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应用逆转录-聚合酶链反应方法检测孕妇外周血中胎儿ε/γ血红蛋白基因
目的探索检测孕妇外周血中胎儿特异血红蛋白基因表达的方法.方法提取孕妇全血mRNA,经体外逆转录后,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,应用ε/γ特异引物引导扩增胎儿特异血红蛋白基因片段,经琼脂糖凝胶电泳后,在凝胶成像系统下观察.结果在7名妊娠妇女中,6名扩增出ε/γ基因片段,1名为阴性.结论应用RT-PCR方法可直接从孕妇全血中扩增出胎儿特异血红蛋白基因片段,孕妇全血中微量的胎儿mRNA已基本满足体外逆转录及扩增的要求.利用孕妇外周血进行的无创伤性产前诊断具有可行性.
关键词： 逆转录-聚合酶链反应 ε/γ血红蛋白基因 孕妇 -
母血中胚胎细胞特异性血红蛋白基因表达
目的检测孕妇外周血中胎儿血红蛋白基因表达,为无创伤性产前诊断奠定基础.方法提取孕妇全血mRNA,经体外逆转录后,用RT-PCR方法,应用ε/γ引物引导扩增胎儿血红蛋白基因片段,经琼脂糖凝胶电泳后,在凝胶成像系统下观察.结果在50例妊娠妇女中,44例扩增出ε/γ基因片段,6例为阴性.结论应用RT-PCR方法可直接从孕妇全血中扩增出胎儿血红蛋白基因片段,孕妇全血中微量的胎儿mRNA已基本满足体外逆转录及扩增的要求.利用孕妇外周血进行的无创伤性产前诊断具有可行性.
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孕妇外周血中胎儿特异性血红蛋白基因的检测与定性分析
目的:自孕妇外周血中检测胎儿γ血红蛋白基因及探索Gel Works 1D软件应用于PCR扩增产物的定性分析.方法:提取孕妇全血mRNA,经体外逆转录后,应用ε/γ引物引导扩增胎儿特异血红蛋白基因片段,以Nde Ⅱ内切酶对其酶切,经琼脂糖凝胶电泳,凝胶成像系统扫描成像,用Gel Works 1D软件对凝胶图像进行定性分析.结果:成功自孕妇外周血中扩增出胎儿ε/γ血红蛋白基因.定性标准曲线公式:Y＝0.03592X~2－11.94X＋1092,R~2＝0.9978,精确度为98.6%.ε/γ基因被NdeⅡ酶切成三个γ基因片断,大小分别为191 bp、57bp和26bp.结论:Gel Works 1D软件可以对PCR扩增产物进行定性分析,孕妇全血中微量的胎儿mRNA已基本满足体外逆转录及扩增的要求,胎儿γ血红蛋白基因的检测可为无创伤性产前诊断的发展奠定基础.
关键词： RT-PCR ε/γ血红蛋白基因 Gel Works软件 定性分析
