISA方法,并以此方法对血吸虫病患者、其他寄生虫病患者及健康人血清进行检测,观察检测抗Sj Enolase抗体IgG用于血吸虫病诊断的敏感性与特异性;对治疗前及治疗后不同时间点的同一患者配对血清进行检测,观察治疗前、后患者血清中抗Sj Enolase抗体IgG水平的动态变化,并观察该方法的疗效考核价值. 结果 成功克隆编码Sj Enolase基因,并在18℃低温条件下成功表达可溶性rSj Enolase蛋白,采用镍亲和层析进行纯化rSj Enolase蛋白免疫小鼠获得效价大于1∶100 000的抗血清.Western blot显示rSj Enolase蛋白可被血吸虫病患者血清识别,而不与健康人血清反应;抗rSj Enolase鼠血清能识别血吸虫成虫抗原(AWA)和排泄分泌物(ESA)中的天然SjEnolase分子.rSj Enolase不被曼氏裂头蚴病患者血清,华支睾吸虫病患者及卫氏并殖吸虫病患者血清识别,ELISA显示以rSj Enolase为抗原检测血吸虫感染者血清中的抗Sj Enolase特异性抗体的敏感性为93.71%,特异性为97.92%,与华支睾吸虫患者血清的交叉反应率为8.5%,与弓形虫病患者血清的交叉反应率为0.治疗后3个月的血吸虫病患者血清抗Sj Enolase抗体IgG水平迅速下降,阴转率达58.92%. 结论 可溶性重组SjEnolase表达成功.该蛋白具有较高的抗原特异性,以此为抗原检测抗Sj Enolase抗体IgG具有血吸虫病诊断价值.
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白色念珠菌烯醇化酶诱导产生中性粒细胞外网
目的 通过重组白色念珠菌烯醇化酶(enolase),研究其对人中性粒细胞的作用.方法 采用分子克隆法,构建质粒、克隆、表达、纯化白色念珠菌重组enolase,密度梯度离心法提取人中性粒细胞,通过2,7-二氯二氢荧光素二醋酸酯(DCFH-DA)法、Sytox green染色和免疫荧光观察白色念珠菌重组enolase(500 nmol/L)对人中性粒细胞的刺激作用.中性粒细胞加入白色念珠菌SC5314(中性粒细胞:白色念珠菌=5:1)作为阳性对照组(SC5314组),未加刺激的作为阴性对照组.采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)及Tukey′s检验对数据进行统计分析.结果 成功得到重组enolase,分子量为46 kDa.重组enolase可以刺激人中性粒细胞产生细胞内活性氧(ROS), enolase组与SC5314组产生ROS的量均无明显差异.Sytox green对胞外DNA定量及免疫荧光观察,均显示重组enolase可以刺激人中性粒细胞产生中性粒细胞外网(NETs).NETs定量结果显示, enolase组[(11.0 ± 2.5)%]与SC5314组[(12.4 ± 2.0)%]在2 h时无明显差异(F=6.13,P=0.0886),在4 h时enolase组[(22.2 ± 2.0)%]显著低于SC5314组[(31.4 ± 3.1)%],差异有统计学意义(F=9.745, P=0.0370).结论 白色念珠菌enolase可以诱导人中性粒细胞形成NETs.
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侧脑室内少突胶质细胞瘤一例
患者男,30岁,头痛、头晕伴眼胀不适15 d入院.体检:双侧视乳头水肿,余无明显阳性体征.MR检查:左侧侧脑室体部不规则形肿块,并突入右侧脑室,大小约3.7 cm×4.1 cm×6.0 cm,T1WI呈等、高混杂信号,以等信号为主(图1),T2WI为稍高信号(图2),注入钆喷替酸葡甲胺(Gd-DTPA)后呈中等度强化(图3,4).MRI诊断:室管膜瘤.手术所见:经皮质造瘘进入侧脑室,见肿瘤包膜完整,质软,血供丰富,肿瘤与侧脑室外侧壁分界清楚,在右室间孔前外侧有粘连,手术完全切除肿瘤.免疫组织化学检查:神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)阳性,鞘磷脂碱性蛋白(MBP)阳性,S100阳性,突触素(SYN)阴性,神经元特异的烯醇化酶(NSE)阴性.病理诊断:少突胶质细胞瘤.
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神经元烯醇化酶对小细胞肺癌诊断的临床应用
小细胞肺癌至今没有找到一种特异度较高的诊断依据,肿瘤标记物的研究在肿瘤诊断、监测肿瘤复发与转移、判断疗效和预后等方面都有较大的实用价值[1].我们采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测了100例正常人、52例良性肺病患者、30例非小细胞肺癌患者和41例小细胞肺癌患者血清的神经元烯醇化酶(NSE)的含量,现将结果报道如下.
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脂联素、高敏C反应蛋白和神经元烯醇化酶在急性脑梗死预测中的临床意义
脂联素(adiponectin)是近年来新发现的由脂肪组织特异性分泌的脂肪细胞因子,具有抗动脉粥样硬化、抗高血糖及抗炎症等作用,它在能量代谢、血脂代谢及动脉粥样硬化形成的过程中发挥重要作用[1].
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第56例外伤-脾肿大-腹水-大网膜结节
病历摘要患者男,24岁.于腹部钝性损伤后1周出现腹痛不适、腹胀,2003年3月28日在当地医院就诊.B型超声及腹部CT检查仅发现脾肿大、中等量腹水,未见任何实质性或空腔脏器损伤表现,亦未见明显腹部肿块.腹穿见腹水呈淡血性,细胞学检查仅找到少量核异质细胞.胃镜和肠镜无任何异常发现.血癌胚抗原(CEA,正常值<5 μ g/L): 578.63 μg/L;CA19-9(正常值<37 kU/L):20 kU/L;甲胎蛋白(正常值<25μ g/L):28 μg/L.1周后来我院就诊,影像学检查亦无异常发现.腹水常规:红细胞(+++),腹水细胞学检查仅发现伴空泡状变性的巨噬细胞及少量炎症细胞.血清肿瘤标记物检查提示:CEA:156.2 μg/L;CA19-9:10.3 kU/L;组织多肽抗原(TPA,<1 μg/L):18.3 μg/L;CA72-4(正常值<6 kU/L):103.5 kU/L;神经元特异烯醇化酶(neuron-specific enolase, NSE) (正常值<13 μg/L):4.9 μg/L.在前述手段无法明确诊断的情况下,我们于2003年4月对患者实施了腹腔镜检查,术中见腹壁广泛灰白色结节样肿块,鹅卵石样平铺于腹壁,大肿块为10 cm×8 cm×3 cm大小,大网膜表面亦可见大量大小不等结节,盆腔广泛粘连而无法探查.当时鉴于该肿瘤已有腹腔内广泛播散,未行减瘤或切除性手术.术中切取一块1.5 cm×1.5 cm×1.0 cm大小的肿瘤组织送病理检查,术后病理诊断:促纤维增生性小圆细胞肿瘤(desmoplastic small round cell tumor,DSRCT).
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临床生化管的糖酵解研究
目的:临床生化管的糖酵解研究。方法:每隔两小时对患者血样用生化分析仪与血糖仪进行血糖检测,记录所做结果。结果:含有肝素锂抗凝剂的生化管,血标本中葡萄糖含量以每2h下降mmol/L,含草酸钾/氟化钠抗凝剂的血标本中葡萄糖含量则无明显降低。
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依达拉奉用于治疗大面积脑梗死的疗效观察
大面积脑梗死患者脑组织损伤严重,临床病死率、致残率高.梗死病灶中心坏死区及其周围的缺血半暗带神经元大量死亡,导致血烯醇化酶(NSE)含量增高.
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Western印迹法和免疫组化对肺癌神径内分泌分化标记物检测的比较
免疫组化在检测非小细胞肺癌(NSCLC)中神经内分泌(NE)分化的阳性率各家报道不一,如NSE从11%~100%.出现这种差别方法学是主要原因之一.Western印迹法(Western blot)在分子生物学研究中广泛用于微量蛋白水平的测定,但在肺癌组织中检测NE分化,文献报道不多.本文比较了Western印迹法及免疫组化法对肺癌组织中神经烯醇化酶(NSE)、嗜铬粒素A(CgA)和突触素(SYN)检测的优缺点.
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肝硬化患者血清神经元特异性烯醇化酶的检测及临床意义
目的:探讨神经元特异性烯醇化酶(neuron- specific enolase,NSE)在肝硬化患者中的意义.方法:以ELISA法对47例肝硬化患者的血清NSE进行检测,并对各Child-Pugh肝功能分级及不同程度食管静脉曲张组患者NSE水平进行了比较分析.结果:肝硬化组NSE[(26.452±10.5 81) ng/ml]显著高于慢性肝炎组[(12.127±5.673) ng/ml]及对照组[(1 0.196±3.237) ng/ml];肝硬化患者肝功能愈差,食管静脉曲张程度愈重者NSE水平愈高.结论:肝硬化患者NSE水平明显升高,且与肝功能损害程度、门体分流程度有关.
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白念珠菌烯醇化酶1的原核表达及多克隆抗体制备
目的 构建白念珠菌烯醇化酶1(eno1)基因的原核表达质粒并诱导其表达,制备其多克隆抗体. 方法聚合酶链反应(PCR)获取白念珠菌SC5314的eno1全长基因,克隆入原核表达载体pET30(a),转化感受态细胞E. coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后以亲和层析纯化重组蛋白并以SDS-PAGE和蛋白免疫印迹(Western blot)法鉴定. 用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备Eno多克隆抗体,间接酶联免疫吸附试验( ELISA)测定抗体效价, Western blot法鉴定其特异性. 结果 成功构建原核表达质粒pET30(a)-eno1,诱导后表达的重组蛋白相对分子质量约为50 000,主要以可溶性上清形式存在. 纯化制备的eno1多克隆抗体效价约为1:12 800 000,可与重组Eno反应. 结论 成功获得白念珠菌eno1重组蛋白并制备了该蛋白的多克隆抗体.
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肿瘤标志物测定对胸腔积液鉴别诊断的价值
肺癌胸膜转移是引起恶性胸腔积液常见的原因,癌胚抗原(CEA)、神经原烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白19(CYFRA21-1)是常用于诊断肺癌的三项肿瘤标志物.近年来我们常规检测胸腔积液中上述项目,将其用于良、恶性胸腔积液的鉴别诊断,以探讨胸腔积液中上述几项标志物的诊断价值.
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病毒性脑炎患儿脑脊液中NSE、IL-8和TNF-a检测的意义
病毒性脑膜炎是儿童期常见的一种中枢神经系统感染性疾病,患儿预后不良,因此,积极探求判断病毒性脑膜炎患儿病情和预后的指标具有重要意义.近年来笔者对病毒性脑膜炎患儿和非病毒性脑膜炎患儿脑脊液中神经元烯醇化酶(NSE)、白介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量进行了检测,以探讨其对判断病毒性脑膜炎患儿病情和预后的意义.
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新生儿缺氧缺血性脑病血清烯醇化酶和肌酸激酶及脑型同工酶的动态观察
目的探讨血清烯醇化酶(NSE)和肌酸激酶(CK)及脑型同工酶(CK-BB)在新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)中的变化及其意义.方法对2001年1月至2003年6月武汉大学人民医院36例HIE患儿,10例正常足月新生儿.在生后24h内、第3天、第7天分别取血,用ELISA法测定血清NSE,磷酸肌酸激酶法和电泳法测定血清中总CK及其CK-BB.结果 (1)36例HIE患儿血清NSE明显高于对照组;病情越重,NSE越高,两者比较差异有显著意义(P<0.01).NSE以生后24h内高,3~5d开始下降,7d左右轻度HIE组基本恢复正常,中、重度HIE组仍保持较高水平,两者比较差异有显著意义(P<0.01).(2)中、重度HIE组血清CK、CK-BB与对照组和轻度HIE组比较差异有显著意义(P<0.01),轻度HIE组与对照组比较差异无显著性(P>0.05).结论 (1)血清NSE、CK、CK-BB水平及动态变化与HIE脑损伤密切相关,脑损伤程度越重,其水平越高.(2)血清NSE是HIE脑损伤中出现早、灵敏的标志物,其变化对HIE具有更重要的早期诊断和预后判断价值.
关键词: 新生儿缺氧缺血性脑病 烯醇化酶 肌酸激酶 同工酶 -
进行性延髓麻痹患者血清中神经元特异烯醇化酶测定的意义
神经元特异性烯醇化酶(NSE)是主要存在于大脑神经元和神经内分泌细胞并参与糖酵解的特异性酶,当神经元损伤或坏死后,NSE从细胞内溢入脑脊液和血液.脑胶质细胞和其他神经组织中不含NSE,故NSE是检测脑内神经元损伤或坏死的客观指标[1-3].进行性延髓麻痹是脑桥和延髓的运动神经元变性疾病,其病情发展快,病程短,早期诊断缺乏特异性实验室检查.NSE能否作为进行延髓麻痹早期诊断及判断损失程度的敏感指标,我们测定了18例患者血清中NSE含量,现报告如下.