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不同Alloferon-1体外抗病毒效果
Alloferon-1是Chemysh等于2002报道的一种由13个氨基酸组成、相对分子质量为1481.53的新型抗菌肽,动物实验证实该抗菌肽有较强的抗流感病毒和抗白血病细胞的活性.人工合成或重组表达的抗菌肽Magainin-Ⅱ的生物学活性与大然产物相同.本研究中构建了串联式表达Alloferon-1的原核重组表达系统得到rAllofemn-1-EK,同时人工合成了sAIlofemn-1和sAlloferon-1-EK,比较重组及人工合成的3种AIIofemn-1体外抗病毒活性,以期为抗病毒新药研发提供实验依据.
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人血清淀粉样蛋白SAA1蛋白的原核重组表达
目的:重组及表达人血清淀粉样蛋白SAA1融合蛋白,为进一步制备早期诊断冠心病的单克隆抗体做准备.方法:应用PCR技术,以成人肝脏的cDNA文库做模板,扩增出长度为315bp的人血清淀粉样蛋白SAA1基因,并将其分别与带有HIS标签的PET-32a载体及GST标签的PGEX-4T-1载体连接,转化入DH5α感受态细胞中进行克隆并测序鉴定.并在大肠杆菌表达菌BL21菌中表达SAA1融合蛋白,之后分别应用SDS-PAGE及Westernblot技术检验重组蛋白的纯度.结果:经SDS-PAGE凝胶电泳后,我们分别看到了分子量为32kD和分子量为38kD的两个蛋白条带,这两个条带分别为PET-32a-SAA1重组蛋白和PGEX-4T-1-SAA1重组蛋白,且这两种蛋白在超声后存在于菌液的沉淀中,证明在大肠杆菌中实现了不溶性的包涵体形式的表达,经Western blot鉴定,分别以HIS标签抗体和GST标签抗体为第一抗体,以鼠二抗为第二抗体,证明所表达的蛋白质为SAA1融合蛋白.结论:采用原核表达方法,经免疫纯化可获得高纯度的SAA1融合蛋白,为进一步制备相应的单克隆抗体和开发以SAA1增高为指标之一的冠心病诊断试剂盒打下基础,为冠心病的诊断开辟新途径.
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Ad-Wnt3a-GFP的原核重组与真核包装
目的 对Ad-Wnt3a-GFP穿梭重组体与骨架载体进行原核重组和真核包装.方法 将Ad-Wnt3a-GFP穿梭重组体与骨架载体以电穿孔法共转染至原核包装细胞BJ5183；再将原核重组体用脂质体转入真核包装细胞293H进行包装.结果 ①电泳鉴定得到原核重组体；②得到完整的具感染能力的病毒颗粒；③病毒颗粒能表达标签蛋白.结论 获得了具有感染能力的病毒颗粒.
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Ad-PDZ1-GFP的原核重组与真核包装
目的对Ad-PDZ1-GFP穿梭重组体与骨架载体进行原核重组和真核包装.方法将Ad-PDZ1-GFP穿梭重组体与骨架载体以电穿孔法共转染至原核包装细胞BJ5183;再将原核重组体用脂质体转入真核包装细胞293H进行包装.结果①电泳鉴定得到原核重组体;②得到完整的具感染能力的病毒颗粒;③病毒颗粒能表达标签蛋白.结论获得了具有感染能力的病毒颗粒.
