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Vero细胞微载体放大培养技术研究
目前,国内大部分疫苗企业仍采用传统的转瓶细胞培养工艺来生产病毒性疫苗,该方法存在细胞密度低、病毒滴度低、劳动强度大等缺点。20世纪70年代,建立了微载体/生物反应器培养动物细胞的工艺[1],把悬浮培养和贴壁培养两种培养工艺融合在一起,兼有两者的优点,使得动物细胞工业化的大规模、高密度培养,以满足生物技术发展的需要,而细胞微载体放大培养就是其中的关键技术之一[2]。
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单克隆抗体电荷异构体分离方法优化
单克隆抗体是复杂的四聚体糖蛋白,常呈现微观不均一性,即“异质性”,包括电荷、疏水、形态等相关的异构体[1]。这些异构体可能来自于抗体分子复杂的生物合成途径,如细胞系及培养工艺[2],也可能来自于纯化、制剂等制造过程以及贮存过程的任何阶段[1]。其中由于抗体分子所带电荷差异造成的异质性称为电荷异构体,一般分为酸性异构体和碱性异构体,产生原因主要与翻译后修饰有关。电荷异构体宏观表现为在等电聚焦电泳图上出现弥散或多个条带;离子交换色谱图主峰前后出现小峰。由于这些异构体可能会影响抗体的稳定性、药效、免疫原性或药代动力学,特征性地识别和分离电荷异构体是至关重要的。基因泰克公司曾对上市抗体及临床前抗体药物关于电荷变化产生的药效、药代等方面的影响做过一个总结,结果表明:①当电荷变异超过一个 pH单位时,会影响药物的组织分布及药代动力学;②增加正电荷,会提高药物的组织停滞,降低血液清除;③降低正电荷,会减少药物的组织停滞,提高药物的全身清除[3]。因而分离电荷异构体,得到均一性质的抗体是一个关键的挑战,尤其在生物类似物开发过程中应尽可能控制异构体含量与原研药保持一致。
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重组人锰超氧化物歧化酶工程菌高效表达培养工艺的研究
目的确定重组人锰超氧化物歧化酶(rhMn-SOD)工程菌高效表达的适培养工艺条件.方法通过摇瓶培养研究了包括接种量、诱导时机、Mn2+浓度、诱导后培养时间、发酵过程中pH变化以及初始pH值对发酵的影响.结果该工程菌的佳接种量为3%,佳诱导时机为接种后3h,确定Mn2+浓度为6000μmol@L-1,诱导后培养5 h,在培养过程中当pH为6.83时外源蛋白可获得高效表达,初始pH确定为8.0.结论:诱导和培养基的pH是影响工程菌发酵的主要因素,尤其是Mn2+的加入表达有活性的rhMn-SOD是必需的.
关键词: 重组人锰超氧化物歧化酶 工程菌 培养工艺 -
药品生产质量管理规范(2010年修订)检查指南
(接4月上)
2.4采用连续培养工艺(如微载体培养)生产的,应当根据工艺特点制定相应的质量控制要求。 -
利用重组胞苷转移酶酿酒酵母生物合成胞二磷胆碱的工艺研究
课题涉及一种过表达磷酸胆碱胞苷转移酶(Cholinephosphate cytidylyltransferase,EC 2.7.7.15,CCT)酿酒酵母基因工程菌的构建和应用.该菌株是将酿酒酵母来源的编码CCT酶基因cct与pYES2.0-Kanmx载体构建重组质粒,然后将其转化于酿酒酵母DFH中,构建基因工程菌QZ-016.通过过表达反应关键酶CCT酶而提高胞二磷胆碱(CDP-C)的转化率和产量.经过优化YPD培养基后,该菌株的菌浓PMV可达70.2 g/L,可应用于以CMP和CP为原料,生物转化制造CDP-C,反应7h摩尔转化率可高达73.1%.该菌株的产率高,应用于生产CDP-C,具有成本低、制造能耗低、反应周期短等优点.