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病毒样颗粒技术的研究进展
病毒样颗粒( Virus-like Particles,VLPs),也称为核心样颗粒( Core-like Particles,CLPs),是由病毒单一或多个结构蛋白自行装配而成的高度结构化的介于15nm~400nm的空心蛋白颗粒[1].形态上,VLPs类似未成熟的病毒粒子,但由于缺乏调节蛋白和感染性核酸而无复制和感染能力,不存在感染宿主的危险性.但VLPs具有天然病毒的类似嗜性,能高密度地展示病毒抗原表位,通过和病毒感染一样的途径呈递给免疫细胞,引发强有力的特异性体液和细胞免疫,有效诱导机体的免疫系统产生免疫应答[2].
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外源蛋白质表达系统类型的研究进展
本文比较了以细菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞、植物作为蛋白质表达系统的优缺点,简要论述了各表达系统的组成及其研究进展,为外源蛋白质的高效表达提供了思路与线索.
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FK系列化合物的早期毒性评价/hERG钾离子通道表达系统的建立及其对药物致QT间期的影响/NatA-50的遗传毒性试验
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杆状病毒表达系统的研究与应用进展
杆状病毒是昆虫专一性的病原病毒,杆状病毒表达系统是当今基因工程四大表达系统之一.本文对杆状病毒表达系统构成元素(转移载体、亲本病毒和重组介质)的发展以及应用作了详细的论述,其应用一是在农业生产中开发作为生物杀虫剂,二是生物分子基础研究中重组蛋白的表达,三是医学研究中的基因治疗、疫苗开发和药物筛选.
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新生隐球菌荚膜基因CAP60与荧光蛋白融合表达系统的构建
荚膜是新生隐球菌的主要毒性因子,目前Chang等已克隆了4种荚膜基因:CAP59、CAP64、CAP60及CAP10.已知这4种基因对新生隐球菌的荚膜形成都是必须的,缺失任何一个基因都会使新生隐球菌变成无荚膜表型.搞清荚膜形成的任何一个生理、生化机制都将在新生隐球菌的临床诊断和治疗上带来突破性的进展.我们建立荧光蛋白作为标记与荚膜基因CAP60融合表达,为进一步的研究创造条件.
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不同Alloferon-1体外抗病毒效果
Alloferon-1是Chemysh等于2002报道的一种由13个氨基酸组成、相对分子质量为1481.53的新型抗菌肽,动物实验证实该抗菌肽有较强的抗流感病毒和抗白血病细胞的活性.人工合成或重组表达的抗菌肽Magainin-Ⅱ的生物学活性与大然产物相同.本研究中构建了串联式表达Alloferon-1的原核重组表达系统得到rAllofemn-1-EK,同时人工合成了sAIlofemn-1和sAlloferon-1-EK,比较重组及人工合成的3种AIIofemn-1体外抗病毒活性,以期为抗病毒新药研发提供实验依据.
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含CpG基序的大肠杆菌DNA对柯萨奇病毒基因免疫的增强作用
柯萨奇病毒B组(CVB)有6个血清型,即CVB1~6.由于CVB血清型多,采用传统疫苗预防本病难度较大.为此我们构建了CVB1/B3型VP1基因重组质粒pCR3-uniB1B3,将该重组质粒转染后进行RT-PCR及免疫荧光检测,证明该表达系统可以在细胞内获得瞬时表达,并应用该质粒免疫BALB/c小鼠,免疫后小鼠体内产生了相应的抗体,但是其抗体水平并不令人满意.为了获得更好的免疫效果,本研究探讨了大肠杆菌CpG DNA作为免疫佐剂以期增强pCR3-uniB1B3的免疫效果.
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手足口病CA16型VP1亚单位疫苗的构建制备及免疫原性初步分析
目的 制备CA16型VP1蛋白疫苗并进行免疫原性初步分析,为手足口病CA16疫苗的深入研究提供资料.方法 利用RT-PCR技术获得CA16 VP1基因,克隆到载体pFastBac HT A,与Bacmid DNA重组,转染Sf9昆虫细胞,重组CA16 VP1蛋白与Al(OH)_3佐剂混合制备重组CA16 VP1蛋白疫苗,腹腔免疫BALB/c小鼠,2次免疫后进行免疫效果初步评价.结果 用间接免疫荧光、SDS-PAGE和Western blot法,证明重组CA16 VP1蛋白在昆虫细胞Sf9中得到表达,用ELISA和微量中和法检测到免疫小鼠血清有特异IgG和中和抗体产生,佳免疫抗原剂量为20μg,其特异IgG效价为1:1600,中和抗体效价为1:250;通过淋巴细胞增殖试验和细胞因子测定,证明诱导T细胞应答,诱发Th1/Th2型免疫应答.结论 CA16 VP1基因克隆成功,并在Sf9昆虫细胞中获得表达,构建的蕈组CA16 VP1亚单位疫苗具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,为今后研制手足口病CA16疫苗奠定了基础.
关键词: CA16病毒 Bac-to-Bac 表达系统 重组VP1蛋白 免疫原性 -
胡桃变应原蛋白基因jug r 1在pET32表达系统中的高效表达
胡桃(Walnut,Juglans regia),也叫核桃,与扁桃、榛子、腰果并称为世界四大干果,被广泛地应用于各类食品中,是引起食物过敏的主要食品之一.根据美国食品过敏症和过敏性反应网络(Food Allergy & Anaphylaxis Network,FAAN)统计的数据显示:在引起过敏反应的坚果类食品中,胡桃位居第一(占34%),其次是腰果和杏仁,分别占20%和15%[1].
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基因工程乙型肝炎疫苗免疫原性和免疫效果的评价
80年代第一个基因工程疫苗--乙肝疫苗研制成功,以后随着对目的基因选择、抗原表达系统、质量评价等方面的研究进展,对其质量问题产生了不同见解.不同乙肝疫苗抗原来源于不同的表达系统,糖基化程度和生产工艺有所不同,由此引起保护率、抗体水平和免疫持久性的差异如何?以及以何种方法评价方能较科学地反映疫苗质量,均为乙肝预防工作中亟待解决的重大问题.开展这方面的研究,对确定我国乙肝疫苗生产发展的方向,即选择、推广何种类型的乙肝疫苗十分重要,为制定疫苗更新换代的行政决策提供依据.
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重组人白细胞介素24对肺癌A549细胞生长和肿瘤血管生成影响的实验研究
白细胞介素24(IL-24)即黑色素瘤分化相关基因7(mda-7),除具有免疫刺激应答功能外,还有抑制肿瘤细胞生长、促进其凋亡和抑制肿瘤血管生成的作用,被认为是一种新的抑癌基因.本研究观察了pET-21a-IL-24重组质粒表达系统的表达产物--部分纯化人重组IL-24(rhIL-24)蛋白,在体内外对肺癌A549细胞、瘤体生长的抑制作用和抗肿瘤血管生成作用.
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无细胞蛋白合成系统在病毒蛋白表达及应用中的研究进展
基因工程诞生于20世纪70年代,利用基因工程手段表达各种具有重要研究及应用价值的功能蛋白是基因工程的重要内容,其为疾病的诊断、治疗以及基因功能与作用机制的研究均提供了有效方法。目前基因工程表达系统可分为细胞内表达系统和无细胞合成系统两大类。本文就无细胞蛋白合成系统在表达病毒蛋白以及在病毒学领域中应用的研究进展作一简要综述。
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人oGPCRs与Gi1α的基因融合及其在昆虫细胞Sf9 的表达
目的 获得人孤儿G蛋白偶联受体(oGPCR)与G蛋白α亚基(Gi1α)的融合基因及其表达蛋白.方法 采用RT-PCR法,从人HepG2细胞扩增oGPCR成员GPR45,GPR85,GPR174和Gi1α的完整表达序列,运用重叠延伸PCR法扩增得到人oGPCR成员GPR45, GPR85, GPR174 分别与Gi1α的融合基因,将各融合基因与供体质粒pFASTBac1重组,而后分别转化DH10Bac菌株获得杆状病毒穿梭杆粒,制备重组杆状病毒并感染Sf9细胞,收获融合蛋白,经Western印迹鉴定.结果 得到了上述oGPCR成员的融合基因oGPCRs-Gi1α,并使之在昆虫细胞成功表达,制备了足量的oGPCRs-Gi1α融合蛋白.结论 oGPCR可与Gi1α成功融合,昆虫细胞表达体系是制备融合蛋白的理想手段,为今后深入开展oGPCRs的相关研究提供了保障.
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影响毕赤酵母高效表达重组蛋白的主要因素及其研究进展
毕赤酵母是现代分子生物学研究中重要的重组蛋白表达系统之一.该系统具有表达水平高、遗传稳定性好、可分泌表达、易于高密度发酵和成本低廉等优点.影响重组蛋白在毕赤酵母中高效表达的主要因素有基因拷贝数、密码子偏爱性、启动子、分子伴侣、信号肽、糖基化修饰和发酵工艺等.本文对影响毕赤酵母高效表达的主要因素及其研究进展进行综述,为进一步提高重组蛋白在毕赤酵母中的表达水平提供借鉴.
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阿片受体二聚化研究:药物靶标发现新策略
以往认为阿片受体以单聚体与G蛋白发生相互作用,其比例是按1:1偶联.然而,近年来随着G蛋白偶联受体克隆的成功及其特异性抗体的出现,关于阿片受体二聚化出现了大量报道,用Western印迹法分析异源细胞表达系统,已证明有免疫反应性复合体,而这些复合体相当于阿片受体(μ,κ,δ)单体、二聚体、高级寡聚体[1].
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真核细胞表达基因工程抗体的研究进展
大肠杆菌E.coli表达系统是非常常用、有效和方便的表达系统,可以进行许多异源蛋白的高效表达.然而原核细胞系统表达蛋白时,存在多种缺陷:真核基因通常含有内含子,原核细胞不能对其进行正确的剪切和拼接;缺乏真核生物的蛋白翻译后修饰和加工;表达产物多以包涵体形式存在,复性困难且效率很低;背景杂蛋白多、不易于纯化等,因此不可避免地对利用原核细胞表达基因工程抗体造成一定影响.
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McAb制备及其表达系统的研究进展
现介绍5种常用的单克隆抗体(McAb)制备技术,即杂交瘤技术、嵌合抗体制备技术、噬菌体抗体库技术、转基因小鼠制备抗体技术和核糖体展示技术,并对这5种技术的优缺点进行分析.阐述并比较了McAb制备所依赖的表达系统,其中包括细菌表达系统、酵母和丝状真菌表达系统、昆虫杆状病毒表达系统、植物表达系统和哺乳动物表达系统.后,展望了McAb未来的发展前景及其在生物技术和疾病诊断方面上的应用.
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2001年二等奖项目介绍乙型肝炎基因工程疫苗免疫原性和免疫效果的研究
项目详细内容立项背景乙肝疫苗的抗原主要来自两个表达系统,即酵母(酿酒酵母为主)和哺乳动物细胞(CHO细胞为主).
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泌乳乳腺作为真核基因的有效表达系统研究
目的探讨泌乳腺组织作为真核基因快速表达系统的可行性.方法以蚓激酶(LK)作为目的标志基因,分别构建了在泛组织嗜性的巨细胞病毒(CMV)立即早期启动子、逆转录病毒长末端重复序列(LTR)和组织特异性的beta-酪蛋白启动子调控下的3种真核表达载体pICLK、pLLKSN和pIbLK.制备各重组质粒后,以泌乳期羊乳腺作为支持系统,在处于稳定泌乳阶段分别注射不同量的重组质粒于山羊乳腺组织中.在注射后不同时间采集奶汁,检测纤溶活性.结果蚓激酶的不同重组质粒在注射到乳腺组织之后迅速得到表达,注射后6~9 h蚓激酶表达量达到高峰,并可持续至72 h以上;不同表达载体间表达量略有变化,但差异无统计学意义.结论泌乳乳腺组织可以作为真核基因的1种快速有效的表达系统.
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中国仓鼠卵巢细胞表达系统在疫苗研制中的应用
分子生物学、分子免疫学等学科的发展使基因工程疫苗具有越来越重要的地位.在基因工程疫苗研究的动物细胞表达系统中,具代表性的就是中国仓鼠卵巢细胞(ChineseHamster Ovary,CHO).它是用来表达外源蛋白多也成功的一类细胞.本文就CHO细胞表达系统在疫苗研制中的应用做一综述.