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流感疫苗研究概况
流行性感冒(influenza)是由流感病毒引起的一种人、禽、畜共患的急性呼吸道传染病.流感能在短期内突然发生,迅速蔓延,造成不同程度的流行,在世界范围内引起人畜的发病和死亡.历史上,流感曾多次爆发:1918年"西班牙流感(H1N1型)",1957年"亚洲流感(H2N2型)",1968年"香港流感(H3N2型)"以及1977年"俄罗斯流感(H1N1型)"使许多人丧失了生命[1].
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CHO细胞无血清培养研究
用含血清的常规培养基和无血清培养基(CHO-S-SFMⅡ)1:1(V/V)悬浮细胞,接种量为3×105/T/ml,在37℃,8%CO2培养箱中培养,使细胞密度达5×105个/ml,然后用等体积的CHOSFMⅡ将细胞稀释到3×105个/ml,继续培养,重复上述操作,直到血清浓度降为0.1%后,用完全无血清培养基培养至3×106个/ml,再以3×105个/ml接种,传50代,细胞增生活跃,状态良好,用MTT比色法测定重组人促红细胞生成素(rHuEPO)表达水平与常规含血清培养基相比,表达量未见明显差异.
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两种不同培养体系培养人角朊细胞的特征
目的对比有饲养层的有血清培养体系(feeder layer,serum-containing medium,FSCM)和无血清培养体系(serum free medium, SFM)培养人角朊细胞(keratinocyte,KC)的特征.方法以两种不同培养体系培养人KC,比较24 h细胞贴壁数、完全汇合时间和终分化形式.结果 KC在两种不同培养体系中的形态、24 h细胞贴壁数和完全汇合时间无统计学差异.FSCM体系能促使角朊细胞发生终末分化;SFM体系内角朊细胞增殖较FSCM体系快,但未发生终末分化.结论有饲养层的有血清培养体系培养人角朊细胞形成复层膜片,适合临床应用;无血清培养体系培养人角朊细胞形成单层细胞,适合KC生物学性征的实验研究.
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神经干细胞移植对大鼠全横断性脊髓损伤修复的影响
我们先前探讨了移植的神经干细胞在大鼠半横断损伤脊髓内存活及分化的情况,结果表明神经干细胞在损伤脊髓内可以存活、迁移并分化为神经元和星型胶质细胞.在此基础上,本研究应用神经干细胞移植,观察其对大鼠全横断性脊髓损伤后结构与功能的影响.取SD新生大鼠海马,剪碎后,用胰酶消化,制成细胞悬液,用含B27和bFGF的DMEM/F12培养液进行培养.神经干细胞在无血清培养基中呈悬浮生长,5～6!d形成克隆球,7～9!d后进行传代.
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Corning? hybrigro SF?培养基对提高杂交瘤细胞培养密度和抗体产量的研究
近几年，抗体作为生物类治疗药物的需求显著增长。因此，提高抗体生产效率并且降低生产成本愈发必要。而康宁hybrigro SF?培养基的开发，正是致力于在不使用昂贵血清的情况下仍能够高效培养杂交瘤细胞，提高抗体产量。我们使用两种不同的杂交瘤细胞株，并通过与两种商业化生产的无血清培养基以及一种被广泛使用的含血清培养基对比，验证 hybrigro SF?培养基在高密度杂交瘤细胞培养及蛋白产量方面的优越性。
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血浆对细胞因子诱导杀伤细胞增殖、表型和毒性影响的研究
为了优化扩增细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞的培养方案并进一步推广到临床,本文比较了无血清培养基X-vivo15、成年人AB血浆(ABP)、脐带血血浆(CBP)和胎牛血清(FBS)对CIK细胞增殖、表型和毒性的影响.人外周血单个核细胞分别以4种培养基诱导CIK细胞,细胞增殖、表型和毒性的测定分别用MTT增殖分析法、流式细胞分析法、乳酸脱氢酶细胞毒性分析法.
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用无血清培养基体外扩增CIK细胞的研究
CIK(cytokine-induced killer)细胞是一类细胞因子诱导的杀伤细胞.CIK细胞能大量扩增,而且具有比LAK细胞更强的肿瘤杀伤活性.为了获得临床应用的CIK细胞,必须用自身血浆或无血清培养取代传统的牛血清培养方式,以减少病人意外感染的机会.本实验对有血清和无血清培养条件下CIK细胞的生物活性进行了研究.
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无血清培养基培养乳猪肝细胞的效果
目的:比较无血清培养基和含血清培养基培养乳猪肝细胞的效果,以寻找一种用于生物人工肝猪肝细胞无血清培养的良好培养基.方法:采用改良原位两步胶原酶灌注法分离乳猪肝细胞.将肝细胞以5×108@L-1分别培养在无血清培养基和含血清培养基中,动态观察培养7 d中肝细胞活率、蛋白质和葡萄糖合成功能、G6-Pase活性、安定转化功能及LDH漏出量.结果:无血清培养的猪肝细胞各项指标除G-6-Pase活性在0,1,2 d较低、葡萄糖合成功能在2,7 d较低外,其余与含血清培养基培养的肝细胞无显著差异.肝细胞活率随着培养时间的延长而下降,但均高于88%;无血清培养的肝细胞的蛋白质合成功能在培养7 d中保持稳定.安定转化功能在培养2,3 d强(安定浓度2d时为75±4pg@eell-1,3 d时为77±5pg@cell-1);葡萄糖合成功能从1 d时1.00±0.15 nmol@cell-1下降到2 d时0.71±0.02nmol@cell-1;G-6-Pase活性从0d时1290±30zmol@cell-1下降到ld时306±38amaol@cell-1,然后维持在较低水平;LDH漏出量在2,3 d较高.结论:无血清培养基可用于生物人工肝中猪肝细胞的培养.
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大肠癌细胞系Lovo中亚群(SP)细胞的分离培养和鉴定
目的:应用无血清培养液(SFM)培养Lovo细胞系,克隆分离具有干细胞样特性SP细胞.方法:应用SFM培养Lovo细胞,分离成球样生长的细胞群作为SP细胞,并通过有限稀释,分化,自我更新,含血清培养基(SSM)和SFM交替培养及Musashi-1化学染色方法来鉴定SP细胞.结果:Lovo细胞中约含有0.54%-0.62%的SP能够在无血清培养基中能够存活、增殖,形成悬浮的肿瘤细胞球;在SFM中加入血清可促使SP细胞分化;SP细胞可以连续传代,并可交替培养于SSM和SFM中,细胞形态无明显变化;SP细胞Musashi-1染色阳性.结论:应用SFM可从Lovo细胞中分离出极少量的具有干细胞特性的SP细胞.
关键词： Lovo大肠癌细胞系 细胞亚群 肿瘤干细胞 悬浮培养 无血清培养基 -
MiR-590-3p在胰腺癌干细胞中的表达
目的 应用无血清培养基分离胰腺癌干细胞，检测其miR-590-3p的表达。方法 运用无血清培养基克隆培养ASPC-1、PANC1细胞，检测其单克隆形成、分化及细胞周期、半数抑制浓度(IC50)和表面标记物CD24+、CD44+表达。实时定量PCR法检测细胞miR-590-3p的表达。结果 经无血清培养基培养,(0.94±0.53)％的ASPC-1细胞和(0.57±0.12)％的PANC1细胞能存活，呈克隆球样悬浮生长，并可以在体外连续传代。加入血清后细胞球又重新贴壁生长。ASPC-1细胞球G0/G1期比例和CD24+、C44+、CD24+ CD44+的细胞比例及IC50分别为(75.3±5.4)％、0.96％～2.01％、27.52％～34.47％、0.35％ ～0.44％和(224.37±5.71) μg/ml，均显著高于亲本细胞的(43.7±3.8)％、0.38％～0.42％、17.65％ ～ 18.25％、0.05％～ 0.08％、(11.43±2.10) μg/ml(P值均＜0.05)。PANC1细胞球G0/G1期比例和CD24+、CD44+、CD24 +CD44+的细胞比例及IC50分别为(80.1±4.7)％、5.31％ ～9.84％、72.05％ ～93.06％、4.91％ ～5.21％、(296.58±4.27) μg/ml，均显著高于亲本细胞的(46.1±5.3)％、4.09％～4.97％、47.71％～55.66％、1.48％ ～2.63％、(26.17±3.81) μg/ml(P值均＜0.05)。ASPC-1、PANC1细胞球miR-590-3p表达分别是亲本细胞的4.67和4.52倍。结论 应用无血清培养基可以从ASPC-1、PANC1细胞系中分离出具有干细胞特性的胰腺癌细胞球，其miR-590-3p表达上调，该基因可能是胰腺癌干细胞特性维持的关键基因。
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无血清培养基与完全培养基对体外诱导扩增CIK细胞及抗肿瘤活性的比较研究
目的:比较无血清培养基AIMV与完全培养基对体外诱导扩增CIK细胞的效果.方法:分别用AIMV及完全培养基加入4种细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-1及OKT3)将脐带血单个核细胞(CBMNCs)诱导成CIK细胞,比较细胞的增殖能力、细胞表型、对肿瘤细胞的增殖抑制作用及其诱导肿瘤细胞凋亡等几个方面.结果:与完全培养基比较,无血清培养基AIMV培养的CIK细胞增殖高峰较晚(14～17d),但增殖倍数高(倍),在细胞表型、对三株肺癌细胞的生长抑制作用及不同效靶比诱导细胞凋亡方面两种培养基培养的CIK细胞差异无统计学意义,P＞0.05.结论:无血清培养基AIMV可代替完全培养基.
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结外NK/T细胞淋巴瘤敏感药物筛选
目的 应用无血清培养基(serum free medium,SFM)初步富集肿瘤耐药细胞,筛选出结外NK/T细胞淋巴瘤(extranodal NK/T-celllymphoma,ENKTCL)的敏感药物.方法 应用加入10％人血清和700 U/mL人白细胞介素-2(interlukin-2,IL-2)的1640培养基和加入700 U/mL人IL-2的SFM VIVO-15TM,分别培养SNK-6细胞;MTT法分别检测2种培养体系中表柔比星(adriamycin,ADM)、奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)、吉西他滨(gemcitabine,GEM)、左旋门冬酰胺酶(L-Asparaginase,L-ASP)、阿糖胞苷(cytosine arabinoside,Ara-C)和甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)等药物作用的IC50;2种培养体系中分别加入上述各种药物作用32 h后,7AAD/PE-Annexin Ⅴ染色法流式细胞术检测各处理组细胞的凋亡率,并分析比较.结果 无血清培养体系中细胞部分悬浮生长,每个悬浮球由＞50个数目不等的细胞组成,悬浮球体积较有血清中明显增大.有血清和SFM中IC50含量,ADM分别为(0.12±0.018)和(0.751±0.14) μg/mL,P＜0.001;Ara-C分别为(0.217±0.002)和(0.822±0.028) μg/mL,P＜0.001; MTX分别为(0.023±0.001)和(0.032±0.002) μg/mL,P=0.002.药物作用后,有血清和SFM中SNK-6细胞的凋亡率,ADM分别为(45.23±2.58)％和(30.91±2.13)％,P=0.041;Ara-C分别为(56.12±2.32)％和(41.47±2.46)％,P=0.034;MTX分别为(24.42±1.92)％和(13.01±2.28)％,P=0.045;GEM分别为(15.05±2.05)％和(41.45±1.74)％,P＜0.001.结论 SFM VIVO-15TM可用于ENKTCL SNK-6细胞培养;无血清培养后的SNK-6细胞对ADM、Ara-C和MTX耐药性增强,对L-OHP、GEM和L-ASP敏感.
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人脑胶质瘤干细胞的分离培养及初步鉴定的实验研究
一、材料与方法取10例胶质瘤患者术中切除的肿瘤组织,分离成单细胞悬液,接种于添加生长因子(EGF、bFGF、LIF等)的DMEM/F12无血清培养基中,观察各种细胞的生长增殖情况,对照组取3例同期癫痫患者(非脑肿瘤)手术切除病灶,做相同处理,对增殖形成的克隆球连续传代培养,部分克隆球细胞分散后做单克隆培养;
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无血清培养骺板细胞分泌TGF-β1的实验研究
目的 观察骺板细胞在无血清培养液中的生长情况,并通过ELISA方法检测骺板细胞分泌TGF-β1.方法 提取3周龄新西兰兔骺板组织,获得良好生物活性的骺板细胞.采用CCK-8生长曲线检测骺板细胞在无血清培养液中的生长增殖情况,并通过ELISA方法检测骺板细胞分泌TGF-β1.结果 骺板细胞生长情况良好,分泌细胞外基质.AO/PI荧光染色显示存活的骺板细胞呈亮绿色,周围散在有少量红染的死细胞.骺板细胞在DMEM培养液以及无血清培养液培养时生长曲线形态基本相似,在1、2d时细胞增殖缓慢,之后增殖速度逐渐增加,6-7d逐渐进入平台期.第1天时骺板细胞开始释放TGF-β1,然后释放量逐渐增加,第6d时浓度达到167.2pg/ml.结论 骺板细胞在无血清培养液中增殖情况良好并能分泌TGF-β1.
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树突状细胞体外培养体系的优化
目的:探讨无血清专用培养基从人外周血单个核细胞(DC)分离培养树突状细胞的优化方法.方法:取正常成人新鲜血液,经密度梯度离心法,利用连续贴壁的方法获得单个核细胞,采用无血清培养基经人重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白介素-4(rhIL-4)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导产生成熟DC,倒置显微镜观察树突状细胞结构,流式细胞仪检测DC表面标志物表达水平.结果:连续贴壁法无血清专用培养基体外分离培养人外周血DC,所获得DC数量和纯度均都多于以往一次贴壁分离含10%胎牛血清RPMI培养基培养的DC.培养1周的DC高表达CD83、HLA-DR、CD80、CD86、CD83+HLA-DR+及CD80+CD86+.结论:采用无血清专用培养基连续贴壁法可分离培养数量较大、纯度较高的人外周血来源的DC.
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香烟烟雾提取物对猪气道上皮细胞β-连环素及酪氨酸磷酸化的影响
据<中华医学杂志>2001年4月81卷第7期报道华中科技大学同济医院病理学教研室陈芳等教授,为观察香烟烟雾提取物(CSE)和酪氨酸激酶抑制剂(tyrophostin 25)对气道上皮细胞(AEC)酪氨酸磷化程度、细胞Src蛋白(c-Src)及β-连环素(β-cat)表达的影响,探讨细胞酪氨酸磷酸化程度及β-cat在吸烟致AEC损伤和修复中的作用及调控机制,体外培养猪AEC,将培养细胞分成3组:N组加无血清培养基,C组在无血清培养基上分别加CSE,CT组加tyrophostin 25及CSE.
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小鼠精原干细胞在三种培养基中的生长行为
目的:建立小鼠精原干细胞(SSCs)的体外长期培养体系.方法:用分别添加了等量的胶质细胞源神经营养因子(GDNF)、可溶性GFRα1和bFGF的DMEM/F12、KSR和StemPro-34 SFM三种无血清培养基和MEF饲养层分别培养经差异贴壁分选富集的小鼠SSCs,通过形态观察、标志基因的RT-PCR和免疫细胞化学分析检测其SSCs本原.结果:DMEM/F12与KSR可支持小鼠SSCs在体外存活6-7 d,而StemPro-34 SFM能能维持SSC8体外增值一个月.结论:StemPro-34 SFM支持小鼠SSCs的体外增殖.
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Bcl-xL在原发性血小板增多症患者巨核细胞分化过程中的表达
原发性血小板增多症(ET)是一类造血系统慢性骨髓增生性疾病,其临床特点是外周血中血小板持续增高,同时骨髓中巨核细胞过度增生[1,2].ET的发病机制目前尚未完全明确.近来有学者发现体外诱导CD34+细胞分化得到的巨核细胞具有明显的凋亡特征[3],是巨核细胞成熟晚期的表现.有研究也显示了巨核细胞的凋亡特征,显示血小板的形成是巨核细胞成熟后的晚期表现.抗凋亡蛋白Bcl-xL属于Bcl-2蛋白家族,主要在造血细胞中表达,在调节造血干细胞的分化中具有重要功能.有人研究发现抗凋亡蛋白Bcl-xL失活或过度表达皆会影响血小板的生成[4,5],在巨核细胞分化及血小板形成过程中具有重要的作用.我们用无血清培养基培养并用TPO诱导ET患者CD34+细胞向巨核细胞分化,用免疫组化和流式细胞术检测其抗凋亡蛋白Bcl-xL表达的变化,以探讨Bcl-xL在ET发病过程中可能的作用.
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无血清专用培养基体外快速培养临床级树突状细胞的实验探讨
目的:探讨采用无血清专用培养基从肺癌患者外周血单核细胞快速培养树突状细胞(DCs)的方法.方法:将10例肺癌患者外周血单核细胞同时采用含人AB型血清培养基和无血清DCs专用培养基(DC Medium)培养,5例于第7天加入促成熟细胞因子组合,第9～10天收获成熟DCs,另5例于第5天加入促成熟细胞因子组合,且TNF-α剂量加大5倍,第7天收获成熟DCs.结果:DC Medium培养的DCs形态变化快,细胞出现突起的时间早;9～10天收获的两种培养基培养的DCs性能无差异;7天收获的DCs中,DC Medium培养的DCs得率和纯度、共刺激分子表达水平、刺激T细胞增殖能力均优于含血清培养基.结论:无血清DCs专用培养基可以在体外快速培养临床级DCs,为肿瘤免疫治疗奠定基础.
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不同种培养基对体外诱导免疫细胞的生物活性及细胞毒作用
目的:探讨3种培养基对细胞因子诱导免疫细胞在增殖、免疫表型、杀伤、因子分泌等多方面生物学活性的影响.方法:正常人外周血单个核细胞分别用MD-CM-STM-N、AIM-V与RPMI 1640培养基经过CD3McAb、IL-2、IFN-γ诱导并培养.用台盼蓝活细胞计数计算细胞增殖情况,MTT法测定多种癌细胞杀伤,ELISA双抗夹心法测分泌IFN-γ的表达水平,流式细胞仪检测免疫表型.结果:与RPMI 1640组相比,MD-CM-STM-N和AIM-V组细胞快速增殖期延长至第13天.其中MD-CM-STM-N组终扩增量高,杀伤活性亦有明显提高(P＜0.05),CD8+、CD3+、CD56+的表达率也明显增加(P＜0.05)；细胞因子IFN-γ的分泌时间延长.结论:无血清培养基MD-CM-STM-N、AIM-V诱导免疫细胞的增殖能力、免疫表型表达率、细胞毒性、分泌细胞因子水平均高于RPMI 1640培养基,在增殖能力方面MD-CM-STM-N更具优势,为细胞因子诱导免疫细胞治疗提供了实验和理论依据.
关键词： 细胞因子诱导杀伤细胞 无血清培养基 生物活性 人B淋巴瘤细胞 人红白血病细胞
