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千层塔茎尖组织培养灭菌方法的研究
千层塔为石杉科的蕨类植物,它含有的石杉碱甲素是一种高效胆碱酯醇抑制剂,对重症肌无力症的治疗有效率高达99.2%,且还能提高脑内乙酰胆碱的含量.石杉碱甲素制剂(石杉碱甲素片、哈伯因等)现已应用于临床,用于治疗老年人记忆减退和早期老年性痴呆症.由于全合成石杉碱甲素步骤繁琐、价格昂贵且有副作用.因此,现在无论是结构改造还是直接作为药品,石杉碱甲的主要来源还是少数石杉科植物的提取.该类植物是古老的蕨类植物群,现已大多灭绝,现存的该类植物大多生长缓慢,对环境要求苛刻,且只有千层塔Huperzia serrata、小杉兰Lycopodium selago等少数种类含有石杉碱甲素,故资源极其有限.目前,国内外对石杉科植物的组织培养研究较少.我们采用千层塔为实验材料,对其外植体进行组织培养,筛选出一套理论上较完善的灭菌方法和组织培养条件,且进一步推断出其植株中有内源真菌的共生,并标记了内源真菌的共生部位,为内源真菌的大规模培养提供了依据.
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治疗性抗体高表达CHO细胞株构建策略
单克隆抗体(MAbs)具有高度的特异性,因而被大量用于各种疾病尤其是癌症和自身免疫性疾病的治疗.2009年,包含生物抗体药物在内的重组蛋白获得了990亿美元的市场销售额[1],突出的重磅炸弹级药物包括:美罗华利妥昔单抗(rituximab,美国Genentech和BiogenIdec公司研制)、赫赛汀曲妥珠单抗(trastuzumab,美国Genentech公司研制)、阿伐斯汀贝伐单抗(bevacizumab,美国Genentech 公司研制)、艾比特思西妥昔单抗(cetuximab,美国ImClone 公司和Bristol-Myers Squibb公司研制)和修美乐阿达木单抗(adalimumab,美国Cambridge抗体公司和Abbott公司研制)等.表1为2011年部分单克隆抗体药物的全球销售情况[2].以上抗体均由大规模培养的经过基因改造的宿主细胞(host cell)来生产表达.对于治疗性抗体而言,为了满足其生物活性,需要进行正确的折叠和翻译后修饰,因此用于生产治疗性抗体的宿主细胞往往是哺乳动物细胞,主要包括:Sp2/0骨髓瘤细胞、NS0小鼠骨髓瘤细胞、HEK293人胚胎肾细胞和中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO),其中以CHO细胞用途为广泛.
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用于抗体药物生产的动物细胞培养基研究进展
近年来,具有靶向明确,副作用小等优势的抗体药物受到国内外药企的广泛关注。2012年,抗体药物全球销售额已达650亿美元左右,并占据全球十大畅销药物的半壁江山[1]。
动物细胞大规模培养和抗体质量分析已然成为我国抗体药物产业化的主要限制因素[2]。培养基优化作为动物细胞大规模培养的关键环节,长期被国外生物技术公司(如Thermo Fisher 公司、Sigma 公司等)、医药巨头所垄断。尽管目前国内抗体药物的表达水平有显著提高(1~2 g/L),但仍以使用商业培养基为主,缺乏自主知识产权的产品。由于对所使用的培养基成分未知,一旦出现抗体质量问题便无从优化,特别对于生物仿制药开发而言,抗体质量的一致性显得尤为重要。与此同时,使用商业化培养基还需承担较高的开发成本,往往是自主开发培养基成本的5~10倍。 -
顺应疫苗行业技术创新潮流变供应商为支撑技术提供者
支撑技术,一般指为某一个行业提供技术支持、支撑与服务的技术平台.它具有引导先进技术的应用和技术创新,提高行业技术支撑能力,并为行业技术创新的全面实施提供技术支持的作用.具体到生物制药行业,支撑技术泛指细胞大规模培养技术平台、蛋白质分离纯化技术平台等,例如支撑多数人用和兽用疫苗生产、抗体药物生产的细胞大规模培养技术平台,它包括高效表达的细胞系/病毒株、生物反应器、个性化细胞培养基和细胞培养工艺技术.
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应用转瓶和生物反应器培养表达HBsAg的哺乳动物细胞系的比较研究
大规模培养哺乳动物细胞是生产具有重要医用价值的生物制品,如疫苗、生长因子、单抗等的重要方法.哺乳动物细胞的大规模培养方式主要有传统的转瓶和现代的各种生物反应器.目前,我国乙型肝炎疫苗(转基因中华地鼠卵巢细胞产品)的生产采用转瓶培养方式.但近年来,应用载体和生物反应器大规模培养哺乳动物细胞已成为国际上细胞培养工业化有发展前途的技术[1].本室引进了国外新的篮式载体型生物反应器系统用于哺乳动物细胞系的大规模培养研究.
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旋转生物反应器及微载体技术:组织工程种子细胞大规模扩增的新方法
1987年提出组织工程学概念以来,部分再造的组织或器官已经开始或即将进入临床应用,然而,组织工程产品的产业化研究仍然存在一些制约因素,特别是常规细胞培养方法不能满足实验室研究和临床需要时,如何大规模获得具有再生活力的种子细胞已经成为当前组织工程研究所面临的关键性瓶颈问题之一.近年来,应用旋转生物反应器以及微载体技术进行组织工程种子细胞大规模培养逐渐受到科研人员的重视,进展较快.有望应用该技术解决这个瓶颈.
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富含EPA的海洋微藻眼点拟微球藻的大规模培养
采用"随机设计"软件优化了海洋微藻眼点拟微球藻(Nannochloropsis oculata)的工业培养基,细胞在配方1中的EPA含量占总脂肪酸的40%以上,平均比生长速率高达0.32 d.1999年10月间在83.5 m2户外池中大规模获得生物量的平均面积产率为1.09g/m2@d,藻粉中含有49.50%的蛋白质、20.30%的总脂和3.00%的EPA.2000年8月,在6.12m2、28.02m2和露天83.5m2跑道池中采用耐高温生产藻种,生物量面积产率分别为5.44、9.96和7.66 g/m2@d,藻粉中舍有2.50%的EPA.这表明富含EPA的眼点拟微球藻的工业化生产是完全可行的,生产的藻粉可作为单细胞蛋白和开发EPA产品的好原料.
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乳猪肝细胞旋转培养的意义
我们采用普通培养箱对乳猪肝细胞进行旋转培养,旨在探讨保持肝细胞良好功能和体外 大规模培养的简便方法,现将结果报道如下。 一、材料和方法 1.材料:本地杂种小猪4头,雌雄不限,猪龄10~15d,体重2.5~2.9kg。
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皮肤组织工程研究进展
组织工程学是近年来发展起来的一门新兴学科,现就皮肤组织工程的研究作一简要概述:早在1951年,就有学者建议用实验室生长的皮肤来治疗烧伤病人[1],但由于表皮细胞培养困难,此方法未能实施。直到1975年Rheinwald和 Green[2]攻克了体外大规模培养表皮细胞的难题,皮肤替代物的研究和制作才日渐广泛。皮肤替代物可分为:表皮替代物、真皮替代物和复合皮肤替代物。 一、表皮替代物 1.表皮细胞悬液:Billingham等[3]首先用培养的表皮细胞悬液治疗大面积全厚皮肤缺损,但该方法存在两大难题:一是无法确定转移到病人体内时细胞悬液的合适浓度;二是细胞悬液会随敷料更换而丢失。
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树突状细胞与移植免疫耐受
自 1973年 Steinman首次报道树突状细胞以来,树突状细胞的研究一直受到免疫学界的关注.由于树突状细胞在组织中的含量极微,细胞来源的困难限制了对树突状细胞的生物学特性等方面的研究.1992年Steinman实验室首次建立了用重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)从小鼠的骨髓中大规模培养制备树突状细胞的方法.此后很快成功的用GM-CSF加TNF-a从CD34+造血干细胞中扩增到大量的树突状细胞,使树突状细胞的研究获得突飞猛进的进展,成为当今免疫学及相关学科的一大热点.下面就树突状细与移植免疫耐受的关系介绍如下.