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H1a基因文献资料
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甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白H1a基因原核表达系统构建及其表达产物的免疫原性和保护作用
目的构建甲型副伤寒杆菌(Salmonella paratyphi A)H1a基因原核表达系统,确定表达产物rH1a免疫原性和保护作用,检测甲型副伤寒杆菌临床菌株H1 a基因携带和表达情况.方法采用高保真PCR从甲型副伤寒杆菌临床株JH01中扩增H1a基因,T-A克隆后测序,构建H1a基因原核表达系统pET32a-H1a-E.coli BL21DE3.采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检查rH1a表达情况,Ni-NTA亲和层析法收集rH1a.采用Western blot鉴定其免疫反应性和免疫原性.建立PCR和ELISA检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株H1a基因携带和表达频率.观察rH1a对甲型副伤寒杆菌50001株感染小鼠的免疫保护作用.结果与报道的相关序列比较,所克隆的H1a基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为99.59%.rH1a表达量为细菌总蛋白的60%左右.甲型副伤寒杆菌全菌抗血清能识别rH1a并与之结合.rH1a免疫家兔可产生抗体.100%(98/98)甲型副伤寒杆菌临床菌株均含有H1a基因并表达H1a.500μgrH1a灌喂或皮下注射免疫小鼠受甲型副伤寒杆菌50001株攻击后的存活率均为50.0%,若加入5μgrLTB,存活率分别上升至75.0%和66.7%.结论本研究成功地从甲型副伤寒杆菌临床菌株中构建了H1a基因高效原核表达系统.rH1a有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用.甲型副伤寒杆菌临床菌株广泛存在H1a基因并高频率表达.
