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中国莱姆病螺旋体伽氏疏螺旋体PD91鞭毛蛋白的基因克隆和表达
目的对中国莱姆病螺旋体伽氏疏螺旋体基因种参照菌株PD91的鞭毛蛋白编码基因进行克隆表达与基因序列分析.方法设计引物,用聚合酶链反应(PCR)技术获得PD91的鞭毛蛋白编码基因片段,经酶切、连接,插入质粒pET-11d中,构成重组质粒pET11d-fla,转化致大肠埃希菌BL21,提取质粒进行酶切、DNA测序和氨基酸序列分析鉴定,诱导表达,筛选高效表达株,应用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(WB)方法,鉴定重组蛋白及其抗原性.结果成功地获得了鞭毛蛋白的编码基因片段和基因重组,重组蛋白在宿主菌BL21中高效表达.WB结果显示重组鞭毛蛋白与PD91的鞭毛蛋白具有相同的抗原性.经测序显示该鞭毛蛋白的基因片段长度为1011 bp,与北美莱姆病螺旋体标准株B31的DNA碱基序列及氨基酸序列比较分析,同源性分别为94.70%、95.85%.结论在国内首次成功地对中国莱姆病螺旋体伽氏疏螺旋体基因种的鞭毛蛋白基因进行了克隆表达,并证实具有良好的抗原性,为莱姆病血清学诊断研究提供了较好的基础.
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沙门氏菌鞭毛蛋白对氢氧化铝制剂疫苗特异性免疫应答的影响
目的 评估沙门氏菌鞭毛蛋白作为添加剂在氢氧化铝疫苗制剂中的作用. 方法 以卵清蛋白(OVA)为抗原,氢氧化铝(Alhydrogel)为佐剂,鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白(FliC)或寡聚脱氧核糖核苷酸CpG-ODN 1826为添加剂,制备OVA/Alhydrogel、OVA/Alhydrogel+ FliC和OVA/Alhydrogel+ CpG-ODN 1826疫苗制剂.BALB/c小鼠随机分成3组,每组6鼠,分别用以上疫苗制剂以肌肉注射的方式免疫2次,间隔28 d.在初次免疫后第28 d和42 d采小鼠血,分离血清,用ELISA法测定血清中抗OVA IgG及亚型.在初次免疫后的第42 d处死小鼠,取脾,制备脾细胞,给予抗原刺激后检测培养上清中γ干扰素(IFN-γ)和白介素4(IL-4)水平. 结果 初次免疫后第42 d,OVA/Alhydrogel+ FliC制剂组OVA/Alhydrogel+ CpG-ODN 1826制剂组和OVA/Alhydrogel制剂组特异IgG滴度分别为(714.75±213.32) Unit、(863.78±355.05)Unit和(267.45±8.49) Unit,差异有统计学意义(P＜0.05)；前两制剂组比较差异无统计学意义(P＞0.05).IgG亚型分析和脾细胞培养上清IFN-γ和IL-4水平测定表明,OVA/Alhydrogel制剂诱导Th2偏向的免疫应答,而在加入沙门氏菌鞭毛蛋白后免疫应答有向Th1/Th2混合型转变的趋势. 结论 沙门氏菌鞭毛蛋白能增强特异性免疫应答反应,有望成为氢氧化铝疫苗制剂的添加剂.
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TLR5激动剂鞭毛蛋白预防小鼠异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病的初步研究
本研究旨在探讨Toll样受体(TLR5)激动剂鞭毛蛋白(flagellin)对小鼠异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的预防作用和可能作用机制.用主要组织相容性抗原完全不合的纯种近交系小鼠[供体鼠:雄性C57BL/6鼠；受体鼠:雌性BALB/c鼠]建立allo-HSCT的aGVHD动物模型.受鼠随机分为3组:鞭毛蛋白组,于移植前后2次尾静脉注射高纯度(纯度≥95％)的鞭毛蛋白50μl[5μg/(只·次)]预防aGVHD;单纯移植组,移植后仅给予等容量PBS;单纯照射组,仅照射不移植,亦给予等容量PBS.观察比较移植后aGVHD的表现.结果表明,移植小鼠均出现典型的aGVHD症状,单纯移植组小鼠死亡高峰在移植后第4-5天.用鞭毛蛋白作为aGVHD预防方案小鼠的aGVHD症状明显减轻,平均生存时间较单纯移植组显著延长(P＜0.05).三组小鼠移植前外周血白细胞数比较均无显著性差异,但在照射后第14、21天,鞭毛蛋白组较单纯移植组外周血白细胞数显著性升高(P＜0.05).鞭毛蛋白预防组移植小鼠aGVHD病理表现较单纯移植组明显减轻.流式细胞仪检测鞭毛蛋白组与单纯移植组移植前后不同时间点Treg细胞/CD4+T细胞含量结果也表明,移植后2-4周鞭毛蛋白组小鼠的Treg细胞数较单纯移植组明显增加(P＜0.05).结论:鞭毛蛋白对小鼠allo-HSCT后发生aGVHD有预防作用,能减轻其症状和病理损害程度,显著延长其平均生存时间,其机制有可能通过增加移植后小鼠的Treg细胞含量,从而有效改善并减轻移植后小鼠aGVHD.
关键词： TLR5激动剂 鞭毛蛋白 急性移植物抗宿主病 异基因造血干细胞移植 Treg细胞 -
幽门螺杆菌临床分离株flaA和flaB基因的克隆、表达和鉴定
所有幽门螺杆菌(Hp)菌株均有鞭毛,由染色体基因组中的flaA和flaB两个基因编码,全长分别为1 533bp和1 545bp,其核苷酸或氨基酸序列高度保守,与其它细菌鞭毛蛋白无抗原交叉,多数Hp感染者血清中可出现FlaA和FlaB抗体[1],因而FlaA和FlaB可作为基因工程疫苗和诊断试剂盒的候选抗原.我们构建了Hp临床菌株Y06的高效原核表达系统,鉴定了重组FlaA(rFlaA)和重组FlaB(rFlaB)抗原性和免疫反应性,检测了Hp临床分离菌株FlaA、FlaB抗原表达和感染者血清抗体情况.
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中国莱姆病螺旋体鞭毛蛋白中央区的基因克隆和表达
目的对中国莱姆病螺旋体Borrelia garinii基因种参照菌株PD91的鞭毛蛋白中央区的编码基因进行克隆表达,对重组鞭毛蛋白作为莱姆病血清学诊断抗原进行初步的研究,并进行基因序列和氨基酸序列分析.方法设计引物,用PCR技术获得PD91的鞭毛蛋白中央区的编码基因片段,经酶切、连接,插入质粒pET-30a中,构成重组质粒pET30a-mfla,转化到大肠杆菌BL21,提取质粒进行酶切、DNA测序和氨基酸序列分析鉴定,诱导表达,筛选高效表达株,应用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白及其抗原性.结果成功地获得了鞭毛蛋白中央区的编码基因片段和基因重组,重组蛋白在宿主菌BL21中高效表达.Western blot结果显示重组鞭毛蛋白的中央区与PD91的鞭毛蛋白具有相同的抗原性.经测序显示该中央区基因片段为鞭毛蛋白基因的409～786bp,与北美莱姆病螺旋体标准株B31的DNA碱基序列比较分析,同源性92%.结论成功地对中国莱姆病螺旋体Borrelia garinii基因种的鞭毛蛋白中央区进行了克隆表达,并证实具有抗原性,为我国莱姆病血清学诊断研究提供资料.
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空肠弯曲菌鞭毛蛋白FlaA的原核表达
空肠弯曲菌(CJ)为常见的人兽共患病原菌,实验表明,CJ的菌体蛋白和LPS抗原均在引起自身免疫反应的神经性疾患的发生过程中具有重要意义.CJ的鞭毛抗原亦有可能参与某些神经性疾患的病理作用导致机体损伤.
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甲型副伤寒沙门菌鞭毛蛋白的分离、纯化和鉴定
目的提纯甲型副伤寒沙门菌鞭毛蛋白并鉴定. 方法选用甲型副伤寒沙门菌,经自制的液体培养基扩大培养后,酸裂解法初步分离出鞭毛蛋白,用AKTA Explorer蛋白纯化系统除盐,弱阴离子交换层析纯化.纯化的蛋白用SDS-PAGE、Western blot和磷钨酸负染扫描电子显微镜(scanning electron microcopy, SEM)观察并摄片鉴定.考马斯亮蓝法测定所获得鞭毛蛋白的产量. 结果 SDS-PAGE提示纯化的鞭毛蛋白为一条相对分子质量(Mr)为52×103蛋白带;免疫印迹试验亦提示条带在Mr 52×103处; SEM观察发现该鞭毛蛋白呈丝状;三者均证实该蛋白为同一均质蛋白.蛋白定量测得每克湿重的细菌可提取(4.8±0.5)mg鞭毛蛋白. 结论经酸裂解法可获得高产量的鞭毛蛋白,且易于纯化和鉴定.
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脓毒症肺损伤大鼠鞭毛蛋白含量变化及其意义
急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是急性肺损伤(ALI)的严重阶段,脓毒症为其常见病因.近的研究表明[1-3],革兰阴性菌产生的鞭毛蛋白有高强致炎作用,推测鞭毛蛋白可能是急性肺部炎症过程的重要激发物.但在脓毒症诱导ALI时,鞭毛蛋白有何变化目前尚不清楚.本实验通过观察脓毒症肺损伤大鼠外周血血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)、肺组织匀浆中鞭毛蛋白的含量,旨在阐明ALI发病机制,为其防治提供新的理论及实验依据.
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细菌鞭毛蛋白对结肠炎小鼠结肠中趋化因子CXCL11表达的影响
趋化因子是一个促炎多肽细胞因子的超家族,主要由白细胞与造血微环境中的基质细胞分泌,可结合在内皮细胞的表面,有激活和趋化白细胞的作用,研究显示趋化因子CXCL家族可在一系列自身免疫性疾病中产生明显的促炎效应[1].但目前CXCL家族在炎症性肠病(IBD)发病过程中的作用机制仍不甚清楚.本研究通过建立2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠结肠炎模型,对CXCL11在IBD进程中的促炎效应以及细菌鞭毛蛋白对其的作用机制进行探讨.
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脓毒症肺损伤大鼠鞭毛蛋白含量与TNF-α相关性研究
目的 观察脓毒症大鼠肺损伤模型中鞭毛蛋白与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的相关性.方法 120只健康雄性Wistar大鼠随机分为2组,即脓毒症组、假手术组.脓毒症组用盲肠结扎穿孔法建立模型,假手术组除不结扎穿孔、不切除盲肠外,其他处理同脓毒症组.分别于致伤后2、4、6、12、24、48h时点,取大鼠颈动脉血做血气分析观察动脉血氧分压(PaO2)的变化;光镜下观察肺组织病理变化;采用ELISA法检测外周血血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织匀浆中鞭毛蛋白含量以及外周血血清TNF-α的含量.结果 成功复制了大鼠脓毒症肺损伤模型,脓毒症组在致伤后12h时点血PaO2明显下降,致伤后48h时点降到低,脓毒症组12、24、48h时点血PaO2显著低于对应时点假手术组(P＜0.01).光镜下可见脓毒症组24h时点肺组织有以中性粒细胞为主的炎细胞浸润、肺间质和肺泡水肿,假手术组未见明显病理变化.脓毒症组血清、BALF和肺组织匀浆中鞭毛蛋白含量在致伤后12h和24h时点明显增加,12、24、48h时点显著高于对应时点假手术组(P＜0.01),脓毒症组血清TNF-α含量在致伤4h后各时点均显著高于对应时点假手术组(P＜0.01).Pearson相关性分析表明,脓毒症发生时大鼠血清、BALF和肺组织匀浆中鞭毛蛋白含量与外周血血清TNF-α含量呈正相关(r=0.711,P＜0.05;r=0.66,P＜0.05;r=0.52,P＜0.05).结论 脓毒症发生时,鞭毛蛋白可能通过诱导TNF-α的产生导致肺损伤.
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脓毒症患者外周血鞭毛蛋白含量和单个核细胞TLR5 mRNA表达的测定及其意义
目的 通过检测脓毒症患者外周血鞭毛蛋白的含量及单个核细胞Toll样受体5(TLRS)mRNA的表达,进一步探讨脓毒症致急性肺损伤(ALI)的发病机制.方法 选取经检验科体液镜检或培养证实为G-杆菌所致脓毒症患者(G-菌组)26例,G1球菌所致脓毒症患者(G+菌组)15例,正常对照组为健康人15例:采用ELISA法检测外周血鞭毛蛋白的含量.密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,半定量RT-PCR法检测TLR5 mRNA表达水平.结果 G+菌组、正常对照组的外周血中未检测到鞭毛蛋白,(G-菌组的外周血鞭毛蛋白的含量为6.636±5.147ng/ml;G-菌组TLR mRNA表达水平较G+菌组、正常对照组显著升高(P＜0.01),G+菌组与正常对照组相比无显著性差异(P＞0.05).结论 鞭毛蛋白可能通过TLR5介导参与了AU的发生、发展.
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Toll样受体5在鞭毛蛋白致大鼠急性肺损伤中的表达研究
目的检测鞭毛蛋白诱导急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织中Toll样受体5(TLR5)mRNA的表达变化,初步探讨TLR5在鞭毛蛋白致大鼠ALI中的作用.方法从大肠杆菌ATCC25922中分离纯化鞭毛蛋白并鉴定.108只SD大鼠随机分为正常对照组(n=36)、致伤1组(n=36)和致伤2组(n=36).经尾静脉注射鞭毛蛋白以建立大鼠ALI模型.每组分别在6个时相点用原位杂交法检测大鼠肺组织中TLR5 mRNA的表达,并观察动脉血气分析和肺病理改变.结果从大肠杆菌ATCC25922中成功分离纯化出鞭毛蛋白,其分子量约65kD.静脉注射鞭毛蛋白成功建立了大鼠急性肺损伤模型.从致伤后1h开始,鞭毛蛋白致肺损伤大鼠肺组织中TLR5 mRNA表达增加,并随时间推移和鞭毛蛋白剂量增加而表达增多.各致伤组大鼠动脉血氧分压降低,肺组织出现肺间质、肺泡水肿和炎性细胞浸润等病理改变.结论静脉注射鞭毛蛋白可导致大鼠ALI;TLR5作为细胞膜上鞭毛蛋白的受体参与了鞭毛蛋白致大鼠急性肺损伤的作用过程.
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SIGIRR对鞭毛蛋白诱导的H292细胞TLR5表达的影响
目的 通过上调SIGIRR在人气道上皮细胞株H292中的表达,研究SIGIRR对鞭毛蛋白诱导的Toll样受体5(TLR5)表达的影响.方法 实验设以下6组:H292组(未给予任何处理的H292细胞)、eH292组(转染空质粒pEGFP-N1的细胞)、sH292组(转染SIGIRR-EGFP真核表达质粒的细胞),另设加入鞭毛蛋白(终浓度0.2μg/ml)的上述各组细胞,分别命名为FH292组、FeH292组和FsH292组.构建SIGIRR-EGFP融和蛋白的真核表达载体,脂质体转染法转染细胞,24h后用荧光显微镜观察融合蛋白的表达情况.Western blotting检测TLR5蛋白表达,ELISA法测定细胞上清中TNF-α浓度.结果 转染重组载体的H292细胞可表达SIGIRR-EGFP融和蛋白,其主要分布于细胞质.通过对TLR5蛋白条带的光密度进行观察发现,FH292组(8.06±1.53)较H292组(1.71±0.12)、FeH292组(7.32±0.99)较eH292组(2.32±0.13)、FsH292组(7.01±0.83)较sH292组(2.01±0.07)TLR5蛋白表达明显增加(P<0.01).FH292组TNF-α浓度(114.06±10.34)较H292组(43.52±2.84)明显增加,而FsH292组TNF-α浓度(69.56±11,23)较FeH292组(117.76±9.07)显著下降(P<0.01).结论 SIGIRR的表达上调可抑制鞭毛蛋白诱导的H292细胞中TNF-α的产生,对TLR5表达无影响.SIGIRR在该信号通路中发挥了"刹车"作用,但该作用并不是由TLR5介导的.
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Toll样受体5激动剂CBLB502对7.0Gy60Coγ射线照射恒河猴的辐射防护作用观察
目的 观察Toll样受体5激动剂CBLB502对7.0Gy 60Coγ射线全身照射恒河猴的辐射防护作用.方法 30只健康成年恒河猴分为对症治疗组、WR-2721(辐射防护剂氨磷汀)组和CBLB502 2.5、10、40μg/kg组,每组6只.所有动物均用60C0 γ射线放射源一次全身双侧照射7.0Gy(剂量率13.00～13.52cGy/min).CBLB502给药剂量为2.5、10和40μg/kg,阳性对照药WR-2721剂量为30mg/kg,对症治疗组注射生理盐水0.3ml/kg,均为照射前0.5h一次肌肉注射.所有动物照射后在同一原则下给予对症治疗.观察各组动物一般体征、外周血象、造血祖细胞集落培养情况及组织病理学检查结果.结果 照射后40d时CBLB502 10、40μg/kg组动物存活率均为100％,而对症治疗组存活率仅为33％(2/6);WR-2721组各系造血恢复稍快于对症治疗组,但差异无统计学意义;与对症治疗组比较,CBLB502 40μg/kg组外周血白细胞和血小板低值显著增高,血小板低值持续时间缩短,开始恢复时间提前,输血量明显减少(P＜0.05),骨髓、肠道等组织损伤明显减轻.结论 7.0Gy 60Coγ射线全身照射猴均发生了重度骨髓型急性放射病.照前30min一次性给予40μg/kg CBLB502对7.0Gy 60Coγ射线照射猴有明显的辐射防护作用,其效果优于目前常用的辐射防护剂WR-2721.
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rhKGF、CBLB502和WR2721对放射性口腔黏膜炎的防治效果观察
目的 比较rhKGF、CBLB502、WR2721对放射性口腔黏膜炎(ROM)的防治作用.方法 健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、照射对照组、rhKGF组、CBLB502组及WR2721组.其中24只小鼠观察17Gy头颈部照射小鼠的30d存活率及体重变化,另外20只小鼠利用1％甲苯胺蓝染色法观察照射小鼠舌组织溃疡情况,HE染色观察舌组织病理学改变,Ki-67免疫组化检测黏膜角化上皮细胞增殖情况.结果 与照射对照组相比,rhKGF和WR2721给药组小鼠30d存活率显著提高,体重恢复较快,角化上皮细胞增殖显著,未发生明显的口腔黏膜炎;CBLB502组小鼠的存活率、体重变化及组织病理学指标与照射对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 rhKGF和WR2721对放射性口腔黏膜炎有较好的防治作用,而CBLB502并不能减轻放射性口腔黏膜炎的发生.
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弱精子症发病机制的研究进展
弱精子症是男性不育的主要原因之一,多由染色体异常、微生物感染、内分泌紊乱、精索静脉曲张和自身免疫等因素引起,目前仍有相当比例弱精子症的发病机制未明.精子鞭毛结构蛋白对维持精子正常形态和运动能力十分重要,微管相关蛋白Tektins和细胞骨架重要组成成分Septins等基因发生突变或表达量减少均可导致精子的运动能力下降;精子细胞内的Ca2+、Cl-等离子浓度影响精子内磷酸化级联反应,使精子不断适应外界环境变化并完成获能、顶体反应等重要生理功能;Catspers、富半胱氨酸分泌蛋白(CRISPs)等离子通道及离子通道调节蛋白的表达异常与弱精子症发病密切相关;线粒体内的氧化磷酸化反应为精子运动提供能量,氧化磷酸化酶和呼吸链基因突变以及线粒体相关微小RNA表达异常都可能降低精子的运动能力;另外,JAK-STAT信号转导通路与精子的发生相关,而线粒体介导的精子细胞凋亡通路也与精子活动力低下有关.现就弱精子症发病机制的新研究进展进行综述.
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精子成熟过程中鞭毛蛋白的变化
精子功能成熟是指精子在附睾运行过程中逐渐获得运动和受精的能力.近年来,随着基因敲除和过表达等基因功能研究技术的发展和应用,发现精子鞭毛蛋白的变化与修饰在精子成熟过程中发挥重要作用.例如:在附睾中,精子内3磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)数量增加并结合至鞭毛纤维鞘上,目的是参与糖酵解过程为精子供能;又如,同样结合在纤维鞘上的激酶锚定蛋白4(a kinase anchoring protein 4,AKAP4)在附睾中发生磷酸化,介导鞭毛运动.综述精子鞭毛蛋白的新研究进展,包括鞭毛蛋白数量、结构和功能的变化,为进一步阐明精子运动、临床弱精子症等生理与病理机制以及阻断精子运动的男性避孕疫苗研发提供参考.
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鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白可增强DnaJ蛋白的免疫反应
目的：明确鞭毛蛋白的黏膜佐剂作用，并研究其与DnaJ蛋白联合免疫对肺炎链球菌感染的保护作用。方法：含有重组质粒pET-28（ a）/鞭毛蛋白基因的大肠杆菌DE3经IPTG诱导后表达鞭毛蛋白，纯化后用于后期动物实验如下：将C57BL/6小鼠随机分为四组通过鼻腔分别滴入鞭毛蛋白（10μg）与DnaJ蛋白（10μg）混合剂（实验组）、DnaJ蛋白（10μg）（对照组1）、DnaJ蛋白（10μg）与GST蛋白（10μg）混合剂（对照组2），每组均30μl。通过检测抗体的效价、亚型以及细胞因子水平来评估鞭毛蛋白能否提高肺炎链球菌DnaJ蛋白诱导的免疫效应；然后用肺炎链球菌D39（5×107 CFU）进行鼻腔攻毒，观察小鼠的生存率，以评估其保护效应。结果：实验组较对照组产生更高效价的血清IgG（其中主要产生IgG1）和更高水平的细胞因子IFN-γ、IL-17A和IL-4；另一方面实验组对致死性D39感染的保护率达60％，DnaJ蛋白免疫组的保护率为50％。结论：鞭毛蛋白与DnaJ蛋白联合应用可以增强宿主对DnaJ蛋白的免疫反应，并且对致死剂量的肺炎链球菌感染有保护作用，提示鞭毛蛋白可以作为肺炎链球菌DnaJ蛋白疫苗的佐剂应用。
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金黄色葡萄球菌GapC蛋白与鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白的融合表达及其活性
目的 在大肠埃希菌中融合表达金黄色葡萄球菌(taphlococcus.aure us,S.aureus)GapC蛋白与鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白,并检测其甘油醛-3磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)活性.方法 采用PCR技术分别扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白flic基因和S.Aureus GapC基因,通过overlap PCR将这两段基因拼接并克隆至载体pQE30a,构建重组表达质粒pQE30-flic-GapC,将重组表达质粒转化E.coli XL-blue,IPTG诱导表达,表达产物经镍柱亲和层析试剂盒纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot分析,并检测其GAPDH活性.结果 重组表达质粒pQE30-flic-GapC经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达产物相对分子质量约95 000,佳诱导表达时间为5h,主要以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的31.4％;纯化产物可与小鼠抗S.aureus全菌体多抗血清和抗鼠伤寒沙门菌全菌体多抗血清发生特异性反应,GAPDH活性为(0.337±0.019).结论 成功表达并纯化了具有较高生物学活性的flic-GapC融合蛋白,为S.aureus亚单位疫苗的研究奠定了基础.
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绿脓杆菌及其鞭毛蛋白联合rhIL-12体外对慢性乙型肝炎患者细胞免疫功能的影响
目的 探讨绿脓杆菌及其鞭毛蛋白联合rhIL-12体外对慢性乙型肝炎患者细胞免疫功能的影响,为rhIL-12作为佐剂应用于临床提供理论依据.方法 取健康人及慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMCs),分别与绿脓杆菌、鞭毛蛋白、rhIL-2、绿脓杆菌+rhIL-12、鞭毛蛋白+rhIL-12孵育,ELISA法检测细胞培养上清中IFNγ的含量.结果 绿脓杆菌和鞭毛蛋白组只诱导产生低水平的IFNγ,rhIL-12组诱导产生IFNγ的水平较阴性对照组显著提高;而绿脓杆菌+rhIL-12组、鞭毛蛋白+rhIL-12组诱导产生IFNγ的水平显著高于绿脓杆菌、鞭毛蛋白和rhIL-12组,差异均有统计学意义,且rhIL-12的作用呈剂量依赖性.结论 绿脓杆菌及其鞭毛蛋白联合rhIL-12体外能显著提高健康人和慢性乙型肝炎患者PBMCs产生IFNγ的水平,增强其细胞免疫应答.
