首页 > 文献资料
-
应用杆状病毒表达系统在Sf9昆虫细胞中重组表达Legumain蛋白
目的 通过昆虫-杆状病毒表达系统表达获得Legumain蛋白,为进一步研究其在葡萄膜黑色素瘤中的作用建立基础.方法 实验研究.对2011年4月至2012年1月在陕西省眼科中心应用克隆Legumain蛋白基因,并将其基因片段插入pFastBac载体获得重组载体,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞后得到重组Bacmid,转染昆虫Sf9细胞,Western Blotting印迹和SDS-PAGE检测重组蛋白的表达.结果 获得了Legumain蛋白的重组杆状病毒;Western Blotting印迹和SDS-PAGE分析表明,该重组杆状病毒感染昆虫Sf9细胞后表达Legumain蛋白,与预期结果一致.结论 通过昆虫-杆状病毒表达系统可成功获得Legumain蛋白,从而为进一步研究其在葡萄膜黑色素瘤侵袭与转移机制的作用奠定了工作基础.
关键词: 杆状病毒 表达系统 Sf9昆虫细胞 Legumain蛋白 -
单链抗体及其在肿瘤治疗中的应用
单链抗体(single chain variable fragment,ScFv)是利用基因工程技术衍生出来的一种小分子工程性抗体。单链抗体由抗体的重链可变区(heavy chain,VH)和轻链可变区(light chain,VL),通过一段人工合成的多肽序列(Linker)连接而成,其大小只有完整抗体的1/6,但完全保持了抗体与特异性抗原结合的能力。由于单链抗体是抗体重链与轻链可变区的融合表达蛋白,所以在各种细胞内表达后无须组装即能保持活性,且易于纯化。单链抗体具有分子质量小、穿透力强、半衰期短、抗原结合特异性强、免疫原性弱和可以在多种宿主细胞中表达的特点而备受科研工作者的关注,并广泛应用于基础研究和疾病的诊断与治疗过程中,其中在肿瘤的诊断和治疗过程中研究深入应用广泛[1-2]。本文主要针对单链抗体技术及其在肿瘤治疗中的研究应用进展进行综述。
-
用于重组药物蛋白生产的人源化细胞系研究进展
哺乳动物细胞表达系统由于存在翻译后加工修饰(PTMs)机制,能够产生分子量大、结构复杂的蛋白,是重组药物蛋白生产的优选系统.虽然非人源化的哺乳动物细胞系的PTMs与人源化细胞类似,但仍能进行人源化细胞不存在的其他PTMs,表达药物蛋白存在免疫原性、改变药物代谢动力学等缺点.近年来,人源化的细胞系已经用于治疗重组药物蛋白的生产,此类细胞系的优点在于具备和人源细胞完全一致的PTMs,表达的蛋白活性高、疗效好.目前用于重组药物蛋白生产及临床前研究的人源细胞系主要有HEK293、HT-1080、PER.C6等.本文综述了人源化细胞用于重组药物蛋白的新进展.
-
单克隆抗体人源化的进展及应用
鼠源性单克隆抗体由于可引起免疫反应而逐渐被人源化抗体所代替,本文介绍了几种人源化抗体构建的策略和表达系统以及人源化抗体在临床方面的应用.
-
重组亚单位疫苗的表达系统
传统疫苗多是通过系列传代或用化学或物理的方法使某些成分失活后制成的,尽管很有效,却存在着毒力逆转引发疾病的危险.重组亚单位疫苗相对安全性高,具有较大的发展前景.重组亚单位疫苗抗原需具有一定的对于维持疫苗效率所必需的空间构型和翻译后修饰,它的抗原性受到所选用表达系统的影响.因此,在制备重组亚单位疫苗时就需对表达系统进行谨慎选择.本文就重组亚单位疫苗各种生产宿主的特性和适用范围作一简介.
-
毕赤酵母表达系统
毕赤酵母表达系统是一种新的真核基因表达系统,由于其有许多突出的优点,越来越受到分子生物学界的重视,已有多种重组蛋白在该系统成功表达.本文从表达菌株、表达载体、转化及整合、外源蛋白的表达及修饰等方面对其进行综述,并分析了影响毕赤酵母高效表达外源蛋白的因素.
-
用沙门菌作为重组活疫苗载体的研究进展
随着对粘膜免疫机理的进一步认识,近年来口服活疫苗的研究越来越受重视,尤其是对口服减毒重组活疫苗的研究.本文对胞内侵袭性沙门菌减毒类型及机理、重组活疫苗中外源抗原表达系统的启动子优化、外源抗原的稳定表达和定位表达的研究进展作一综述,这将有助于对口服活疫苗的理解和研制.
-
单克隆抗体糖基化修饰研究进展
糖基化修饰对单克隆抗体的结构、功能及药代动力学会产生影响.不同糖型结构通过与FcRs、Clq以及新生Fc受体(neonatal Fc receptor,FeRn)的结合而分别调节抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cytotoxicity,ADCC)、补体依赖的细胞毒作用(complement-dependent cytotoxicity,CDC)以及FcRn介导的药物消除半衰期.不同的细胞表达系统和细胞培养条件均会对糖基化的类型及程度产生影响,进而影响治疗性抗体的疗效以及安全性.通过糖基化工程可以控制特定糖型的形成,进一步优化单克隆抗体的效应功能和降低免疫原性.本文就单克隆抗体糖基化修饰研究进展进行综述.
-
昆虫核型多角体病毒在寄生虫学中的应用
利用核型多角体病毒(nuclear polyhedrosis virus,NPV)作为载体在昆虫细胞或昆虫个体中表达外源基因是近年发展起来的新型表达系统.自从1983年Smith等[1]报道了人β-干扰素基因在此系统的成功表达后,至今已有许多实验室从事这一表达系统的研究[2~4].目前常用的系统有苜蓿银纹夜核型多角体病毒(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus,AcNPV)/草地夜蛾细胞和家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus,BmNPV)/家蚕细胞或家蚕幼虫.
-
治疗银屑病新药alefacept
1商品名Amevive2 结构特点本品是一种免疫抑制性二聚融合蛋白,由连接于人lgG1的Fc(铰链区,CH2和CH3域)部分的人白细胞功能性抗原3(LFA-3)的胞外CD2+结合蛋白组成.本品是通过重组DNA技术利用中国仓鼠卵巢(CHO)哺乳动物细胞表达系统制得的.分子量为91.4kD.
-
骆驼来源的纳米抗体人源化研究进展
纳米抗体作为一种小分子抗体,与传统抗体以及衍生出的单链抗体(ScFv)相比,具有高亲和力、高特异性以及高稳定性等特点.同时它还具有传统抗体不具备的优势,分子质量小,体内组织渗透性好,极易穿过血管或组织到达靶部位,这些优势使得纳米抗体被广泛的用于疾病诊断与检测的工具.迄今为止,已有多种多价的纳米抗体进入各期临床研究,应用于癌症、自身免疫病、呼吸系统、血液系统等疾病.并随着研究的不断深入会有更多的纳米抗体应用于临床,但是多价的纳米抗体如果长期用于临床可能会产生不同程度的免疫反应,影响治疗效果,因此,纳米抗体进行人源化越来越被关注.该文介绍几种纳米抗体人源化策略及表达系统.
-
组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)及其突变体的表达研究进展
对组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)及其突变体在大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞、丝状真菌、昆虫细胞和转基因动物乳腺等表达系统中进行表达的研究工作情况进行了综述,并对各个表达系统的优缺点进行了比较.
关键词: 组织型纤溶酶原激活剂 突变体 表达系统 -
糖蛋白药物糖基化及其表达系统的研究进展
大约有四分之一的新药是蛋白类药物,其中糖蛋白药物占了绝大部分.本文从药物代谢动力学、组织靶向和调节生物活性等三个方面综述了糖基化对佳治疗效果的影响,并且评估了CHO和酵母表达系统以求达到佳糖基化.哺乳动物细胞培养是现今糖蛋白的生产系统,它存在以下几个缺点:成本高,周期长,糖基化作用受限.鉴于此,现在也已经开发了酵母表达系统来替代哺乳动物细胞培养,它具有表达能力高,发酵易于控制,可以进行氮糖基化的优点,尤其是P.pastoris工程酵母必将有更加广阔的应用前景.
-
细菌基因盒-整合子系统与细菌耐药性
细菌耐药性逐年上升和耐药性快速传播近年来已成为临床治疗感染性疾病的难题,细菌常见的对抗和逃避抗菌药物的方式,是从外源获得耐药基因,而耐药基因的传播可以是从一个细菌到另一个细菌,也可以从一个DNA分子到另一个DNA分子.整合子-基因盒系统于1991年由Hall正式提出[1],是细菌的天然克隆与表达系统,能捕获外来耐药基因,在整合子中可形成多种耐药基因的组合、排列,整合于整合子上的基因盒可借助整合子的强启动子而得以表达,是近年来发现的细菌耐药性传播的机制之一.
-
棘球蚴 EG95重组蛋白研究进展
棘球蚴病是一种对人畜危害极为严重的人兽共患寄生虫病,严重威胁我国流行区农牧民身体健康和畜牧业的发展,对该病的预防迫在眉睫。EG95蛋白在细粒棘球蚴发育过程中必不可少、高度保守,是目前为止已发现的具潜力的疫苗候选抗原之一。国内外学者在EG95重组抗原的构建、表达、应用等方面进行了大量的工作,本文对其进行综述。
-
整合子系统与细菌多重耐药关系的研究进展
随着抗生索的广泛使用,细菌在抗生素的选择压力下耐药株不断产生,其中细菌通过基因的水平转移,获得外源性耐药基因是加快临床耐药菌株产生的重要原因.与细菌耐药基因水平转移密切相关的遗传结构有质粒、转座子、整合型噬菌体以及近年来在细菌中发现的一种天然的克隆表达系统整合子(integron)[1].整合子通过位点特异性重组捕获外源基因盒(gene cassettes)并使之表达,同时整合子可位于质粒上.
-
人类线粒体病的遗传学研究及治疗进展
线粒体普遍存在于真核细胞的细胞质中,它是细胞物质氧化的主要场所和能量供给中心.线粒体是细胞核外含有遗传信息和表达系统的细胞器,其遗传特点表现为非孟德尔遗传方式,具有半自主性.线粒体病(mitochondriopathy)是指因遗传缺损引起线粒体代谢酶的缺陷,导致ATP合成障碍、能量来源不足而出现的一组多系统疾病,因此,也被称为线粒体细胞病(mitochondrialcytopathy)[1,2].
-
心脏K+电流的特点和功能
不同物种,心脏不同部位的不同组织,至少存在10种不同的K+电流.某些电流只在某种组织中存在,如IKACh电流只在心房中存在,起搏电流只在有起搏功能的细胞中存在.这些电流每一种都有其特定的激活时程(如存在失活过程的话,也有特定的失活过程)和从失活恢复的时间过程(如果存在的话),并常常取决于机能状态受到某些特异性阻滞剂的调节.正如利用这些电生理特性来确定在异源性表达系统中的电流和天然细胞中的电流有什么关系.近年来对多数心肌细胞K+电流的分子基础的研究已很充分[1].一组被称为延迟整流的K+电流是因为它们受到去极化脉冲并不立刻激活,而是有些延迟.已报道有3种延迟整流K+电流,即慢的激活的延迟整流K+电流(IKs)、快速激活的延迟整流K+电流(IKr)和超速激活的延迟整流K+电流(IKur).
-
1型糖尿病细胞和基因治疗研究进展
1型糖尿病是自身免疫性疾病,现已可以基因技术和分子生物学技术来治疗.从使用基因修饰的免疫细胞来诱导自身抗原的低反应到胰岛细胞移植并表达特定的免疫调节基因以取得局部的免疫豁免.然而随着研究的深入,许多重要的问题就被提了出来,如载体和表达系统的选择、胰岛移植前干预措施、针对树突状细胞(DC细胞)的免疫耐受以及干细胞转分化治疗等.本文就目前研究热点及其在临床方面潜在的应用价值作一总结.
-
抗菌肽表达系统及应用的研究进展
抗菌肽是生物体产生的一种具有抗菌活性的多肽类物质,它对细菌、真菌和病毒等都具有明显的杀伤作用.抗菌肽有望开发成为防治人和动物疾病的药物,应用前景广阔.本文就抗菌肽的分类、作用机制、表达系统以及应用前景作一综述.