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广西贵港地区2009-2012年新生隐球菌和格特隐球菌临床分离株基因分型与毒力特性研究
目的 研究广西贵港地区新生隐球菌和格特隐球菌临床分离株,在种、基因型和交配型的构成及毒力特性.方法 收集2009-2012年广西贵港地区临床分离的新生隐球菌株20株,PCR扩增转录间隔区(ITS)序列进行分子生物学验证,通过特异性引物进行PCR扩增,鉴定血清型、交配型.利用M13-PCR指纹图谱法和URA5-限制性片段长度多态性分析法,鉴定和验证基因型.表型研究包括37 ℃生长试验、黑色素生成试验和尿素酶试验.结果 20株有19株为新生隐球菌格鲁比变种,血清型为A型,α交配型,基因型为VNⅠ型.1株为格特隐球菌,属α交配型,基因型VG Ⅰ.毒力特性研究结果显示,所有临床分离株37℃正常生长,黑色素试验、尿素酶试验阳性.结论 广西贵港地区隐球菌致病菌株中绝大多数(95％)为新生隐球菌格鲁比变种、血清型为A型,α交配型,基因型为VNⅠ型,并发现格特隐球菌菌株.
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国内110株新生隐球菌临床株变种、基因型和交配型分析
目的 对国内部分地区的新生隐球菌(Cryptococcus neoformans)临床株进行分子流行病学调查,分析其变种、基因型和交配型的构成和分布.方法 (1)PCR指纹分型法:以野生型噬菌体M13中针对小卫星DNA的核心序列为单引物对模板进行PCR扩增,将所有受试菌株鉴定到8种主要基因型水平.(2)利用变种和交配型特异性引物扩增分型法,区分格鲁比变种(C.neoformans var.grubii)、新生变种(C.neoformans var.neoformans)和格特变种(C.neoformans var.gattii),同时鉴定α和a交配型.结果 110株临床株中,98株(89.1%)为格鲁比变种,均为VNI基因型和α交配型;9株(8.2%)格特变种,包括VGⅠ基因型、α交配型8株(7.3%)和VGⅡ基因型、α交配型1株(0.9%);2株(1.8%)为AD杂合体,VNⅢ基因型,-/α和α/-交配型各1株;1株(0.9%)为新生变种,VNⅣ基因型和a交配型.结论 我国新生隐球菌临床株包含3个变种和AD杂合体.与国外情况比较,相似的是国内临床株中绝大部分为α交配型菌株,且格鲁比变种中的VNⅠ基因型占了其中的大部分;但未发现VNⅡ、VGⅢ和VGⅣ基因型菌株.
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白念珠菌三稳态转换系统及相关因素的研究进展
常见的人类致病性真菌白念珠菌可自发或在环境因素作用下发生表型转换，目前的研究热点为 white-gray-opaque 三稳态转换系统。white、gray、opaque 三种表型在包括细胞形态、菌落外观、基因表达谱、交配能力和毒力特性等方面都有所不同，其发生表型转换的能力以及不同表型在白念珠菌定植、适应以及感染宿主的过程中发挥着重要的作用。表型转换受二氧化碳（CO2）和 N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）、环境酸碱度、生理温度以及交配型基因位点（MTL）等很多因素的影响，并且受 Wor1、Wor2、Efg1等多种调节因子的调控。同时，表型转换调控有性繁殖，并且有可能在免疫逃避及耐药中发挥作用。总之，对白念珠菌的毒力因子——表型转换的调节因子、影响因素等进行深入研究，对理解其致病性以及研究新型抗真菌药靶点至关重要。
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新型隐球菌AD型及其杂合类型的多位点分析
目的 评价多个位点的PCR特异扩增法和限制性片段长度多态性(RFLP)分析在鉴定新型隐球菌AD型及其杂合类型中的作用.方法 采用针对交配型位点内STE20、MF基因及交配型位点外CLA4、GPal基因的PCR特异扩增法和针对交配型位点外g6341基因的RFLP分析对不同杂合类型的AD型菌株进行鉴定及杂合类型的分析.结果 针对STE20基因的特异扩增法能准确鉴定所有AD型菌株的交配类型,但无法鉴定H型菌株.针对CL44基因的特异扩增法在鉴定AD型菌株上优于GPal基因,针对g6341基因的RFLP分析根据A位点交配型的不同将AD型菌株分为2种RFLP谱型.CLA4、GPal和g6341基因不能用于鉴定AD型的交配类型,且可能存在A型或D型位点的缺失.结论 新型隐球菌AD型菌株及其杂合类型的准确鉴定须结合针对交配型位点内外基因的多位点分析.
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深圳地区新生隐球菌和格特隐球菌的临床分子流行病学
目的 通过对深圳地区新生隐球菌和格特隐球菌临床分离株进行分子流行病学调查,分析其种、变种、基因型和交配型的构成.方法 受试菌株为从临床标本中分离的55株隐球菌,利用刀豆氨酸-甘氨酸-溴麝香草酚蓝培养法区分新生隐球菌和格特隐球菌;利用M13的PCR指纹分型法鉴定基因型;利用变种和交配型特异性引物扩增分型法,区分新生隐球菌格鲁比变种、新生变种和格特隐球菌,同时鉴定α交配型和a交配型;利用GEF1-限制性片段长度多态性分析法同步鉴定和验证受试株的基因型和交配型;对VGⅡ基因型菌株进行IGS1序列类型的分析.结果 55株临床株中,52株为新生隐球菌,均为格鲁比变种、VN Ⅰ基因型和a交配型;3株为格特隐球菌,包括1株VG Ⅰ基因型、α交配型和2株VGⅡ基因型、a交配型.2株VGⅡ基因型菌株的IGS1序列类型为Ⅱ型.结论 深圳地区隐球菌致病菌株中绝大多数仍为新生隐球菌格鲁比变种、VN Ⅰ基因型和α交配型.存在少数格特隐球菌菌株,其中包括导致国外高发病率的VGⅡ基因型,后者的IGS1序列类型与VGⅡb基因亚型一致.
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中国致病格特隐球菌的基因亚型分析
目的 探讨中国致病格特隐球菌的基因亚型与世界范围内格特隐球菌的分子流行病学关系.方法 扩增受试格特隐球菌IGS1、PLB1和GEF1位点的部分可变区,检索GenBank上相应位点的序列信息,进行多位点的序列比对和系统发育分析.结果 ①我国VG Ⅰ基因型和α交配型菌株在3个位点的序列与以菌株WM276为代表的一种基因亚型相同,国内首株VGⅡ基因型和α交配型菌株的序列与温哥华岛致病株R272一致.②针对GEF1基因部分片段的聚类分析准确鉴定受试格特隐球菌的基因型和交配型.结论 中国致病格特隐球菌VG Ⅰ基因型与世界上分布较广的一种基因亚型相似,首株VG Ⅱ基因型菌株与温哥华岛致病性弱的VG Ⅱ b基因亚型相似.
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长寿基因SIRT1在2型糖尿病发病机制中的作用
沉默信息调节因子(SIRT1)因其参与酵母交配型基因沉默、端粒区基因沉默和重组并能维持基因的稳定性,从而与物质代谢和长寿有着很大的关系,也因此被称作“长寿基因”.近年来众多研究表明其与代谢型疾病2型糖尿病发病有着紧密联系,以下就SIRT1对胰岛素信号通路及其主要靶器官的影响作一综述.
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SXI2a基因在新生和格特隐球菌交配型鉴定中的作用
目的 设计针对a交配型位点内特有的SXI2a基因的特异扩增法,评价其在鉴定新生和格特隐球菌所有主要基因型a交配型中的作用.方法 在SXI2a基因4号外显子的序列保守区设计引物SXI2aF-SXI2aR特异扩增新生和格特隐球菌a交配型,并比较其与现有的针对STE20a、Mfa或STE3a基因的特异扩增法及交配试验在鉴定新生和格特隐球菌所有主要基因型a交配型中的作用.结果 针对SXI2a基因的特异扩增法准确鉴定受试的各主要基因型a交配型菌株,而针对STE20a、Mfa或STE3a基因的特异扩增法均至少无法扩增1种以上主要基因型的a交配型.部分受试菌株不能发生交配,交配试验无法鉴定其交配型.结论 针对SXI2a基因的PCR扩增可鉴定新生和格特隐球菌各主要基因型的a交配型.SXI2aF-SXI2aR引物在快速鉴定a交配型中具有更好的通用性和特异性.
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AIDS患者新型隐球菌表型特征及临床预后的初步研究
目的 调查福建地区AIDS患者新型隐球菌血清型和交配分布特征,分析其与临床预后的关系.方法 收集2012-2015年福建地区获得性免疫综合征患者新型隐球菌感染临床株40株,采用变种和交配型特异性引物,通过聚合酶链反应扩增分型,同时鉴定新型隐球菌血清型和交配型.对40例患者随访1年,分析其临床预后.结果 40株新型隐球菌临床株均为血清A型、α交配型,未发现其他血清型和a交配型.35例AIDS合并隐球菌感染患者1年生存率71.4％.结论 福建地区AIDS患者新型隐球菌临床株表型分布特征比较单一,主要以Aα型为主.早期诊断、足量使用抗真菌药物可以降低隐球菌感染死亡率,及时予以高效抗反转录病毒治疗可以减少AIDS合并隐球菌性脑膜炎的复发.
关键词： 获得性免疫缺陷综合征 新型隐球菌 血清型 交配型 临床预后
