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新生隐球菌与巨噬细胞相互作用的研究
新生隐球菌可导致免疫抑制病人产生致命的新生隐球菌性脑膜炎,机体的非特异性细胞免疫,如巨噬细胞的吞噬作用,是防御隐球菌感染的第一道障碍,细胞免疫低下的病人隐球菌病的发生率高,如AIDS病人.新生隐球菌是一种可在细胞内寄生的真菌,在巨噬细胞内存活是其致病的关键环节.巨噬细胞内活性氧中间体(ROIs)、溶酶体等起到抗隐球菌的作用,而新生隐球菌的多种毒性因子在逃避宿主免疫方面起到重要的作用.因此,对新生隐球菌与巨噬细胞的相互作用的研究对临床治疗、探讨隐球菌病有着重要的意义.
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广西贵港地区2009-2012年新生隐球菌和格特隐球菌临床分离株基因分型与毒力特性研究
目的 研究广西贵港地区新生隐球菌和格特隐球菌临床分离株,在种、基因型和交配型的构成及毒力特性.方法 收集2009-2012年广西贵港地区临床分离的新生隐球菌株20株,PCR扩增转录间隔区(ITS)序列进行分子生物学验证,通过特异性引物进行PCR扩增,鉴定血清型、交配型.利用M13-PCR指纹图谱法和URA5-限制性片段长度多态性分析法,鉴定和验证基因型.表型研究包括37 ℃生长试验、黑色素生成试验和尿素酶试验.结果 20株有19株为新生隐球菌格鲁比变种,血清型为A型,α交配型,基因型为VNⅠ型.1株为格特隐球菌,属α交配型,基因型VG Ⅰ.毒力特性研究结果显示,所有临床分离株37℃正常生长,黑色素试验、尿素酶试验阳性.结论 广西贵港地区隐球菌致病菌株中绝大多数(95%)为新生隐球菌格鲁比变种、血清型为A型,α交配型,基因型为VNⅠ型,并发现格特隐球菌菌株.
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结核性脑膜炎合并隐球菌性脑膜炎的诊治体会
目的 探讨结核性脑膜炎合并隐球菌性脑膜炎的诊断和治疗的有效方法.方法 对2007年1月-2010年8月在我科住院治疗的52例患者及时进行头颅CT及脑脊液检查确诊为结核性脑膜炎合并隐球菌性脑膜炎,并予抗真菌、抗结核、脱水、支持及对症治疗2个月.结果 52例患者均好转出院,无明显后遗症.结论 结核性脑膜炎合并隐球菌性脑膜炎患者需及早诊断和治疗,提高治愈率,降低病残率及死亡率.
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特比萘酚联合氟康唑对念珠菌及新生隐球菌的体外药敏试验
目的 研究特比萘酚(FCZ)和氟康唑(TBNF)对念珠菌及新生隐球菌体外联合药敏试验中的相互作用,为临床用药提供实验室依据.方法 参照美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)提出的标准(M27-A方案)采用棋盘微量稀释法对10株念珠菌和18株新生隐球菌进行了特比萘酚和氟康唑的体外联合药敏试验.结果 联合用药时FCZ的低抑菌浓度(MIC)几何均值从单用药时的5.124降至0.672,差异有显著性(t=5.558,P<0.001);TBNF从2.26降至0.291,差异有显著性(t=6.552,P<0.001).两种药物联用有协同或相加作用,联合抑菌指数(FICI)的平均值为0.629.结论 特比萘酚和氟康唑对致病酵母菌主要表现为协同相加作用.
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靶向治疗新生隐球菌病的研究进展
新生隐球菌是一种常见的条件致病真菌,其引起的隐球菌病主要发生在患有基础疾病或免疫功能低下的人群.隐球菌病具有极高的发病率和死亡率,且传统治疗药物选择性较低,容易导致菌株耐药性的出现,因此新型治疗方案成为迫切需求.本文综述了新生隐球菌的临床感染发生、主要致病毒力因子、荚膜的合成机理及靶向治疗的研究方向,旨在为诊断和治疗隐球菌病提供依据.
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新生隐球菌荚膜长期保存及染色方法的探讨
目的 探讨新生隐球菌荚膜长期保存及染色方法,以方便教学,随时让学生观察到典型新生隐球菌荚膜负染色的形态. 方法 取新生隐球菌进行小白鼠腹腔接种,吸出腹腔渗出液,用石炭酸固定液杀菌及固定,并用黑色素代替墨汁染色. 结果 用石炭酸固定液保存的新生隐球菌菌体及荚膜长达20年之久,镜检形态与新鲜标本无异. 结论 本法可用于教学,黑色素染色法还可用于临床微生物检验.
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国内110株新生隐球菌临床株变种、基因型和交配型分析
目的 对国内部分地区的新生隐球菌(Cryptococcus neoformans)临床株进行分子流行病学调查,分析其变种、基因型和交配型的构成和分布.方法 (1)PCR指纹分型法:以野生型噬菌体M13中针对小卫星DNA的核心序列为单引物对模板进行PCR扩增,将所有受试菌株鉴定到8种主要基因型水平.(2)利用变种和交配型特异性引物扩增分型法,区分格鲁比变种(C.neoformans var.grubii)、新生变种(C.neoformans var.neoformans)和格特变种(C.neoformans var.gattii),同时鉴定α和a交配型.结果 110株临床株中,98株(89.1%)为格鲁比变种,均为VNI基因型和α交配型;9株(8.2%)格特变种,包括VGⅠ基因型、α交配型8株(7.3%)和VGⅡ基因型、α交配型1株(0.9%);2株(1.8%)为AD杂合体,VNⅢ基因型,-/α和α/-交配型各1株;1株(0.9%)为新生变种,VNⅣ基因型和a交配型.结论 我国新生隐球菌临床株包含3个变种和AD杂合体.与国外情况比较,相似的是国内临床株中绝大部分为α交配型菌株,且格鲁比变种中的VNⅠ基因型占了其中的大部分;但未发现VNⅡ、VGⅢ和VGⅣ基因型菌株.
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新生隐球菌荚膜相关基因CAP10启动序列的活性研究
目的筛选具启动活性的新生隐球菌荚膜相关基因CAP10编码区上游5'侧翼序列(启动子序列),为进一步研究其调控机制打下基础.方法利用氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的编码基因为报告基因,构建了含不同长度的新生隐球菌荚膜相关基因CAP10编码区上游5'侧翼序列和报告基因的重组体,转化酵母,ISA方法检测各转化子的CAT表达活性,并通过比较找到CAP10启动序列.结果发现含CAP10编码区上游-303bp、-390bp、-500bp、-951bp的转化子具有明显的CAT表达活性,而含-202bp、-102bp的转化子无明显的CAT表达活性.结论 CAP10上游5'侧翼端-303bp~0bp是具完整启动活性的小单位.CAP10上游5'侧翼端-202bp~-303bp内含CAP10启动所必需的序列.
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新生隐球菌耐药基因的检测
近年来,新生隐球菌性脑膜炎(下称隐脑)发病率呈日益上升的趋势,由于耐药菌株的增多应探讨新生隐球菌耐药基因及产生的原因.我们应用聚合酶链反应,对住院21例"隐脑"病人,从脑脊液中分离出新生隐球菌,检测耐药基因.
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CAP59荚膜相关基因大外显子序列用于新生隐球菌分型的探讨
目的探讨CAP59基因大外显子序列对新生隐球菌进行分型的可行性. 方法根据CAP59基因大外显子序列设计1对引物,对新生隐球菌5个血清型菌株进行PCR扩增和测序,用GenBank数据库分析序列的差别,Phylip3.6a3软件处理数据并绘制种系进化树,选择一定数量的新生隐球菌临床分离株和其他致病真菌进行临床验证. 结果新生隐球菌不同血清型菌株的CAP59大外显子序列存在差别,临床验证显示CAP59基因大外显子对受试菌株分型结果与免疫学分型结果全部符合. 结论以所设计引物扩增的基因可以作为新生隐球菌分型和检测的分子生物学工具.
关键词: 新生隐球菌 CAP59荚膜相关基因 最大外显子 -
新生隐球菌荚膜基因CAP60与荧光蛋白融合表达系统的构建
荚膜是新生隐球菌的主要毒性因子,目前Chang等已克隆了4种荚膜基因:CAP59、CAP64、CAP60及CAP10.已知这4种基因对新生隐球菌的荚膜形成都是必须的,缺失任何一个基因都会使新生隐球菌变成无荚膜表型.搞清荚膜形成的任何一个生理、生化机制都将在新生隐球菌的临床诊断和治疗上带来突破性的进展.我们建立荧光蛋白作为标记与荚膜基因CAP60融合表达,为进一步的研究创造条件.
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探讨实时荧光定量PCR法检测血液新生隐球菌的临床意义
目的:探讨实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction, RT-FQ-PCR)法检测新生隐球菌感染的临床应用价值。方法选择2014年2月-2014年7月就诊的47例疑似新生隐球菌感染患者的血液标本,采用常规培养基培养方法以及RT-FQ-PCR法进行检测,计算检测新生隐球菌的阳性率,并进行统计学分析。采用RT-FQ-PCR法对新生隐球菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、烟曲霉、黑曲霉、大肠杆菌、肺炎球菌、金黄色葡萄球菌和链球菌这些常见真菌和细菌的DNA进行检测,评价RT-FQ-PCR法的特异性。采用RT-FQ-PCR和常规培养基培养法对稀释至5个/mL的新生隐球菌菌液进行检测,评价RT-FQ-PCR法的灵敏度。结果采用RT-FQ-PCR法,以新生隐球菌特异性引物为探针对新生隐球菌和其他常见真菌及细菌进行检测,只有新生隐球菌出现荧光信号。 RT-FQ-PCR在5个/mL浓度的新生隐球菌菌液中检测出新生隐球菌,而常规培养基培养法未检测出。在47例疑似新生隐球菌感染患者中,常规培养基培养方法检测出11例,阳性率为23.40%,而RT-FQ-PCR法检测出14例,阳性率为29.79%,二者经比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 RT-FQ-PCR法与常规培养基培养法对新生隐球菌的检测具有很好的一致性。且RT-FQ-PCR法能够检测出较低浓度的新生隐球菌,较常规培养基培养法快速、灵敏度高、特异性强,可缩短报告时间,为临床早期诊断及治疗新生隐球菌感染提供可靠依据。
关键词: 新生隐球菌 实时荧光定量PCR法 常规培养基培养法 -
兔肺隐球菌病的CT表现和病理对照
目的 构建新西兰大白兔肺隐球菌病模型,观察其CT表现,并分析其与病理结果 的关系.方法 新西兰大白兔20只,第1~5天每日静脉注射阿糖胞苷440 mg/m2,6天后隔日注射;第4日起应用万古霉素、头孢他定及庆大霉素静脉注射;第6日经皮气管穿刺接种新生隐球菌菌悬液0.4~0.8 ml.接种后隔日行CT检查,观察并记录兔的死亡时间.第10、11天处死所有实验兔,取病变肺组织病理切片观察及真菌培养.结果 14只实验兔成功建立肺隐球菌病状态,其中13只CT表现为单发或多发实变,1只表现为多发的结节和实变灶;组织病理检查可见间质细胞增生,炎细胞浸润(14只);肺泡渗出,间质充血 (10只);出血性坏死 (5只);还可见玻璃样变(1只);3只见肉芽肿形成,5只病灶肺间质、细支气管和肺泡腔内可见隐球菌.结论 兔肺隐球菌病CT表现多为位于肺野外周部的多发实变,病理上以炎细胞浸润,肺泡渗出为主,直接观察到隐球菌孢子可以确诊.
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马尔尼菲青霉菌引起败血症致患者死亡一例
马尔尼菲青霉菌主要分布于中国南方地区及东南亚各国,在东南亚引起的临床感染仅次于结核分枝杆菌和新生隐球菌,居第三位,是引起艾滋病(AIDS)患者感染的主要致病菌.该菌常从血液、骨髓以及皮肤活检组织中分离出,我们从1例真菌血症患者的血液及骨髓中分离出1株马尔尼菲青霉菌.
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艾滋病合并隐球菌脑膜炎17例临床与实验室诊断分析
HIV感染机体后主要攻击淋巴细胞,导致CD+4T淋巴细胞数量进行性减少.CD+4T淋巴细胞减少程度与各种机会感染成正比.当CD+4T淋巴细胞<100个/μl时,新生隐球菌(Cryptococcus neoformans)等机会性致病菌便会乘虚而入[1].本研究总结分析2004年10月至2007年8月,本院收治541例艾滋病患者中并发隐球菌脑膜炎17例的实验室诊断及真菌药敏试验结果.
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新生隐球菌常用哪些检测方法?
关键词: 新生隐球菌 -
新生隐球菌脑膜炎误诊的重要原因
患儿女,15岁.1个月前晨起无明显诱因出现前额部持续性疼痛,伴呕吐.在当地医院诊断:脑膜炎,结核性脑膜炎.经20余天治疗无效,转入我院小儿科.脑脊液(CSF)发现白细胞且有较强折光性.加做墨汁染色,镜下找到一定数量新生隐球菌.于当日确诊:新生隐球菌性脑膜炎.
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肺隐球菌病的诊断与治疗
隐球菌病(cryptococcosis)是新生隐球菌(cryptococcus neoformans)引起的一种急性、亚急性或慢性真菌病,脑、肺、骨或皮肤易感染.近年来,隐球菌病的发病率逐渐增高,免疫功能正常和免疫功能受损的宿主均可感染,以隐球菌脑膜炎常见,其次是肺和皮肤的感染[1].
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原发性肺隐球菌病九例临床分析
肺隐球菌病(pulmonary cryptococcosis)是指由新生隐球菌(cryptococcus,neoformans)感染引起的一种亚急性或慢性肺部真菌病,易发生于免疫功能低下或缺陷者,病情重,预后差.但近年来身体健康或健康状况相对较好的患者较多,且表现出不同的特点,现报道如下.
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吉林地区临床新生隐球菌微卫星分型分析
新生隐球菌(Cryptococcus Neoformans,CN)是临床上重要的致病真菌,主要可导致器官移植、艾滋病等免疫抑制患者发生新生隐球菌病[1]。本文采用多位点微卫星基因分型法( MLMT)对吉林地区的新生隐球菌临床株进行分析,同时对不同微卫星型的菌株进行了药物敏感性的比较,以帮助临床上深入认识新生隐球菌的流行病学及发病机制。