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增液汤中梓醇的HPLC定量研究
目的 建立增液汤中梓醇的HPLC定量测定方法.方法 采用Agilent ZORBAX SB C18色谱柱(250 × 4.6 mm,5 μm),流动相为水(A)-乙腈(B),采用梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,检测波长为210 nm,柱温为30℃.结果 梓醇与其他成分分离度良好,且在0.2028~4.056 μg的检测范围内与峰面积呈现良好的线性关系,其相关系数为0.99995,加样回收率为100.23%,RSD值为1.86%.应用所建立的方法对增液汤中的梓醇进行了含量测定.结论 所建立的含量测定方法准确可靠,可为增液汤的质量控制提供参考.
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基于UHPLC-UV-Q-TOF-MS/MS的厚朴不同方法姜制前后化学成分定性研究
采用UHPLC-Q-TOF-MS/MS技术定性分析方法,探讨厚朴姜制前后以及不同姜制方法化学成分变化.定性采用正负离子扫描模式,利用Peakview1.2软件分析鉴定出35种成分,发现厚朴姜制前后质变成分较少,并结合Marker-View1.2.1软件进行主成分分析和t检验,得出6种主要差异性成分发现厚朴经过姜炙之后厚朴酚、厚朴三酚、十四烷酸、十六烷酸含量增加,蓝桉醇含量减少,上述化学成分的差异可能是厚朴生品和制品临床功效不同的主要原因.
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三七皂甙类成分分析方法研究进展
综述了近年来三七及其制剂中化学成分分析测定的研究进展.介绍现代仪器分析方法在其中的应用,包括光谱法、色谱法等,为三七及其制剂的质量标准制定及质量控制提供有益的借鉴.
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栀子大黄汤配伍变化对枳实中总柚皮素和总橙皮素药动学的影响
采用HPLC-UV测定枳实和栀子大黄汤灌胃后大鼠血浆中总柚皮素和总橙皮素浓度,血浆样品通过液液萃取法进行提取,通过酸水解的方式将柚皮素、橙皮素缀合物转化为游离柚皮素、橙皮素.Phecda C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相0.1％磷酸-甲醇,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1.采用DAS 2.0数据处理软件及SPSS 16.0统计软件分别进行药动学参数计算及比较.枳实组(ZS)和栀子大黄汤组(ZZDHD)中总柚皮素、总橙皮素的药动学参数存在显著性差异,ZS组中总柚皮素的Cmax,AUC0-t分别比ZZDHD组的高出73.5％,65.9％,ZS组中总橙皮素的Cmax,AUC0-t分别比ZZDHD组的高出63.5％,119.1％.说明栀子大黄汤中其余成分对枳实中总柚皮素、总橙皮素的药动学特征具有显著影响,经配伍后其Cmax,AUC0-t湿著降低.该方法简便准确、灵敏度高、特异性好,可以应用于血浆中总柚皮素和总橙皮素含量测定.
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HPLC-UV-MS方法对治疗糖尿病药品或保健品中可能非法添加的4种α-葡糖苷酶抑制剂成分的定性与定量分析
本文建立了一种反相高效液相色谱一紫外光谱检测法,可同时定量检测维力波糖、米格列醇、维格列波糖和阿卡波糖这4种a-葡糖苷酶抑制剂.采用Prevail carbohydrate(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-磷酸盐缓冲液(pH 8.0)进行梯度洗脱,在210 nm下进行检测,结果维力波糖、米格列醇、维格列波糖和阿卡波糖的线性范围分别为58.2～932.0 μg·mL~(-1)(r=0.9999,n=5)、23.5～376.0 μg·mL~(-1)(r=0.999 9,n=5)、0.128～2.050 mg.mL~(-1)(r=0.999 9,n=5)、38.2～612.0 μg·mL~(-1)(r=0.999 9,n=5);平均回收率分别为97.0%、103.6%、96.4%和100.4%(n=9).与此同时,本文还建立高相液相色谱一质谱检测方法,用于这4种化合物的定性分析.以上两种方法简便快捷,结果准确可靠、重复性好,可用于可疑的糖尿病药品中非法添加a-葡糖苷酶抑制剂的定性定量检测.
关键词： 降糖药 a-葡糖苷酶抑制剂 非法添加药物 HPLC-UV UPLC-ESI-MS -
基于UHPLC-UV-Q-TOF-MS/MS的牛蒡子炒制前后化学成分定性定量研究
采用UHPLC-Q-TOF-MS/MS技术定性和HPLC-UV定量多指标相结合的综合分析方法,探讨牛蒡子炒制前后化学成分变化.定性采用正负离子扫描模式,应用Peakview 1.2分析鉴定出23种成分,发现牛蒡子炒制前后质变成分较少,量变成分较多,并结合MarkerView 1.2.1软件进行主成分分析和t检验,得出10种主要差异性成分;定量分析6种主要成分的变化,发现牛蒡子经过炒制之后绿原酸、牛蒡苷、异绿原酸A含量下降,异绿原酸B、异绿原酸C、牛蒡苷元含量增加,上述化学成分的差异可能是牛蒡子生品和炒品临床功效不同的主要原因.
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HPLC－UV法测定商陆中商陆皂苷甲的含量
目的：建立商陆中商陆皂苷甲的HPLC－UV测定方法。方法用Alltima C18色谱柱（4．6 mm ×250 mm，5μm），流动相：乙腈－0．1％磷酸水＝40∶60，流速：0．8 mL? min－1，检测波长：203 nm，考察该方法的专属性、标准曲线和定量下限、精密度与回收率、稳定性以及重现性。结果商陆皂苷甲在0．15～3．86μg内，线性关系良好，定量下限0．039μg，精密度良好（日内、日间 RSD 分别为1．12％和1．89％），平均回收率为98．61％。10个不同产地样品中商陆皂苷甲的含量为0．05％～0．42％。结论本方法简单，重复性好，适合用于商陆药材的质量控制。
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HPLC-UV法测定大鼠脑组织中5-羟色胺含量
目的 建立大鼠脑组织中5-羟色胺(5-HT)含量的HPLC-UV测定方法.方法 采用SHIMADZU VP-ODS C18反相柱(250×4.6 mm,5 μm),流动相:甲醇-0.01 mol/L的醋酸钾缓冲液(10:90,V/V,用0.2 mol/L柠檬酸调pH至4.00);流速:1.0 ml/min;柱温:25℃;检测波长:275 nm.结果 5-羟色胺在0.1～20 μg/ml范围内,回归方程为A = 46008.89C +1886.58,相关系数r = 0.9999,低检测限为40 ng/ml,低定量限为100 ng/ml.加样回收率为89.62 %～101.60 %,日内、日间精密度均小于3 %.结论该方法准确可靠,简单易行,可重复性强,适用于多样本5-HT的快速测定.
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HPLC测定大鼠血浆中达比加群的浓度
目的:建立大鼠血浆中测定达比加群的HPLC-UV法.方法:血浆蛋白用甲醇沉淀,采用Kromasil C18柱(100mm×4.6mm,5μm)；流动相为0.01 mol·L-1甲酸铵溶液-甲醇(77:23)；流速为0.5 mL·min-1.结果:血浆中达比加群检测方法的线性范围为0.05～20μg·mL-1；定量下限为0.05 μg· mL-1；提取回收率为67.6％ ～71.3％;相对回收率为98％ ～ 109.7％；RSD小于10％.结论:本方法灵敏、准确、可靠,适用于大鼠血浆中达比加群的测定.
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高效液相色谱法分离测定恩替卡韦光学异构体
本文建立了一种简单有效的高效液相-紫外检测法测定分离恩替卡韦光学异构体.恩替卡韦化学结构中有3个手性原子,恩替卡韦有7个光学异构体,其中有6个非对映异构体,1个对映异构体.在Symmetrix ODS-AQ C18 (4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱上实现了恩替卡韦与非对映异构体的分离,在Daicel CHIRALPAK AD (4.6 mm×250 mm,10 μm)色谱柱上实现了恩替卡韦和对映异构体的分离.检测波长为254 nm.非对映异构体(非对映异构体-1,非对映异构体-2,非对映异构体-3)的检测限和定量限分别为0.0371,0.0376,0.0377 μg/mL和0.124,0.125,0.126 μg/mL.对映体的检测限和定量限分别为0.14和0.46 μg/mL.非对映异构体-1,非对映异构体-2,非对映异构体-3和对映异构体的精密度分别为0.36％,0.44％,1.04％和0.67％.对映异构体的回收率为98.4％-100.5％.该方法可用于控制恩替卡韦光学异构体的杂质限度.
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泮托拉唑钠肠溶片在健康中国人体内的药动学研究及生物等效性评价
目的 评价健康受试者单剂量口服两种泮托拉唑钠肠溶片的人体药动学与生物等效性.方法 采用两种制剂两周期随机交叉试验设计,HPLC-UV法测定20名男性健康受试者单剂量口服40 mg国产泮托拉唑钠肠溶片和进口泮托拉唑钠肠溶片后泮托拉唑的血药浓度.采用非室模型计算药动学参数.AUC,Cmax对数转换后进行方差分析并计算90%可信区间.结果 国产和进口泮托拉唑钠肠溶片的药动学参数分别为:Cmax(3610±956),(3466±1209)ng·mL-1,tmax(3.00±0.40),(3.00±0.46)h,AUC0-t(8140±5065),(8390±5474)ng·h·mL-1,AUC0-∞(8293±5094),(8625±5606)ng·h·mL-1.t1/2(1.61±0.28),(1.85±0.27)h.结论 国产和进口泮托拉唑钠肠溶片具有生物等效性.
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HPLC法测定多维生素糖浆中D-泛醇含量
目的 建立HPLC-UV法测定多维生素糖浆中 D-泛醇的含量.方法 采用Agela AQ-C18柱;流动相A为0.05mol·L-1磷酸二氢钾-乙腈(99∶1);流动相B为0.05mol·L-1磷酸二氢钾-乙腈(80∶20);梯度洗脱;流速为1.0mL·min-1;检测波长为214nm.结果 D-泛醇的浓度在0.02～0.4mg·mL-1范围内线性关系良好(r=1.0000,n=5);平均回收率为99.8%(RSD=0.4%,n=9).结论 本分析方法快速、灵敏,分离度良好,结果准确可靠,可作为多维生素糖浆的质量控制项目之一.
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柱前衍生HPLC-UV同时测定人工牛黄中胆酸及猪去氧胆酸的含量
目的 建立柱前衍生HPLC-UV同时测定人工牛黄中胆酸及猪去氧胆酸的含量.方法 以2-萘基溴甲基酮为衍生试剂,三乙胺为催化剂,60 ℃水浴条件下对胆酸及猪去氧胆酸进行衍生,考察衍生试剂用量、催化剂用量及反应时间等对衍生产物的影响,确定衍生反应的条件,然后考察建立HPLC-UV分离检测方法对人工牛黄中胆酸及猪去氧胆酸含量进行测定.结果 当衍生试剂的摩尔量与胆酸及猪去氧胆酸的摩尔总量的比大于30∶1,催化剂的摩尔量与两者的摩尔总量的比在5∶1~60∶1范围内,在60 ℃水浴条件下反应50 min时,胆酸及猪去氧胆酸的衍生物反应完全.方法学验证:胆酸在0.4~5.0 μg范围内线性关系良好(r=0.999 5);猪去氧胆酸在0.12~1.5 μg范围内线性关系良好(r=0.999 8).胆酸的平均回收率(n=6)为100%,RSD为2.40%;猪去氧胆酸的平均回收率(n=6)为101%,RSD为1.33%.此批次人工牛黄样品中胆酸的含量为5.55%,猪去氧胆酸的含量为2.55%.结论 本方法灵敏度高、准确可靠、稳定性和重复性好,可用于测定人工牛黄中胆酸及猪去氧胆酸的含量.
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秀丽隐杆线虫NDX-4蛋白的体外表达及酶学活性研究
目的 构建秀丽隐杆线虫NDX-4基因的克隆载体和表达载体,诱导NDX-4蛋白表达,研究NDX-4的体外酶学活性.方法 构建NDX-4的克隆载体,将NDX-4的开放阅读框架(ORF)插入PGEM-T载体中扩增;采用双酶切将NDX-4ORF连入表达载体pET-30a(+)中;将连接质粒转入BL21(DE3)感受态细胞后,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)对NDX-4蛋白进行表达诱导,并进行树脂纯化;用SDS-PAGE和Western blot检测以评价NDX-4体外表达和纯化的质量;采用高效液相色谱-紫外检测技术(HPLC-UV)检测NDX-4蛋白水解8-oxodGTP和8-oxoGTP的活性.结果 SDS-PAGE和Western blot 检测均在经IPTG诱导的蛋白提纯物泳道上出现单一条带,分子质量约为24kDa,而未诱导的和空载体均未见条带.HPLC-UV检测结果显示加入NDX-4蛋白的8-oxodGTP和8-oxoGTP均被水解为相应的单磷酸和二磷酸氧化核苷,并且随着蛋白量的增加,两种产物的量逐渐增多.结论 秀丽隐杆线虫的NDX-4蛋白具有水解8-oxodGTP和8-oxoGTP的双重功能,可能对抑制DNA和RNA的氧化损伤具有重要意义.
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高效液相色谱法同时测定南葶苈子中6种成分含量
[目的]建立高效液相色谱法（HPLC-UV）同时测定南葶苈子中6种成分（槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷，槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，异鼠李素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，槲皮素，山奈酚，异鼠李素）的含量测定方法，为南葶苈子质量评价提供技术支撑。[方法]采用反相高效液相色谱法，Agilent Eclipse Plus C18色谱柱（4.6 mm×100 mm，1.8μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱，流速0.3 mL/min，柱温为30℃，检测波长为265 nm。[结果]6种成分线性关系良好，加样回收率范围是99.1%~103.0%。[结论]本研究建立的南葶苈子中6种成分含量测定方法准确、可靠，可用于南葶苈子的质量控制。
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黄芪药材的HPLC-UV指纹图谱研究
目的 建立黄芪药材的HPLC-UV指纹图谱.方法 采用HPLC-UV方法.色谱柱为YMC-Pack ODS-A(250 mm×4.60 mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸水线性梯度洗脱(0→60 min,20:80→40:60);体积流量:1mL/min;检测波长:210 nm;柱温:室温.结果 建立了黄芪药材的HPLC-UV指纹图谱,指定出16个共有指纹峰.标定了其中7个指纹峰的结构:3号峰为毛蕊异黄酮苷,5号峰为芒柄花苷,8号峰为9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,10号峰为毛蕊异黄酮,14号峰为芒柄花素,15号峰为(6aR,11aR)-3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷,16号峰为(3R)-8,2′-二羟基-7,4′-二甲氧基异黄烷.结论 本法简便、准确、重现性好,可作为黄芪药材质量检测的方法.
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过路黄和广金钱草的HPLC指纹图谱比较研究
目的 比较过路黄Lysimachia christinae和广金钱草Desmodium styracifolium的化学成分异同,为阐明二者药效异同提供参考.方法 采用RP-HPLC建立过路黄和广金钱草的HPLC-UV指纹图谱和HPLC-ELSD指纹图谱,比较二者2种指纹图谱的差异.结果 过路黄的HPLC-UV指纹图谱和其HPLC-ELSD指纹图谱的差异很大,UV检测到的强峰并非ELSD检测到的强峰,广金钱草亦然;过路黄的HPLC-UV指纹图谱有14个共有峰,HPLC-ELSD指纹图谱有5个共有峰;而广金钱草的HPLC-UV指纹图谱有28个共有峰,HPLC-ELSD指纹图谱有18个共有峰;13批过路黄的指纹图谱相似度较13批广金钱草的相似度差;过路黄和广金钱草的HPLC-UV指纹图谱有4个共有峰,二者的HPLC-ELSD指纹图谱有2个共有峰.结论 HPLC-ELSD指纹图谱能更好地反映过路黄和广金钱草中量较高的非挥发性成分组成的全貌;市售过路黄的质量差异大,而市售广金钱草的质量稳定;过路黄和广金钱草可能含有2种量较高的相同成分,作为二者治疗相同病症的物质基础,但该2种药材应该各具偏性,各有独特的治疗功用,应明确区分.
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基于衰老大鼠模型的银杏叶提取物血清指纹图谱研究
目的 研究银杏叶提取物用于衰老大鼠模型的血清指纹图谱,探讨其体内药效成分.方法 建立D-半乳糖致衰老大鼠模型,同时ig给予银杏叶提取物,制备衰老大鼠的含药血清,采用HPLC-UV和HPLC-ESI-MS法,分别针对黄酮类成分和内酯类成分建立指纹图谱,分析入血成分.结果 HPLC-UV指纹图谱显示了10个入血成分,大多为代谢成分；HPLC-MS指纹图谱标定了9个共有峰,其中7个为原型成分.结论 首次进行了银杏叶提取物的血清药物成分图谱研究,可反映银杏叶提取物口服给药吸收入血药物成分的变化,为其体内药效物质研究奠定基础.
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丹参及丹参注射液指纹图谱的HPLC-MS研究
目的采用HPLC-UV-MS法对丹参药材、丹参注射液中间体及丹参注射液进行指纹图谱的研究.方法采用Alltima C18分析柱,甲醇-水-冰醋酸梯度洗脱系统,流速:1mL/min,检测波长:281 nm,MS同时记录总离子流(TIC)色谱图.结果得到分离度较好的丹参药材、中间体及注射液的HPLC-UV及HPLC-MS指纹图谱.结论为丹参药材、中间体及注射液的质量控制提供全面、可靠的依据.
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HPLC-UV技术用于川木香煨制前后代谢物轮廓差异研究
目的 比较川木香煨制前后代谢物轮廓(metabolic profiling)差异,筛选出导致差异的特征性化学成分.方法 经HPLC-UV分析获得川木香生品、煨品的色谱图数据集;采用主成分分析(principal component analysis,PCA)、偏小二乘法-判别分析(partial least square-discriminant analysis,PLS-DA)、聚类分析(hierarchical cluster analysis,HCA)等多变量统计分析方法比较川木香生品、煨品的代谢物轮廓差异及筛选导致差异的特征性化学成分.结果 川木香生品和煨品代谢物轮廓明显不同,导致差异的特征性化学成分有7个(包含木香烃内酯和去氢木香内酯).结论 从代谢物轮廓角度,川木香煨制前后具有显著差异.
