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两种体外人肝细胞的不同培养方式的比较研究
探讨一种能简单获取高活性肝细胞的培养方法,以期为生物人工肝提供有应用价值的生物材料.在限制贴壁的条件下,以cytodex-3为材料进行L-02人肝细胞的微载体培养,检测肝细胞白蛋白分泌功能以及尿素、葡萄糖等合成功能,并在光镜下观察生长情况,同时与平面贴壁培养的肝细胞进行比较.结果表明,培养至第6d时,所有的微载体均包满细胞,并形成微载体诱导的肝细胞聚集体,微载体培养的肝细胞白蛋白分泌功能为(40.97±3.28) g/L,葡萄糖合成功能为(11.19±0.27) μmol/mL以及尿素消耗为(5.08±0.13) mmol/L,均保持较高水平；而平面贴壁培养的肝细胞白蛋白分泌功能为(35.69±1.21)g/L,葡萄糖合成功能为(8.17 ±0.21) μmol/mL以及尿素消耗为(3.94 ±0.10) mmol/L.微载体组培养的细胞存活时间为14 d,平面贴壁组培养的细胞存活时间为10d,前者明显优于后者；微载体培养能提供长时间保持高活性和高密度生长的肝细胞,为肝细胞移植、生物人工肝领域的研究和应用提供了基础.
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药品生产质量管理规范（2010年修订）检查指南
（接4月上）
2.4采用连续培养工艺（如微载体培养）生产的，应当根据工艺特点制定相应的质量控制要求。 -
无血清培养MDCK细胞生产狂犬病病毒条件的初步优化
目的 开发一种适应于MDCK细胞生长和狂犬病病毒生产的无血清培养基MDCK-SFM,并对MDCK细胞生产狂犬病病毒的条件进行初步优化.方法 方瓶培养MDCK细胞,考察混合脂类、微量元素、氢化可的松、酵母抽提物和鱼胨水解物对MDCK细胞生长的影响.转瓶微载体批培养MDCK细胞,以获得细胞在不同培养基中的生长动力学.以不同的感染量(MOI)和感染时间(TOI)接种狂犬病病毒,确定MDCK细胞感染狂犬病病毒的佳MOI与TOI.比较含10%NCS的DMEM、VP-SFM和MDCK-SFM培养基培养MDCK细胞生产狂犬病病毒的效果.结果 混合脂类有利于细胞贴壁,酵母抽提物和鱼胨水解物可不同程度地促进MDCK细胞生长.以MDCK-SFM培养基培养的MDCK细胞高密度可达14.3×10~5个/ml.在MOI=0.5、TOI=72 h的条件下,可得到高的病毒滴度.MDCK-SFM培养基培养MDCK细胞生产狂犬病病毒,可获得较高的病毒滴度(5.13 lgFFU/m1).结论 MDCK-SFM培养基适于MDCK细胞生长和培养狂犬病病毒,且成本低,成分比较明确,在MDCK细胞高密度培养生产狂犬病疫苗方面具有较高的应用价值.
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微载体培养L02人肝细胞应用于生物人工肝的初步研究
L02人肝细胞株组织学来源为人正常肝组织,具备一定正常肝细胞的生物功能.我们将高密度微载体培养的L02人肝细胞聚集体加入中空纤维生物反应器,构建简易体外生物人工肝装置并进行初步的应用研究.一、材料与方法1.材料:L02人肝细胞株购于中国科学院上海细胞生物学研究所;Cytodex3微载体为Pharmasia公司产品;聚羟乙基异丁烯酸(Poly-HEMA)及DMEM、HamsF12培养基均为Sigma公司产品.
