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AKTA Explorer蛋白纯化系统文献资料
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甲型副伤寒沙门菌鞭毛蛋白的分离、纯化和鉴定
目的提纯甲型副伤寒沙门菌鞭毛蛋白并鉴定. 方法选用甲型副伤寒沙门菌,经自制的液体培养基扩大培养后,酸裂解法初步分离出鞭毛蛋白,用AKTA Explorer蛋白纯化系统除盐,弱阴离子交换层析纯化.纯化的蛋白用SDS-PAGE、Western blot和磷钨酸负染扫描电子显微镜(scanning electron microcopy, SEM)观察并摄片鉴定.考马斯亮蓝法测定所获得鞭毛蛋白的产量. 结果 SDS-PAGE提示纯化的鞭毛蛋白为一条相对分子质量(Mr)为52×103蛋白带;免疫印迹试验亦提示条带在Mr 52×103处; SEM观察发现该鞭毛蛋白呈丝状;三者均证实该蛋白为同一均质蛋白.蛋白定量测得每克湿重的细菌可提取(4.8±0.5)mg鞭毛蛋白. 结论经酸裂解法可获得高产量的鞭毛蛋白,且易于纯化和鉴定.
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甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白的分离纯化及其抗血清的制备
目的提纯甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白并制备其抗血清.方法酸裂解法分离副伤寒杆菌鞭毛蛋白,通过半饱和硫酸铵提取、AKTA Explorer蛋白纯化系统除盐及弱阴离子交换层析纯化,所获得鞭毛蛋白的产量通过考马斯亮蓝法测定.纯化后的鞭毛蛋白免疫新西兰大白兔,通过免疫印迹试验和双向免疫扩散试验,确定血清中是否有抗鞭毛蛋白抗体产生及其效价.结果SDS-PAGE提示,纯化的鞭毛蛋白为1条相对分子量为52×103蛋白带;免疫印迹实验亦提示条带在52×103处;蛋白定量测得每1克湿重的细菌可提取(4.8±0.5)mg鞭毛蛋白;抗鞭毛蛋白抗血清效价为1:64.结论经酸裂解法可获得高产量的鞭毛蛋白,其抗血清易于制备,滴度高,该抗血清可能在拮抗脓毒血症炎症损伤作用方面有积极意义.
