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两种机会性寄生原虫——微小隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫基因检测方法的建立
目的 建立两种机会性寄生原虫--微小隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫(贾第虫)基因检测方法.方法 从微小隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫感染者粪便标本内分离纯化卵囊和包囊,提取基因组DNA.根据微小隐孢子虫18S rRNA基因和贾第虫磷酸丙糖异构酶(tim)基因各设计或合成两对特异性引物,采用PCR技术分别对从卵囊和包囊提取的和6种对照DNA样本(日本血吸虫、刚地弓形虫、溶组织内阿米巴、旋毛虫和阴道毛滴虫以及人体血细胞DNA等),以及此二种虫相互间的DNA样本进行检测,以确定该法的特异性和敏感性.方法 建立后,取艾滋病患者粪便标本对之进行检测.结果 从微小隐孢子虫和贾第虫的DNA样本中分别扩增出各自相应基因的500bp和683 bp长度的片段;少可检测出20pg隐孢子虫和0.4pg贾第虫DNA;几种对照DNA样本均不发生交叉反应;受检的30例艾滋病患者粪便标本中,7例显示微小隐孢子虫阳性,未检出贾第虫.结论 建立的基因检测方法,对微小隐孢子虫和贾第虫的检测具有高度的特异性和敏感性,可用于临床艾滋病合并感染的早期诊断和人群流行病学筛查.
关键词: 微小隐孢子虫 蓝氏贾第鞭毛虫 18S rRNA基因 磷酸丙糖异构酶基因 -
土耳其斯坦东毕吸虫磷酸丙糖异构酶基因的克隆及其序列分析
目的克隆土耳其斯坦东毕吸虫磷酸丙糖异构酶的全长基因.方法根据日本血吸虫和曼氏血吸虫磷酸丙糖异构酶基因的保守区设计引物,利用RT-PcR扩增出土耳其斯坦东毕吸虫磷酸丙糖异构酶基因的大片段,再结合RAcE技术分别得到磷酸丙糖异构酶基因的3′端和5′端,将3部分序列拼接后获得磷酸丙糖异构酶基因全长cDNA序列,并提交GenBank.结果成功克隆了土耳其斯坦东毕吸虫磷酸丙糖异构酶基因全长cDNA序列并提交GenBank,登录号为DQ092331.结论土耳其斯坦东毕吸虫磷酸丙糖异构酶基因全长cDNA的克隆为进一步表达及其生物学性能的分析提供了理论基础.
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吐鲁番地区乡村小学生感染蓝氏贾第鞭毛虫基因型的研究
目的 了解吐鲁番地区乡村小学生感染蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)的基因型及亚型,探索不同地域贾第虫分离虫株基因之间的蓝氏贾第鞭毛虫的相互关系.方法 对感染贾第鞭毛虫的小学生粪便内的蓝氏贾第鞭毛虫的磷酸丙糖异构酶(triose phosphate isomerase,简称为tin/tpi)基因进行基因检测和基因序列分析.结果 19个分离虫株为集聚体A型,11个分离虫株为集聚体B型.结论 人群感染蓝氏贾第鞭毛虫分离虫株种之间的进化关系不受不同地理区域分布的影响,而虫株亚种之间可能受不同地理区域分布的影响有差别.
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131猪带绦虫磷酸丙糖异构酶基因的克隆、表达和分析