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大鼠脊髓微血管内皮细胞的分离培养与鉴定
脊髓微血管内皮细胞(spinal cord microvascular endothelial cells,SCMECs)参与构成血脊髓屏障,其功能变化与多种脊髓相关疾病相关.目前分离SCMECs的文献很少.本研究拟基于分离多种原代内皮细胞的经验[1-2],建立分离纯化SCMECs的方法.1 材料与方法1.1 材料1.1.1 试剂:DMEM(高糖)、胎牛血清(FBS)、Ⅱ型胶原蛋白酶、双抗、庆大霉素、谷氨酰胺和l×PBS(北京协和医学院细胞中心);牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)、胶原蛋白酶/分散酶(collagenase/dispase)(Roche公司);嘌呤霉素(Sigma公司);内皮细胞培养基(ECM)(Scien Cell公司);兔抗大鼠yon Willebrand factor(vWF)抗体(SantaCruz公司);抗GFAP抗体和抗α-SMA抗体(Abcam公司);FITC标记和TRITC标记的二抗(北京中衫金桥公司).
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我会组织召开新版药典细胞培养基有关标准研讨会
8月29日上午,由我会主办、北京清大天一科技有限公司协办的新版药典细胞培养基有关标准研讨会在北京飞天大厦举行。
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我会召开秘书处2014工作总结会议
2月13日,我会在协会会议室召开秘书处2014工作总结会议。常月芬副秘书长主持会议,李少丽副理事长、吴朝晖秘书长出席。我会秘书处2014年顺利组织召开了第五次全国会员代表大会和第五届理事会第一次会议,完成改选换届工作;向政府有关部门上报了关于《药品管理法》、《免疫细胞治疗规范与管理办法》、《医疗器械注册与备案管理办法》、《生物类似药研发与评价技术指导原则》等修、制订建议,提交了《生物相似药政策研究报告》、《关于加强对免疫细胞治疗进行规范和管理的建议》和《关于促进卫生技术评估工作的指导意见》;组织召开了两次干细胞临床管理研究专家委员会会议;为全国人大代表和政协委员中医药行业代表(委员)提供参会建议、提案;行业自律继续进行牛血清和细胞培养基的自律检查工作。在会议方面,组织召开了“新版药典细胞培养基有关标准研讨会”,召开了中国(山东)国际生物医药产业博览会暨首届中国制药技术大会,与国际组织开展了流感免疫的研讨会。在信息服务方面,我会启动了协会信息管理平台,开通了转化医学网络平台。2015年,我会将在新一届理事会领导下,面对新时代的机遇与挑战,在自身建设和工作拓展方面努力提高,力求加强分支机构组织的凝聚力,组织好第七届中国医药生物技术论坛,促进技术成果转化,面向社会或专业人士开展大众科技和专业技术的宣传普及工作,继续做好《中国医药生物技术》杂志的出版和行业自律工作,为政府建言献策,拓展行业标准的制定,使协会的服务更加多样化,贴近行业发展。
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浙江省台州医院获得我会生物样本库质量检查合格证书
为了促进我国生物样本库的规范化建立,我会生物样本库分会制定了《生物样本库质量达标检查手册》,经过常务理事会审议和批准,开展生物样本库行业自律工作。2014 年下半年,浙江省台州医院向我会递交相关申请材料,我会组织专家赴现场进行检查,并且抽取样品送检。经查,该院符合《生物样本库质量达标检查手册》质量标准,现已获得我会生物样本库检查合格证书,同时,专家也对其标本库给予了进一步完善建议。生物样本库检查是我会继牛血清生产质量检查和细胞培养基生产质量检查之后的又一项行业自律工作。
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石家庄宏伟和内蒙古金源康通过细胞培养基生产质量达标检查
根据石家庄市宏伟生物技术有限公司和内蒙古金源康生物工程有限公司细胞培养基生产达标检查申请,协会组织有关专家对两家公司进行了细胞培养基生产企业质量达标现场检查,经专家现场打分,两家公司细胞培养基生产基本符合《全国细胞培养基生产企业质量达标检查手册》规定的要求。现场抽取的三批样品经中国食品药品检定研究院按《中国药典》2010年版三部及 HG/T3935-2007检验,符合质量标准。
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北京清大天一科技有限公司获得细胞培养基生产企业达标证书
2012-2013年,中国医药生物技术协会组织专家,对北京清大天一科技有限公司进行了细胞培养基生产企业达标现场检查,经检查该公司基本符合《细胞培养基生产企业质量达标检查手册》的要求。现场抽取的三批样品经中国食品药品检定研究院按照《中国药典》2010年版及 HG/T3935-2007标准检验,达到质量标准。根据《细胞培养基生产企业质量达标检查管理指导原则》规定,2013年10月北京清大天一科技有限公司获得细胞培养基生产企业达标合格证书,证书编号M2013001,有效期为五年。
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顺应疫苗行业技术创新潮流变供应商为支撑技术提供者
支撑技术,一般指为某一个行业提供技术支持、支撑与服务的技术平台.它具有引导先进技术的应用和技术创新,提高行业技术支撑能力,并为行业技术创新的全面实施提供技术支持的作用.具体到生物制药行业,支撑技术泛指细胞大规模培养技术平台、蛋白质分离纯化技术平台等,例如支撑多数人用和兽用疫苗生产、抗体药物生产的细胞大规模培养技术平台,它包括高效表达的细胞系/病毒株、生物反应器、个性化细胞培养基和细胞培养工艺技术.
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细胞培养基的质量控制与GMP管理
全球生物制药技术和市场的迅速发展,为哺乳类动物细胞培养基市场提供了快速成长的发展环境,并使之保持强劲的发展势头.
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活性依赖性神经保护蛋白同源基因在帕金森病模型鼠脑中的表达
帕金森病(PD)是以震颤、强直、运动迟缓为特征的中枢神经系统疾病,主要病理变化为黑质致密部多巴胺能神经元变性.PD是中老年人常见的致残疾患,备受关注.近年发现将活性依赖性神经保护蛋白(ADNP)加入神经细胞培养基中,可抵御某些毒性物质对神经细胞的伤害;在小鼠及大鼠体内实验亦显示有预防脑损伤作用[1].我们于2001年6月至2002年4月制备类似PD症状的大鼠模型,旨在探讨ADNP的表达量与PD病变有无关系.
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用细胞培养基培养戊型肝炎病毒/意大利布雷斯西亚两例传入性戊型肝炎的报告/Twinrix:能提供快速保护的短程免疫方案
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抗氧化剂和糖皮质激素抑制缺氧/复氧时肾小球血管内皮细胞ICAM-1的表达
细胞间粘附分子-1(Intercellular adhesion molecule-l,ICAM-1)主要在内皮细 胞表达,作为白细胞β2整合素家族的配体在中性粒细胞与内皮细胞紧密结合和随后进入 缺血组织中起重要作用。通过降低ICAM-1的表达会减轻缺血/再灌注损伤,这点已在多个 脏器的动物实验中得到证实。已有研究发现糖皮质激素和抗氧化剂,能降低细胞因子刺激下 升高的ICAM-1,本研究旨在探讨抗氧化剂二硫代氨基甲酸吡 咯烷(pyrrolidine dithiocar bamate,PDTC)和糖皮质激素中的地塞米松(Dexamethasone,Dex)对缺氧/再给氧(hypoxia /reoxygenation,H/R)条件下对体外肾小球血管内皮细胞ICAM-1表达的影响。1 材料与方法 (1)试剂 纯化抗鼠CD54单克隆抗体(IgG)和FITC标记抗鼠IgG二抗(深圳晶美生物工程有限 公司),Dex和PDTC(美国SIGMA公司),RPMI 1640细胞培养基(美国GIBCOBRL公司),小牛血清 (杭州四季青生物公司)。 (2)细胞培养 小鼠肾小球血管内皮细胞株ESDO由长征医院肾内科提供。复苏后,加入 含20%灭活小牛血清的1640培养液,25 cm细胞培养瓶生长,待1~2 d细胞长满瓶底后,以1 08/L浓度接种传代。细胞存活率用台盼蓝染色判断。 (3)方法 向氧分压可调控的Queue细胞培养箱中注入95%的氮气和5%的CO2混合气体 ,使氧分压为零,为缺氧条件。注入空气和5%CO2混合气体为再给氧。缺氧时间为l0 h, 再给氧时间为6 h,PDTC的浓度为50 μmol/L、5 μmol/L,Dex为l00 μmol/L、1 μmo l /L,分别在缺氧前30 min和再给氧时加入。ICAM-1表达的测定:将生长成单层的内皮细 胞用0.2%EDTA在37℃消化l0 min,PBS洗涤后,调整浓度为108/L。取调整好的细胞悬液l 00 μl,加入CD54单克隆抗体20 μl,混匀后室温避光孵育30 min,加FITC标记IgG二抗2 μl 孵育30 min,PBS洗涤2次,固定。阴性对照以FITC标记的同型抗体代替。24 h内EPICS-XL 型流式细胞仪(美国Coulter公司产品)检测。每个样本分析5000个细胞,结果以阳性细胞的 百分率(%)表示。
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两种阿奇霉素颗粒剂在小儿肺炎支原体肺炎治疗中的成本-效果分析
肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)是小儿呼吸道感染的主要病原体之一.由于MP是一类无细胞壁、能在无活细胞培养基上生长的微生物,因此对β-内酰胺类抗生素不敏感,在临床首选药物为大环内酯类抗生素和四环素类抗生素[1].本研究采用成本-效果分析方法(cost effectiveness analysis,CEA)分别对用国产和合资阿奇霉素颗粒剂治疗小儿肺炎支原体肺炎的治疗方案进行分析比较,旨在为临床选择安全、有效、经济的治疗方案提供合理的依据,现报告如下.
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RPMI-1640和DMEM培养基中肝癌细胞系BEL-7402与HepG-2的生长状态比较
背景:DMEM和RPMI-1640是两种常用的商品化培养基,二者对肝癌细胞生长的影响尚未见直接的对比研究.目的:比较两种常用培养基对人肝癌BEL-7402与HepG-2细胞系体外生长和增殖效果的影响,从中选择更适合的培养基.方法:分别应用高糖DMEM与RPMI-1640完全培养液培养BEL-7402和HepG-2细胞,于培养的0,24,48,72,96,120 h用酸性磷酸酶检测法测定细胞生长和增殖速率,并于倒置显微镜下观察细胞的形态.结果与结论:结果发现BEL-7402和HepG-2细胞在RPMI-1640培养基中的生长增殖速率均明显高于DMEM培养基 (P < 0.01).镜下观察证实细胞在RPMI-1640培养基中的黏附和伸展状态更好.因此,建议首选RPMI-1640培养基进行肿瘤细胞体外培养.
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解脲支原体生殖道感染治疗研究进展
近年来由解脲支原体(UU)引起的非淋球菌性生殖道感染(RTI)引起了人们的高度重视,其引起的RTI是一种新的性传播疾病(STD),因其传染性强,对人类健康危害性大,是我国重点防治的STD之一[1].UU是微生物中固有的一群大小介于细菌和病毒之间、无坚硬的细胞壁、呈多形性、能在无活动细胞培养基中繁殖的小微生物.UU寄居于生殖道,主要通过性行为传播.女性泌尿生殖道UU、沙眼衣原体(CT)感染在性病中发病率高,被称为"第二代性病"[2],它不仅可以引起广泛的RTI,如前庭大腺炎、阴道炎、宫颈炎等下生殖道感染,也可引起子宫内膜炎、输卵管炎、卵巢炎、盆腔炎等上生殖道感染,导致不孕、不育及胎儿宫内感染、流产等不良后果.因此许多医务工作者对治疗UU的药物作了大量的研究和报道,现综述如下.
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第三届亚洲细胞株开发和工程会议及同期会议将在上海举办
2014年5月20-23日,由IBC Asia主办的第三届亚洲细胞株开发和工程会议、第四届年度生物制造会议、第五届年度生物仿制药会议将同时在上海金茂君悦大酒店举办,《上海医药》杂志担任媒体支持。
第三届亚洲细胞株开发和工程会议将讨论的内容包括细胞培养基、细胞库、瞬时表达、非哺乳动物细胞株以及糖基化改进等。会议特设个人社交环节,其中包括“VIP午餐桌”和“快速社交”,参会嘉宾将有机会在轻松休闲的环境中与人交往及向专家学习。第四届年度生物制造会议聚集了来自生物制药、生物技术、制药、CMO、投资和融资公司的高级行业专家以及来自全亚洲和世界其他地区的领先技术解决方案提供商,分享案例研究、佳实践并讨论各种挑战,从而提高生物制造行业的质量并优化运营。第五届年度生物仿制药亚洲会议邀请来自亚洲和全球的生物仿制药开发、制造和商业化高级决策者,共同探讨在建立合作伙伴关系和生物仿制药开发方面所面临的紧迫的战略挑战。 -
肝基质和MNNG对日本血吸虫成虫培养细胞糖细胞化学作用的研究
本文主要研究肝基质和MNNG共同作用对日本血吸虫成虫培养细胞增殖及细胞内糖类物质的影响.方法:将虫龄为32天的日本血吸虫成虫细胞,分别接种于普通盖玻片(实验Ⅰ组)和铺敷有肝基质的盖玻片上(随机分为实验Ⅱ和Ⅲ组),细胞培养基为RPMI-1640含20%小牛血清附加常量抗生素.培养第4天,实验Ⅰ组和Ⅲ组细胞分别在含3μg/ml MNNG的培养基中培养48小时,彻底清洗后继续用含20%小牛血清的RPMI-1640培养.实验Ⅱ组细胞用不含MNNG的培养基处理相同时间.
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泌尿系统支原体感染及药敏分析
支原体是一类原核细胞的微生物,是能在无活细胞培养基中繁殖的少微生物,体积介于细菌和病毒之间.支原体主要是解脲支原体(Uu),可致泌尿生殖系统感染,引起非淋菌性尿道炎、尿路结石、前列腺炎、肾盂肾炎等多种疾病,也是女性盆腔炎的病原菌,并与男性不育及女性不孕[1]有关.可引起习惯性流产,并通过血液、骨髓感染新生儿[2],由于它缺乏细胞壁,所以β-内酰胺类等抑制细胞壁合成的抗菌药物对支原体无作用,治疗支原体选药范围很窄,又易产生耐药.因此对支原体进行耐药性检测,指导临床合理应用抗菌药物、选择有效的抗菌药物进行治疗很重要.
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细胞培养基M199中几种维生素含量的测定方法
本文建立了反相色谱法同时测定细胞培养基M199中维生素A、维生素E醋酸酯、维生素D2的含量的方法.采用Lichrospher C18,5μm,225×4mmid柱,可变波长UV检测器,甲醇为流动相,样品在10分钟内达到了基线分离.该方法简便、快速,结果可靠,可用于细胞培养基的质量控制.
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HPLC-UV法测定细胞培养基中川芎嗪浓度
目的:建立检测川芎嗪浓度的高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV).方法:采用Zirchrom反相柱(Kromasil C18,250 mm×4.6 mm,5 μm),柱温40℃,流动相为醋酸铵水溶液-甲醇(4060,pH=5.0),流速:1.5 ml/min,检测波长280 nm.内标:安定.结果:川芎嗪在10~1000 μg/L范围内线性良好(n=5,C=123.581R-20.869,r=0.998),低定量和检测浓度分别为10 μg/L和3 μg/L.日内、日间RSD均小于5%.结论:该方法专一性强、灵敏度高、简单可靠,可用于川芎嗪的细胞转运研究.
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山莨菪碱减轻TNF-α所致内皮细胞凋亡
目的:从转录因子水平观察山莨菪碱能否减轻TNF-α所致内皮细胞的凋亡,并探讨其机制是否与其抑制NF-κB活化有关.方法:培养小牛肺动脉内皮细胞(BPAEC),将山莨菪碱(0.2 mg/mL)加入细胞培养基中,30 min后再加入TNF-α(2500 U/mL)损伤24 h,采用Hoechst 33258染色,荧光显微镜观察细胞凋亡情况,并进行显微照相.采用Sellin法抽提细胞上清片段DNA及琼脂糖电泳,观察是否出现DNA梯状条带,用二苯胺法测定上清液及沉淀物中DNA含量,计算细胞DNA断裂百分率.BPAEC表达I-κBα及iNOS的Western blot印迹分析及用凝胶滞留法EMSA检测NF-κB活性.结果:山莨菪碱能明显减轻TNF-α所致的BPAEC凋亡,表现为荧光显微镜下凋亡细胞减少,未见明显梯状条带,DNA断裂百分率也明显减少.山莨菪碱抑制TNF-α所致的I-κBα的含量下降及NF-κB的活化,并抑制TNF-α所致的NF-κB从胞浆向胞核的移位.另外山莨菪碱能减少因TNF-α刺激所引起的BPAEC表达iNOS的增加.结论:山莨菪碱减轻TNF-α所致的内皮细胞凋亡,可能与山莨菪碱抑制NF-κB激活,从而抑制iNOS合成有关.