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清开灵注射液中杂蛋白的检测方法研究
目的:建立清开灵注射液中大分子杂蛋白的检测方法.方法:以三氯乙酸沉淀结合双缩脲法初步测定清开灵注射液中杂蛋白的浓度,再用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测杂蛋白的分子量.结果:清开灵注射液成品中杂蛋白的分子量在3~7 KD之间.结论:本方法可用于检测清开灵注射液中的大分子杂蛋白.
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真核细胞表达基因工程抗体的研究进展
大肠杆菌E.coli表达系统是非常常用、有效和方便的表达系统,可以进行许多异源蛋白的高效表达.然而原核细胞系统表达蛋白时,存在多种缺陷:真核基因通常含有内含子,原核细胞不能对其进行正确的剪切和拼接;缺乏真核生物的蛋白翻译后修饰和加工;表达产物多以包涵体形式存在,复性困难且效率很低;背景杂蛋白多、不易于纯化等,因此不可避免地对利用原核细胞表达基因工程抗体造成一定影响.
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武生狂犬病防制系列产品及相关研究
中国生物技术集团公司所属武汉生物制品研究所具有50多年的生物制品生产历史,1980年率先研制成功原代地鼠肾细胞制备的狂犬病疫苗(PHKCV),疫苗用病毒株为北京aG株,并开始大量生产应用.1993年,为了进一步提高狂犬病疫苗效力,生产出浓缩地鼠肾细胞狂犬病疫苗,使狂犬病疫苗效力由过去的1.3 IU/剂提高到2.5 IU/剂.但由于同时也浓缩了一些组织培养过程中的杂蛋白,如牛血清蛋白及细胞蛋白等,临床上出现的不良反应也增多起来,因此在1999年,又研制成功第二代狂犬病疫苗即纯化的Vero细胞狂犬病液体疫苗--武生旺宁.该疫苗首次使用CTN毒株,接种在长成单层的Vero细胞上,经超滤浓缩、病毒灭活并纯化后,加入铝佐剂而成.通过一系列的浓缩和纯化工艺,去除了大量的杂蛋白,使病毒有效成分的含量和纯度大幅提高,所引起的不良反应大大降低.经临床Ⅱ期试验接种31人,5针接种后14 d平均抗体效价达到11.89 IU/mL,抗体阳转率达到100%.临床Ⅲ期试验接种观察304人,结果全身反应率为4.28%,注射局部反应率为7.24%.武生旺宁是所有狂犬病疫苗中唯一通过我国狂犬病街毒攻击保护性试验的,试验结果表明,武生旺宁即使1:5稀释免疫小鼠,仍能100%抵抗我国狂犬病街毒的攻击[1].经过对我国狂犬病街毒和疫苗株的分子流行病学分析发现,疫苗株CTN与另一疫苗株aG株相比,更接近我国的街毒株(待发表).其生产工艺和质控指标2005年还通过了世界卫生组织专家的考察,其细胞残留DNA低于100 pg/mL,符合国家药典标准,与国外同类产品相比更安全.
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二维凝胶电泳的新技术及其应用
1975年,O'Farrell以及Klose等人发明了双向凝胶电泳(two- dimensional gel electrophoresis, 2-DE),根据样品中蛋白质的两个重要理化特性:等电点(is-oelectric points, PI)和分子量( molecular weight, MW),将样品中的蛋白质进行分离.其原理是第一向基于蛋白质 PI不同用等电聚焦( isoelectric focusing, IEF)分离,第二向则按 MW的不同用聚丙烯酰胺十二烷基硫酸钠凝胶电泳( sodium dodecyl sulfate_polyacrylamide gel electrophoresis, SDS- PAGE)分离,把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上分开.其后的 25年中, 2- DE经过了多方面的改进,而且相应蛋白鉴定技术也得到了发展,这使得 2- DE广泛应用于蛋白质组学( proteomics)领域,成为研究"结构蛋白质组"与"功能蛋白质组"的有使用价值的方法,在蛋白质组研究中有着不可或缺的地位.现对 2- DE近期的进展及其应用作一综述.
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高效毛细管电泳法测定牛乳铁蛋白的含量
目的:采用高效毛细管电泳法(HPCE)的毛细管区带电泳模式(CZE)分离测定牛乳铁蛋白(BLF)的含量.方法:熔融石英毛细管柱67 cm(有效长度55 cm)×50μm;运行缓冲液为33 mmol·L-1磷酸二氢钾-10 mmol·L-1磷酸溶液(pH 2.5);压力进样6.9 kPa × 5 s;运行电压25 kV;检测波长214 nm;毛细管柱温为25℃.结果:乳铁蛋白进样浓度在100.0~600.0 mg·L-1范围内线性关系良好(r=0.999 5),低检测限为25 mg·L-1.结论:采用HPCE测定乳铁蛋白及杂蛋白的方法简便,结果可靠.
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牛乳铁蛋白稳定性研究
目的: 研究牛乳铁蛋白原料的稳定性.方法:以反相高效液相色谱法测定牛乳铁蛋白及其杂蛋白的含量,分别用强光照射法、加速试验法和室温留样观察法对牛乳铁蛋白原料进行稳定性试验.结果:牛乳铁蛋白检测浓度线性范围为 25~ 1 000μ g/ml, RSD=0.05%;其在强光照射、加速试验和室温留样观察试验中,各项指标均符合质量标准.结论:牛乳铁蛋白在室温、密闭的贮存条件下性质稳定.
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高效毛细管电泳法测定牛乳铁蛋白的含量及杂蛋白的方法学研究
目的:采用高效毛细管电泳法(HPCE)的毛细管区带电泳模式(CZE)分离测定牛乳铁蛋白(BLF)的含量.方法:熔融石英毛细管柱67 cm(有效长度55 cm)×50μm;运行缓冲液为33mmol·L-1磷酸二氢钾-10mmol·L-1磷酸溶液(pH=2.50);压力进样6.9kPa×5 s;运行电压25 kV;检测波长λ=214 nm;毛细管柱温为25℃.结果:乳铁蛋白进样浓度在100.0-600.0μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9995),低检测限为25μg·mL-1.结论:采用HPCE测定乳铁蛋白及杂蛋白的方法简便,结果可靠.