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牛血清在疫苗生产中的质量控制措施
牛血清作为细胞培养基中的主要成分,对细胞生长起着提供生长激素和特殊营养的作用,因此,其质量的高低在疫苗的生产中占据着很重要的地位,是保证细胞能否培养成功的关键.该文主要通过对牛血清在疫苗生产质量控制中存在的问题进行针对性的分析与研究,从而找出影响牛血清质量的关键因素,以及对存在的问题采取相应的改进措施,以加强牛血清在疫苗生产中的质量控制.
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警惕牛血清中的脊髓灰质炎病毒抑制剂
牛血清是一种重要的细胞培养用试剂.由于有些国家的政府害怕输入牛海绵体脑病(BSE)病毒,所以这些国家的实验室[包括脊髓灰质炎(脊灰)网络实验室]在进口胎牛血清方面受到了限制,只好转而使用当地产的牛血清.
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我会对兰州民海和内蒙古维克生进行牛血清生产质量复查
8月9日,我会组织专家赴内蒙对兰州民海生物工程有限公司位于海拉尔的牛血清采血点进行了现场检查。此前,专家组已完成对兰州民海生物工程有限公司牛血清生产现场检查和产品抽样,本次主要对其牛血清采血点进行了认真检查,专家组将对本次采血点的检查、前期牛血清生产现场检查和样品抽样结果进行综合,得出牛血清生产质量复查的结论。
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我会对武汉三利生物技术有限公司进行牛血清生产企业达标复查
根据武汉三利生物技术有限公司(以下简称“武汉三利”)牛血清生产质量达标检查复查申请,9月3–4日,协会组织中国食品药品检定研究院专家对该公司进行了牛血清生产企业质量达标现场检查,专家组对武汉三利的生产厂区、采血点的改造和文件体系编写表示认可,对其记录文件中的术语、采血点设施等存在不完善的地方提出了针对性的建议。经专家现场打分,该公司牛血清生产符合《全国牛血清生产企业质量达标检查手册》规定的要求,通过了现场核查,现场抽取三批样品送中国食品药品检定研究院检定。
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浙江省台州医院获得我会生物样本库质量检查合格证书
为了促进我国生物样本库的规范化建立,我会生物样本库分会制定了《生物样本库质量达标检查手册》,经过常务理事会审议和批准,开展生物样本库行业自律工作。2014 年下半年,浙江省台州医院向我会递交相关申请材料,我会组织专家赴现场进行检查,并且抽取样品送检。经查,该院符合《生物样本库质量达标检查手册》质量标准,现已获得我会生物样本库检查合格证书,同时,专家也对其标本库给予了进一步完善建议。生物样本库检查是我会继牛血清生产质量检查和细胞培养基生产质量检查之后的又一项行业自律工作。
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山西润生大业生物材料有限公司通过牛血清生产质量达标复查
根据山西润生大业生物材料有限公司牛血清生产质量达标复查申请,协会组织有关专家对该公司进行了牛血清生产现场检查,经专家现场打分,该公司牛血清生产基本符合《全国牛血清生产企业达标检查手册》规定的要求。现场抽取的三批样品经中国食品药品检定研究院按《中国药典》2010年版三部检验,符合牛血清质量标准。按协会相关规定,该公司已通过牛血清生产质量达标复查,并取得牛血清生产企业达标证书,证书编号2015N003,有效期自2015年8月至2020年7月。
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五家牛血清生产企业通过生产质量复查
2013年年底到2014年9月期间,协会组织中国食品药品检定研究院等有关单位专家对内蒙古金源康生物工程有限公司、内蒙古维克生生物科技有限公司、呼和浩特市草原绿野生物工程材料有限公司、兰州民海生物工程有限公司、兰州荣晔生物科技有限责任公司五家牛血清生产企业进行牛血清生产企业生产质量复查。按照《全国牛血清生产企业达标手册》的规定,专家对企业的牛血清生产现场、牛血清采血点进行了科学严谨的现场检查、并抽取生产样品送往中检院进行检测。专家也对企业提出了意见,企业根据意见进行了整改并提交了整改报告。五家企业均达到了复查通过的标准,经我会理事长办公会讨论、同意对其颁发《牛血清生产企业达标证书》。
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石家庄宏伟完成牛血清生产企业质量达标现场检查
根据石家庄市宏伟生物技术有限公司(以下简称“石家庄宏伟”)牛血清生产质量达标检查申请,5月7–8日,协会组织有关专家对该公司进行了牛血清生产企业质量达标现场检查,专家组对石家庄宏伟的生产车间和采血点的改造基本认可,并提出了进一步改进的意见;对其文件系统、员工培训等存在不完善的地方,提出了针对性的建议。经专家现场打分,该公司牛血清生产基本符合《全国牛血清生产企业质量达标检查手册》规定的要求,现场抽取三批样品送中国食品药品检定研究院检验。
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用无血清培养基体外扩增CIK细胞的研究
CIK(cytokine-induced killer)细胞是一类细胞因子诱导的杀伤细胞.CIK细胞能大量扩增,而且具有比LAK细胞更强的肿瘤杀伤活性.为了获得临床应用的CIK细胞,必须用自身血浆或无血清培养取代传统的牛血清培养方式,以减少病人意外感染的机会.本实验对有血清和无血清培养条件下CIK细胞的生物活性进行了研究.
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牛血清中牛血红蛋白测定方法的比较及新方法的建立
生物制药技术是一种高新技术,其发展几乎都与细胞培养有密切关系,细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用.而作为培养基主要成份的动物血清对细胞的生长繁殖至关重要.在动物血清的应用中牛血清又是为广泛的,因为牛血清属于动物源制品所以对牛血清进行质控是保证生物制药质量收率和药品安全的的重要环节之一.
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不同人参提取物对胶原诱导的血小板聚集的影响
为评价人参粗提取物及单体的药效活性,按比浊法进行血小板聚集测定,结果报告如下.1材料与方法1.1 试剂:Tyrode buffered的配置:137 mmol/L NaCl;0.3mmol/L Na2 HPO4;2 mmol/L KCl;12 mmol/L NaHCO3;0.35%牛血清;1 mmol/L CaCl2;5 mmol/L Hepes.诱导剂:胶原:鼠尾胶原( Sigma,1 mg/mL);麻醉剂:戊巴比妥钠(1%),30~40mg/kg.抗凝剂:枸橼酸钠(3.8%),血液和抗凝剂比例(9∶1).
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酶免疫试验检测人畜布氏菌感染的研究概况
自Corlsson应用酶免疫试验(Immunoassayy,EIA)检测牛血清中布氏菌抗体以来,该技术被广泛应用于人畜布氏菌病(简称布病)的诊断与鉴别诊断和监测与流行病学调查等[1~5].
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60Coγ-射线辐照新生牛血清对细胞培养的影响
目的 研究新生牛血清(newborn calf serum,NBCS)经60Co γ-射线辐照后对细胞培养的影响.方法 用20 kGy60Co γ-射线辐照NBCS后,培养Vero和CHO-K1细胞,通过连续传代培养及绘制低密度生长曲线,比较辐照前后的促细胞生长效果.结果 Vero细胞的传代培养结果与未辐照前接近,生长曲线峰值略低于未辐照组,辐照前后细胞的大增殖密度为73.38×104和65.33×104个/ml (P>0.05),倍增时间为24.38和25.33 h (P>0.05);CHO-K1细胞传代培养无未辐照组致密,生长曲线较未辐照组平缓,辐照前后细胞的大增殖密度为80.03 × 104和79.3×104个/ml (P>0.05),倍增时间为19.73和23.62 h (P<0.05).结论 NBCS经20 kGy60Co γ-射线辐照后,对Vero细胞影响不明显,使CHO-K1细胞生长速度变慢.
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牛血清中牛病毒直接免疫荧光检测方法的建立及验证
目的 建立牛血清中牛病毒直接免疫荧光检测方法,并进行验证.方法 建立直接免疫荧光法检测牛血清中牛病毒,对细胞接种浓度和血清浓度、病毒接种量、荧光抗体浓度、染色温度及时间进行优化;对优化的方法进行重复性、特异性、灵敏度验证,并与细胞培养法的检测结果进行比较.结果 优化的试验条件为:Vero和BT细胞的接种浓度分别为0.5×105和1.0× 105个/ml,血清浓度为5%,病毒接种量为100~300 CCID50,荧光抗体1∶10稀释,4℃染色12h以上,但不超过24 h.2名实验人员按建立的方对3批牛血清分别进行3次检测,均未检出6种牛病毒;每种病毒仅在相应抗体进行染色时出现荧光;该方法检测6种牛病毒的灵敏度较高.分别采用细胞培养法和直接免疫荧光法检测15批新生牛血清和5批胎牛血清,结果均未检出牛病毒.结论 建立的牛血清中牛病毒直接免疫荧光检测方法重复性好,特异性强,灵敏度高,操作简便,与细胞培养法的检测结果无差异,可应用于牛血清中牛病毒的检测.
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柱前衍生化液相色谱法测定牛血清中游离氨基酸含量
目的 建立牛血清中18种游离氨基酸含量的柱前衍生化液相色谱测定方法,并进行验证.方法 采用乙腈沉淀方法去除血清样品中的蛋白,以异硫氰酸苯酯(phenylisothiocyanate,PITC)在三乙胺碱性条件下衍生游离氨基酸,采用氨基酸分析柱(Sepax AAA,250 mm×4.6 mm ID)及乙腈-醋酸钠缓冲体系梯度洗脱分离18种目标组分,紫外检测器波长为254 nm.对建立的方法进行重现性、准确性和精密性验证,并确定方法的线性范围及检测限.结果 18种游离氨基酸在60 min内完成分离,各目标组分在0.5~2.5μmol/L浓度范围内呈良好的线性关系,方法检测限在0.019~0.163 μmol/L之间,相对标准偏差(RSD)在0.42% ~2.28%之间.准确性和精密性试验中检测各组分的平均回收率在93.10%~101.61%之间,RSD在0.19%~3.82%之间.结论 采用PITC柱前衍生化液相色谱法可实现牛血清中18种游离氨基酸的含量测定,该方法简便易行,重现性、准确性及精密性良好,可为动物营养及生理研究提供检测手段.
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应用定量动态浊度法检测牛血清中的内毒素
目的应用定量动态浊度法检测牛血清中细菌内毒素.方法应用BET-32B型细菌内毒素测定仪,应用定量动态浊度法检测牛血清中内毒素含量.同时与鲎试剂凝胶法进行比较.结果采用该法可定量检测牛血清中内毒素含量,变异系数≤10%,快速简捷,一次检测样品多,稳定性好,精确度、灵敏度高,可以在0.001~10EU/ml的范围内定量,与鲎试剂凝胶法测定结果比较,符合率达96.2%.结论应用BET-32B型细菌内毒素测定仪,采用定量动态浊度法检测牛血清中内毒素的方法准确性好,性能稳定,具有广阔的应用前景.
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牛血清质量及其中甲肝抗体对甲肝疫苗生产的影响
目的对牛血清质量及其中的甲肝病毒抗体进行检测,评估此类抗体对甲肝疫苗生产的影响.方法根据<中国生物制品主要原辅材料质控标准>检测项目,全检4个厂家共17批新生牛血清,另用EIA法检测血清中的甲肝抗体,并用此血清中和甲肝病毒抗原,用EIA法检测中和后剩余的甲肝病毒抗原,以此来评估新生牛血清中的甲肝抗体对甲肝病毒的影响.结果17批牛血清(未灭活),检出3批噬菌体阳性,4批内毒素和1批蛋白含量超标.12批甲肝抗体阳性,其中高687.52mIU/ml,低8.91 mIU/ml.甲肝抗体阳性牛血清可将甲肝病毒抗原中和,1mIU/ml的抗体可中和7.53~11.64EU/ml甲肝抗原.结论牛血清蛋白含量、无菌试验、牛病毒等项目质量控制较好,其它则有待提高.牛血清中存在甲肝抗体,能将甲肝病毒大量中和.用于甲型肝炎疫苗生产的新生牛血清除按<中国生物制品主要原辅材料质控标准>进行质控外,还必须进行甲肝抗体的检测.
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细胞培养用牛血清现状与进展
牛血清用于细胞培养已超过50年,虽然其污染外源因子的风险不能完全排除,但是至今许多贴壁细胞系和原代细胞还需采用添加牛血清的培养基进行大规模培养.本文综述了牛血清的基本营养成分、生长因子和其他功能性成分以及牛血清中常见的外源病毒及应检测的病毒种类,并比较屠宰法和供体牛法获取血清的优缺点.
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检测疫苗残余牛血清ELISA试剂的质量控制
目的检测疫苗残余牛血清ELISA试剂的质量控制.方法将用于生产的10批牛血清混合后,免疫家兔制备抗血清,以纯化抗牛血清兔IgG作为包被抗体、HRP-酶标抗体作为指标抗体,采用ELISA双抗体夹心法进行线性范围、精密度、准确度、特异性评价等一系列检测.结果兔抗牛免疫血清双扩效价可达1:16,免疫血清、纯化抗体和酶标抗体均含有抗牛血清白蛋白及牛IgG等多种蛋白成分的抗体;检测疫苗中残余牛血清含量佳线性范围为0.78~25 ng/ml,精密度(回收率为80%~112.5%,CV为2.5%~9.0%)和准确度(回收率为96.7%~112.5%,CV为1.4%~9.4%)良好,检测限度为1.5 ng/ml,检测限量为3 ng/ml;与正常马、兔、豚鼠血清以及不同病毒性疫苗基质液均无交叉反应,可定量检测不同病毒性疫苗中的残余牛血清.结论所制备的ELISA试剂特异性强,灵敏度高,重复性好,适用于常规疫苗中残余牛血清的检测.
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牛血清中牛腹泻病毒牛肾细胞直接病变检测方法的建立
目的 建立牛血清中牛腹泻病毒(BVDV)的牛肾细胞直接病变检测法.方法 将样品接种至牛肾(CK)细胞上,通过观察细胞病变,判定样品是否污染BVDV.结合病毒增殖曲线及不同培养时间的检出率,确定佳判定时间,并对检测方法进行验证及应用.结果 该方法的佳判定时间为10 d;测定限度为100~240 CCID50/ml;样品冻融次数及不同批次的牛血清样品对试验结果影响较大;应用该方法检测134批牛血清样品,BVDV污染率约为7.5%.结论 已建立牛血清中牛腹泻病毒牛肾细胞直接病变检测法.