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3种体细胞共培养体系对昆明鼠早期胚胎体外发育潜力的影响研究
目的:评价不同体细胞共培养体系对昆明鼠早期胚胎体外发育潜力的影响.方法:采用人卵丘细胞、昆明鼠卵丘细胞、昆明鼠成纤维细胞3种共培养体系与昆明鼠2细胞期胚胎共培养,与对照组比较,观察胚胎发育情况,计数囊胚细胞数、囊胚细胞凋亡数.结果:培养24 ~ 48h,4~8细胞及桑葚胚形成率共培养3组与对照组间无差异(P>0.05);培养72h,共培养3组间扩张囊胚形成率和囊胚形成率无差异(P>0.05),但均明显高于对照组(P<0.05);共培养3组间囊胚细胞数及囊胚细胞凋亡率无差异(P>0.05),但与对照组比较存在差异(P<0.05).结论:不同类型的体细胞共培养体系均可在体外为胚胎发育提供一种更类似于体内的环境,有利于胚胎在体外发育.
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EB病毒mir-BART-5促鼠成纤维细胞恶性表征机制研究
目的 探讨EB病毒mir-BART5可促进鼠成纤维细胞恶性表征的作用机制. 方法 生物信息学分析显示miR BART5与miR-18序列相近,miR 18的靶基因表达的结缔组织生长因子(CTGF)可促进细胞增殖.在鼠成纤维细胞NIH/3T3中瞬时转染mir-BART5-mimics使其表达上调,采用Western blot检测对照组与转染组细胞的CTGF表达,采用体外软琼脂集落生成试验观察两组细胞生长的恶性表征. 结果 转染组细胞在软琼脂上呈恶性表征.CTGF在转染组中表达上调(P<0.05),导致NIH/3T3细胞增殖能力增强. 结论 EBV病毒miR BART5通过调控miR 18途径上调CTGF的表达,从而促进细胞的恶性表征.
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HAb18Gedomab1单抗的制备及功能研究
目的:制备抗人HAb18G/CD147胞外区蛋白(HAb18Ged)的单抗HAb18Gedomab1,并对其理化性质和生物学功能进行分析鉴定.方法:用HAb18Ged免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术,融合并筛选分泌抗人HAb18Ged蛋白单抗的杂交瘤细胞株,制备腹水,采用离子交换层析法纯化该抗体.采用流式细胞术、免疫组化等方法对其特异性进行鉴定,并通过明胶酶谱、Ⅰ型胶原酶谱、重组基底膜降解实验研究该抗体的体外生物学功能.结果:获得一株稳定分泌抗人HAb18G/CD147胞外区蛋白单抗的杂交瘤细胞株HAb18Gedomab1,滴度为:1:106,纯化后HAb18Gedomab1单抗的纯度大于90%,抗体亚型属IgG1型.流式细胞术及免疫组化结果证明,该抗体与FHCC-98细胞膜抗原及肝癌组织均呈特异性结合.生物学功能研究表明,HAb1 8Gedomab1可刺激鼠成纤维细胞(3T3)分泌明胶酶MMP-2,MMP-9及胶原酶MMP-1,MMP-8,并具有促进基底膜降解的作用.结论:HAb18Gedomab1单抗可特异识别HAb18Ged,刺激MMPs分泌,促进基底膜降解.
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抗纤灵冲剂对成纤维细胞增殖及其分泌ECM与TNF-α的影响
目的:探讨抗纤灵冲剂对成纤维细胞增殖及其分泌细胞外基质(ECM),细胞因子:肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法:采用血清药理学方法,提取慢性肾衰竭大鼠的含药血清作用于体外培养的鼠成纤维细胞体系,观察具有活血化瘀、扶正降浊作用的中药抗纤灵冲剂对成纤维细胞增殖及其分泌形成ECM中主要成份的纤维连结蛋白(FN),Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)、以及TNF-α的影响.结果:抗纤灵冲剂具有抑制成纤维细胞增殖及其分泌FN、C-Ⅳ、细胞因子TNF-α的作用,该抑制作用具有一定的量效关系.结论:成纤维细胞是抗纤灵冲剂发挥治疗作用的重要靶细胞,这可能是该方防治慢性肾衰竭的机制之一.
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饲养层体系的建立与胚胎干细胞的培养
胚胎干细胞(ES细胞)是由早期胚胎内细胞团或原始生殖细胞经体外分离、抑制分化培养获得的多潜能细胞.ES细胞的研究已在多种动物实验中获得了突破性进展[1,2].ES细胞在体外培养不仅要保持其增殖能力,而且要维持其未分化的状态.由于饲养层细胞能分泌白血病抑制因子(LIF)等抑制ES细胞分化的因子,目前,ES细胞的培养主要是以饲养层来维持其干细胞特性.本实验探讨了胎鼠成纤维细胞(MEF)的分离培养、传代及其作为饲养层细胞的处理条件,建立快速稳定的MEF培养体系,并在此基础上探索了小鼠ES细胞的适宜培养、传代条件.
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诱导多能干细胞技术及应用研究的进展
2006年,Yamanaka等人[1]从24个候选转录因子中优选出4因子(Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4)导入胎鼠成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)中,建立了与小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)具有相似特性的细胞系,即诱导多潜能干细胞(iPs).2007年,他们[2]再次使用该四因子,成功地建立了人iPS细胞系.由于iPS既避免免疫排斥,又不涉及伦理道德问题,因此具有广泛且重要的临床应用价值.本文回顾了过去几年在iPS细胞研究领域中的新发现,并对这项技术的临床应用进行了展望.
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卵巢癌细胞系中CD147的表达对基质金属蛋白酶分泌和活性的影响
目的:探讨CD147在卵巢癌细胞中的表达和卵巢癌细胞与鼠成纤维细胞共孵育对基质金属蛋白酶产生及活性的影响.方法:Western blot方法检测不同卵巢癌细胞系HO-8910,3AO,SKOV3,TC-1及鼠成纤维细胞NIH3T3中CD147的表达,检测卵巢癌细胞系与鼠成纤维细胞共孵育时CD147的表达及基质金属蛋白酶的分泌;凝胶酶谱分析其产生MMPs的含量及活性.结果:SKOV3,TC-1,NIH3T3细胞系中CD147表达阴性,HO-8910,3AO细胞系CD147表达阳性;MMP-2,MMP-9在HO-8910,3AO细胞系中表达明显增高,MMP-9以酶原和活性形式表达,MMP-2仅以酶原形式表达;CD147可以促进MMPs的分泌,增加MMPs活性.结论:CD147可能在卵巢癌侵袭转移过程中起重要作用,可能是判断卵巢癌细胞具备高侵袭转移能力的标志.
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谷氨酰胺对早产儿胃肠功能的影响
1935 年,Krebs[1]首先报道了谷氨酰胺(Gln)可以在哺乳动物组织细胞内水解和合成.但谷氨酰胺的代谢功能未引起人们的注意,1956年,Eagle和Oyama[2]报道:鼠成纤维细胞和人类子宫上皮癌细胞的培养基中若无Gln,细胞就会降解甚至死亡;增加培养基中Gln 的浓度则会出现剂量相关的细胞增殖,且这种作用不能被谷氨酸或葡萄糖替代,才提出了谷氨酰胺可能具有重要而独特的代谢特性.
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重组可溶性TRAIL在大肠杆菌中的表达、分离纯化及其诱导肿瘤细胞凋亡活性的研究
目的和方法:本项研究建立了高效稳定表达可溶型TRAIL(rsTRAIL, TNF-related apoptosis inducting ligand)重组融合蛋白的工程菌,并进行了该重组融合蛋白的表达、分离纯化及诱导肿瘤细胞凋亡活性的研究.结果:重组融合蛋白在大肠杆菌中的表达产量可达到菌体总蛋白的30%左右,亲和层析纯化后,重组融合蛋白的纯度可达95%以上.其表现分子量约为22 kD,等电点为6.29,N-末端的氨基酸顺序与理论值相同.该融合蛋白在浓度为0.1~1 μg/mL时,能显著诱导所试全部7种肿瘤细胞株细胞凋亡,不能诱导正常鼠成纤维细胞细胞凋亡;对贲门癌、乳腺癌、恶性胸腺瘤等原代细胞也具有很强的杀伤作用,但不杀伤正常人外周血淋巴细胞;动物实验研究表明,能显著抑制人肝癌细胞在裸鼠体内生长,而对正常小鼠无任何毒性.结论:该重组融合蛋白能特异性地诱导肿瘤细胞凋亡,具有重要临床应用前景.
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壳聚糖胶原复合敷料生物安全性研究
作者以壳聚糖和冷冻胶原等制成新型创伤敷料,对敷料的外用安全性进行了研究.皮肤刺激实验选用健康大耳白兔10只,体重2~2.5kg,背部脱毛后进行直径为1cm的敷料原液浓缩物斑贴实验.结果显示,一次给药和连续1w给药后,兔皮肤均没有红斑和水肿出现.眼角结膜刺激实验中,大耳白兔右眼分别一次或连续1w给予0.1ml灭菌敷料原液,左眼给予PBS 作对照.结果显示,一次和连续1w给药仅观察到部分兔眼结膜出现轻微充血水肿,未观察到明显的充血或溃疡发生.肌肉刺激实验选用健康大耳白兔2只,体重2~2.5kg,每侧股四头肌注射1ml灭菌敷料原液,48h后观察.结果仅见三处肌肉组织轻度充血,未见肌肉变性和坏死.细菌毒性实验选择原代培养的胎鼠成纤维细胞和角质形成细胞为实验对象.结果表明, 加入培养液体积1~2%的灭菌敷料原液作用2h、4h、8h后的细胞存活率与对照组的比较无明显变化;在随后的培养中,未发现成纤维细胞和角质形成细胞形态有改变;细胞生长计数结果表明,实验组成纤维细胞数和角质形成细胞数与对照组的无明显区别.
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蚯蚓蛋白对大鼠深Ⅱ度烫伤的促愈作用
蚯蚓,又名地龙,是我国的传统中药.现代药理学研究和临床应用证明蚯蚓具有增强免疫、促愈合、抗血栓、降压、解热镇痛、抗癌和抑菌作用,目前对蚯蚓的研究主要集中在其纤溶活性~([1,2]).中医治疗中将活蚯蚓跟白糖匀浆后外用治疗烫伤一直是经典药方,效果明显.为了深入挖掘蚯蚓促烫伤愈合的药理活性,拓展其药用领域,笔者对蚯蚓进行了分离纯化,并研究了纯化后的蚯蚓蛋白(EFP)对大鼠成纤维细胞(NIH3T3)的促进增殖作用及促进大鼠深Ⅱ度烫伤的愈合作用.
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组织工程皮肤的应用研究
目前,人们对人工活性皮肤替代物(细胞工程或组织工程人工皮肤)的研究已进行了约半个世纪.将表皮细胞培养于经辐照的鼠成纤维细胞(Fb)滋养层,是组织工程皮肤治疗大面积烧伤的里程碑[1].由于培养基的改良与商品化,促使角质形成细胞的无血清层和无滋养层培养成功,结合早期切痂和应用临时皮肤覆盖物,无论多大面积的烧伤创面,理论上均可在伤后3~4周被覆盖,但现实情况距之甚远.