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甲型副伤寒杆菌外膜蛋白X基因分布及其重组表达产物免疫保护作用的研究
目的 了解甲型副伤寒沙门菌临床菌株外膜蛋白(ompX)基因分布、序列保守性及其产物免疫原性和免疫保护性.方法 采用PCR扩增甲型副伤寒沙门菌临床菌株ompX基因.利用大肠埃希菌表达系统表达rOmpX,产物采用Ni-NTA亲和层析法提纯.采用免疫扩散法、ELISA和Western blot鉴定rOmpX抗原性和免疫反应性.采用小鼠感染模型了解rOmpX对甲型副伤寒沙门菌感染的免疫保护作用,微量肥达试验检测rOmpX免疫小鼠血清抗体凝集伤寒和副伤寒沙门菌效价.结果 所有甲型副伤寒沙门菌临床菌株均有ompX基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别高达99.2％～ 100.0％和98.4％～100.0％.rOmpX免疫家兔可产生高效价抗体,利用该抗体与甲型副伤寒患者血清标本进行ELISA试验,95.6％(65/68)的标本呈阳性.100 μg和200 μug rOmpX对感染小鼠的免疫保护率分别为93.3％(14/15)和100.0％(15/15).rOmpX免疫小鼠血清对甲型副伤寒和伤寒沙门菌H抗原凝集效价为1∶10～1∶40.结论 ompX基因重组表达产物可作为甲型副伤寒沙门菌基因工程疫苗候选抗原.
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甲型副伤寒杆菌侵袭蛋白(spaO)基因原核表达及免疫性和保护作用研究
目的研究甲型副伤寒杆菌spaO基因重组表达产物rSpaO免疫性和保护作用,并了解甲型副伤寒杆菌临床菌株spaO基因携带和表达情况.方法扩增并克隆甲型副伤寒杆菌临床株JH01 spaO基因,构建原核表达系统;采用SDS-PAGE分析rSpaO表达情况,Ni-NTA亲和层析法收集rSpaO,采用Western blot鉴定其免疫反应性;采用PCR和ELISA检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株spaO基因携带和表达频率;观察rSpaO对甲型副伤寒杆菌50001株感染小鼠的免疫保护作用.结果与报道的相关序列比较,克隆的spaO基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.45%～99.89%和99.01%～100%;rSpaO表达量为细菌总蛋白的75%左右;甲型副伤寒杆菌全菌抗血清能识别rSpaO;rSpaO免疫家兔可产生抗体;94.9%(93/98)甲型副伤寒杆菌临床菌株含有spaO基因,91.4%(85/93)spaO+菌株表达SpaO.rSpaO灌喂或皮下注射免疫小鼠(500μg)受甲型副伤寒杆菌50001株攻击后的存活率分别为58.3%和50.0%;若加入5μgrLTB,存活率分别上升88.3%和75.0%.结论甲型副伤寒杆菌临床菌株有较高的spaO基因携带率和表达率;rSpaO有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用,可作为甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗的候选抗原.
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甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白H1a基因原核表达系统构建及其表达产物的免疫原性和保护作用
目的构建甲型副伤寒杆菌(Salmonella paratyphi A)H1a基因原核表达系统,确定表达产物rH1a免疫原性和保护作用,检测甲型副伤寒杆菌临床菌株H1 a基因携带和表达情况.方法采用高保真PCR从甲型副伤寒杆菌临床株JH01中扩增H1a基因,T-A克隆后测序,构建H1a基因原核表达系统pET32a-H1a-E.coli BL21DE3.采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检查rH1a表达情况,Ni-NTA亲和层析法收集rH1a.采用Western blot鉴定其免疫反应性和免疫原性.建立PCR和ELISA检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株H1a基因携带和表达频率.观察rH1a对甲型副伤寒杆菌50001株感染小鼠的免疫保护作用.结果与报道的相关序列比较,所克隆的H1a基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为99.59%.rH1a表达量为细菌总蛋白的60%左右.甲型副伤寒杆菌全菌抗血清能识别rH1a并与之结合.rH1a免疫家兔可产生抗体.100%(98/98)甲型副伤寒杆菌临床菌株均含有H1a基因并表达H1a.500μgrH1a灌喂或皮下注射免疫小鼠受甲型副伤寒杆菌50001株攻击后的存活率均为50.0%,若加入5μgrLTB,存活率分别上升至75.0%和66.7%.结论本研究成功地从甲型副伤寒杆菌临床菌株中构建了H1a基因高效原核表达系统.rH1a有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用.甲型副伤寒杆菌临床菌株广泛存在H1a基因并高频率表达.
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甲型副伤寒杆菌ompA基因分布及重组表达产物的免疫学鉴定
目的 构建甲型副伤寒杆菌ompA基因原核表达系统,确定其重组表达产物rOmpA免疫原性和保护作用,检测甲型副伤寒杆菌临床菌株ompA基因携带率.方法 采用PCR从甲型副伤寒杆菌临床株JH01中扩增ompA基因,T-A克隆后测序并构建ompA基因原核表达系统.采用SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶图像分析系统检测rOmpA表达情况及其产量,采用免疫扩散法、微量肥达试验和Western blot鉴定其抗原性和免疫反应性.采用PCR检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株ompA基因携带率.采用小鼠感染模型,了解rOmpA对甲型副伤寒杆菌50001株感染的免疫保护作用.结果 与报道的相关序列比较,所克隆的ompA基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%.rOmpA表达量约为细菌总蛋白的65%.rOmpA能与其兔抗血清和甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生免疫反应(Western blot),并可在家兔中诱导产生抗体.94.9%(93/98)甲型副伤寒杆菌临床菌株含有ompA基因.100 μg和200 μg rOmpA对感染小鼠的免疫保护率分别为41.7%(5/12)和58.3%(7/12).rOmpA免疫小鼠或保护试验存活小鼠血清对各副伤寒杆菌H抗原的凝集效价为1:5～1:40.结论 ompA基因在甲型副伤寒杆菌临床菌株中分布广泛.rOmpA有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用,可考虑为甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原.
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甲型副伤寒暴发流行3年的临床耐药分析
近年来,随着人们生活水平的提高及卫生条件的改善,伤寒的流行及发病率已有明显下降趋势.但1998年1月～2000年5月间,我市仍有甲型副伤寒暴发流行,年发病率达219.9/10万.为切实了解流行的伤寒菌株,针对抗菌药物的敏感性,寻找有效的抗菌药物,我们对854例甲型副伤寒杆菌分别作了抗菌药物敏感试验,其中对氯霉素耐药的468例(54.8%)进行了3年比较,现报告如下:
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妊娠合并甲型副伤寒11例临床分析
甲型副伤寒是由甲型副伤寒杆菌引起的肠道传染病,该病起病急、来势猛、传染性强.1999年春季起,我县发现有散在甲型副伤寒病例,2001年暴发流行.下面对我院1999年2月至2002年11月收治的 11例妊娠合并甲型副伤寒患者的临床资料进行回顾性分析,现将结果报道如下.
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副伤寒甲的肾脏损害
副伤寒甲是由甲型副伤寒杆菌引起的急性肠道传染病,其病理和临床表现与伤寒类似,但较轻[1],以持续性菌血症、网状内皮系统受损、远端回肠微小脓肿及溃疡形成为基本特征,肾脏损害也不少见.1999年1月～10月我们收治住院治疗副伤寒甲患者165例,其中合并肾脏损害者37例,报告如下.
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影响甲型副伤寒杆菌培养分离因素的探讨
1998年以来,广西各地从病人血液标本中分离出甲型副伤寒杆菌菌株逐年增多.为提高实验室的细菌培养分离技术水平和效果,本文根据伤寒监测点资料对影响甲型副伤寒杆菌培养的因素进行初步探讨.结果报告如下.
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甲型副伤寒并发浆膜腔积液
近年来温州地区甲型伤寒发病较前增多.甲型副伤寒是甲型副伤寒杆菌所致的败血症,常累及全身多部位,其临床表现多种多样,但出现浆膜腔积液者少见,往往不能及时被确诊.现将近五年来收住我院的甲型副伤寒并发浆膜腔积液患者8例报道如下.
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甲型副伤寒杆菌鞭毛抗原酶联免疫方法的建立及初步应用
目的采用甲型副伤寒杆菌鞭毛抗原单克隆抗体,建立检测甲型副伤寒杆菌鞭毛抗原ELISA双抗体夹心法.方法采用纯化的甲型副伤寒杆菌鞭毛抗原,制备3株鞭毛抗原单克隆抗体细胞(2C8、2E6和5D7).应用免疫印迹试验、交叉反应试验及表位分析进行特异性鉴定.结果3株单抗细胞与甲型副伤寒杆菌鞭毛抗原及甲型副伤寒杆菌发生免疫反应,与伤寒、乙、丙型副伤寒杆菌及部分沙门氏菌、大肠杆菌无交叉反应.选用其中2株单抗细胞建立了ELISA双抗体夹心法.检测163份献血员和65份发热待查患者血清标本均为阴性,15份血培养阳性的甲型副伤寒患者血清标本有14份为阳性.结论可直接用单克隆抗体进行检测,具有简便、快速等特点.
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156株甲型副伤寒杆菌药敏分析
甲型副伤寒近年来在本地区,尤其是在工业较发达的乡镇成为散发性的常见传染性疾病,在夏、秋季节甚至出现地方性流行.水源污染是本病传播的重要途径.由于该菌株在不同时期,不同区域对抗生素的敏感性呈明显的差异;为了了解本地区甲型副伤寒沙门菌的耐药情况,我们同时进行了抗生素敏感性测定,结果如下.
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甲型副伤寒杆菌体外药物敏感试验价值的探讨
甲型副伤寒杆菌感染是近年来在海岛居民中发病率较高的一种传染病,而且耐药菌株也正不断增多.虽然目前有体外药物敏感试验可供选择抗生素时参考,但我们发现由此选择的抗生素并不能获得理想的临床疗效.本文对180例甲型副伤寒杆菌感染患者的药物敏感试验结果与临床疗效作一对照分析,以探讨两者的关系.
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甲型副伤寒杆菌重组蛋白OmpW的表达与鉴定
目的 构建甲型副伤寒杆菌外膜蛋白基因ompW的原核表达系统,确定其重组表达产物rOmpW免疫原性,了解甲型副伤寒杆菌临床菌株ompW基因携带率.方法 采用PCR和T-A克隆法从甲型副伤寒杆菌临床株JH01中获得ompW基因克隆并构建其原核表达系统,重组蛋白纯化后用SDS-PAGE及Western-Blotting分析.采用PCR检测95株甲型副伤寒杆菌临床菌株ompW基因携带率.结果 与报道的相关序列比较,所克隆的ompW基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100％.rOmpW免疫家兔可产生抗体并能与甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生阳性Western杂交信号.所有甲型副伤寒杆菌菌株均携带ompW基因.结论 构建甲型副伤寒杆菌外膜蛋白基因ompW的原核表达系统,证明了ompW是存在于甲型副伤寒杆菌的序列保守、分布广泛的外膜蛋白基因,为进一步研究该蛋白作为多价甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原奠定基础.
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一起伤寒、副伤寒甲混合暴发的调查
1998年9月贵阳西郊某女子劳教所突然发生以持续发热、头痛、腹泻为主要症状的疾病，经病原学检测证实为一起少见的由伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌混合感染引起的暴发。
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贵阳地区一株甲型副伤寒沙门菌隐蔽质粒的测序研究
目的 测定贵阳地区一株甲型副伤寒沙门菌(Salmonella enterica paratyphi A)所带3.6kb质粒的全序列,以确定其是否带有抗性基因.方法 从30例样本中筛选一例贵阳地区当前单簇耐药谱广的菌株,选择一株含抗药性多的甲型副伤寒沙门菌,检测的标本来自于患者血平板标本.通过药敏试验筛查,并对甲型副伤寒沙门菌的耐药谱特征比较,提取其质粒(plasmid),用Sau3A I限制性核酸内切酶消化、酶切消化的一个片段克隆到pMD-18T、用引物M13/R测序.再通过反向PCR技术,扩增余下质粒片段并进行测序,作BLSAT(basic local alignment search tool)比较分析,测定其所含质粒的全部序列并预测开放阅读框(open reading frame, ORF).将序列提交GenBank.结果 该菌对卡那霉素(kana)、头孢氨苄(cefa)、四环素(tet)、氯霉素(cal)、复方磺胺(sul)、青霉素(pnc)等6种抗生素耐药.通过测序获得了一个长度为3592bp质粒的基因全序列;并预测含有3个ORF;不带有抗性基因,提交到GenBank保存,并且应用相应软件绘出了它的物理图谱.结论 多药耐药的甲型副伤寒沙门菌为临床分离株,抗性基因定位在于染色体上.不在以往学者怀疑的3.6kb质粒上,通过BLAST分析,该质粒为隐蔽质粒、功能未知.该质粒与鼠疫伤寒沙门菌质粒序列有41%的高度相似.结果 显示,此株甲型副伤寒沙门菌的抗性基因存在染色体上.
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与甲型副伤寒杆菌噬菌体 LSPA1早期蛋白 GP23相互作用的宿主蛋白的筛选
目的：筛选与甲型副伤寒杆菌（副甲）CMCC50973噬菌体 LSPA1早期蛋白 GP23相互作用的宿主蛋白。方法Sau3AⅠ酶切副甲基因组，回收250～1500 bp 的条带与 pAT 质粒连接，构建 pAT-副甲基因文库；扩增噬菌体早期基因 gp23，与 pBT 构建 pBT-gp23作为诱饵质粒；将 pAT-副甲基因文库和 pBT-gp23共转 KS 宿主菌，利用细菌双杂交技术筛选蓝色单菌。检测筛选出阳性单菌的 LacZ 活性，并提质粒测序，分析其编码蛋白。结果成功构建副甲基因文库，其库容量满足实验的要求，基因文库阳性率接近100％；筛选出的插入基因为编码嘌呤透性酶。结论宿主蛋白（嘌呤透性酶）可能与副甲噬菌体 LSPA1早期蛋白 GP23有相互作用。
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妊娠合并甲型副伤寒12例护理体会
甲型副伤寒是由甲型副伤寒杆菌引起的肠道传染病,该病起病急,来势猛,传染性强.1999年春季起,我县发现有散发甲型副伤寒病例,2001年暴发流行,我院2001年3月至2003年12月共收治12例妊娠合并甲型副伤寒患者,现将护理体会总结如下:
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灵川县2004年甲型副伤寒鉴定结果分析
二00四年全年对全县发热病人监测培养1200份,检出甲型副伤寒杆菌89株,其中散在发病检出33株,集中在十二月份发病有610份,检出56株,占全年总数的62.92%,其中灵田初中有480人,检出53株,占全年总数的59.55%,占十二月份的94.64%.检验结果如下.
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1999年广西副伤寒沙门氏菌药物敏感性分析
1999年在广西武鸣、桂林等地发生副伤寒暴发流行,为配合流行病学调查和临床治疗,提高伤寒、副伤寒的防治质量 ,对从疫区收集到的67株甲型副伤寒杆菌进行抗菌药物敏感性试验,现将结果报告如下.
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甲型副伤寒流行菌株的分离及药敏试验
今年7月份以来,我县大圩镇发生甲型副伤寒流行,我们从疑似伤寒病人及其密切接触者中分离出39株甲型副伤寒杆菌,并且进行了抗菌素药敏试验,现报告如下.
