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表皮干细胞分离和鉴定的研究进展
大面积烧伤创面的覆盖仍是医学面临的难题之一.目前临床常用的方法存在诸多不足,以患者自体皮覆盖创面,经常面临皮源不足的问题,用自体表皮细胞培养的皮片来覆盖创面,不但耗时长、易感染,而且费用贵、弹性差.
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Meek皮肤移植技术的创建和发展
各类不同创伤所造成的严重皮肤损伤通常要实行皮肤移植手术进行治疗.换句话说,皮肤移植技术是治疗皮肤损伤的基本手段,也是尽早封闭创面的有效治疗方法.因此,皮肤移植自然成为烧伤外科和整形外科的基本手术方法,其中游离皮片移植术占据主要地位.游离皮肤移植手术在发展中形成的种类很多.为覆盖创面和维护功能经历了从Tiersch植皮,邮票植皮,直到整张植皮.在厚度上,发展了刃厚、中厚、全厚皮片移植.随后,在适应大面积深度烧伤治疗的节省供皮的需要,又经历了皮片逐步变小,发展小块、微型、微粒、皮浆植皮.并由单一的自体皮片移植发展到异体(种)皮片移植.还发展了表皮细胞培养膜片、人工皮、组织工程皮肤移植.与此同时,又从功能恢复和节省皮源的要求上发展了网状植皮,继之又发展了Meek皮肤移植技术.
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无细胞真皮复合皮制备及移植的实验研究
体外构建表皮细胞-无细胞真皮活性复合皮,移植于裸鼠背部创面,并与单纯移植表皮细胞膜片相对照.术后观察创面愈合情况,行光镜、电镜及免疫组化检测.结果示复合皮移植后创面覆盖率高,外观情况良好,收缩程度低.组织学检测提示复合皮移植后上皮分化充分,胶原增生有序,表皮-真皮连接结构重建明显,提示无细胞真皮复合皮移植可改善创面愈合质量.
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表皮细胞培养条件的优化
目的探讨生长因子(EGF)在人表皮细胞无血清培养中的作用,寻找较好组合,以期加快表皮细胞成皮.方法选择EGF、胰岛素、霍乱毒素、氢化考的松4个实验因素,每个因素设立4个浓度水平.利用L16(4×4)正交表设计试验,考察不同培养条件对表皮细胞生长情况、克隆形成率的影响.结果EGF在无血清培养中对培养人表皮细胞的生长及增殖有明显促进作用(P<0.01),在一定范围内(5~20ng/ml)随EGF浓度提高,效应加强;胰岛素浓度在5g/ml时对培养细胞的生长及增殖影响大;霍乱毒素浓度在4.2ng/ml时作用好;氢化考的松作用不明显.EGF、胰岛素、霍乱毒素、氢化考的松分别取20ng/ml、5μg/ml、8.4ng/ml、0.2μg/ml浓度时细胞生长及增殖效果好.结论采用此优化的培养方法,表皮细胞的生长比较迅速,分化不太明显,可保持较旺盛的增殖力.
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皮肤组织工程研究进展
组织工程学是近年来发展起来的一门新兴学科,现就皮肤组织工程的研究作一简要概述:早在1951年,就有学者建议用实验室生长的皮肤来治疗烧伤病人[1],但由于表皮细胞培养困难,此方法未能实施。直到1975年Rheinwald和 Green[2]攻克了体外大规模培养表皮细胞的难题,皮肤替代物的研究和制作才日渐广泛。皮肤替代物可分为:表皮替代物、真皮替代物和复合皮肤替代物。 一、表皮替代物 1.表皮细胞悬液:Billingham等[3]首先用培养的表皮细胞悬液治疗大面积全厚皮肤缺损,但该方法存在两大难题:一是无法确定转移到病人体内时细胞悬液的合适浓度;二是细胞悬液会随敷料更换而丢失。
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无细胞异种真皮与表皮细胞膜片复合移植的研究
目的研究用无细胞异种真皮与体外培养的人表皮细胞膜片复合移植的方法,以及修复全层皮肤缺损创面的效果.方法用猪皮制备无细胞异种真皮,在体外培养人表皮细胞膜片.采用裸鼠为实验动物,随机分两组,实验组于背部皮下埋藏无细胞异种真皮,1周后作背部全层皮肤缺损创面,在埋藏的无细胞异种真皮上移植表皮细胞膜片;对照组创面单纯移植人表皮细胞膜片.术后定期观察创面愈合情况,并活检行光镜、电镜及免疫组化检测.结果与对照组相比,实验组创面覆盖率高,愈合外观好,创面收缩程度低.组织学检测提示实验组上皮分化充分,胶原增生有序,表皮-真皮连接结构重建明显,未见明显的急性排斥反应.结论无细胞异种真皮作为一种真皮替代品,可与体外培养的人表皮细胞膜片复合移植,并可较明显地改善创面愈合质量.
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组织工程皮肤的应用研究
目前,人们对人工活性皮肤替代物(细胞工程或组织工程人工皮肤)的研究已进行了约半个世纪.将表皮细胞培养于经辐照的鼠成纤维细胞(Fb)滋养层,是组织工程皮肤治疗大面积烧伤的里程碑[1].由于培养基的改良与商品化,促使角质形成细胞的无血清层和无滋养层培养成功,结合早期切痂和应用临时皮肤覆盖物,无论多大面积的烧伤创面,理论上均可在伤后3~4周被覆盖,但现实情况距之甚远.
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表皮细胞培养移植的现状与展望
表皮细胞培养技术于1975年首次建立.随着时间的推移,组织工程学和细胞分子生物学迅速发展,表皮细胞培养及移植的基础研究和临床应用也进入了新的阶段.