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抗氧化剂和糖皮质激素抑制缺氧／复氧时肾小球血管内皮细胞ICAM-1的表达
细胞间粘附分子-1(Intercellular adhesion molecule-l，ICAM-1)主要在内皮细 胞表达，作为白细胞β2整合素家族的配体在中性粒细胞与内皮细胞紧密结合和随后进入 缺血组织中起重要作用。通过降低ICAM-1的表达会减轻缺血／再灌注损伤，这点已在多个 脏器的动物实验中得到证实。已有研究发现糖皮质激素和抗氧化剂，能降低细胞因子刺激下 升高的ICAM-1，本研究旨在探讨抗氧化剂二硫代氨基甲酸吡 咯烷(pyrrolidine dithiocar bamate，PDTC)和糖皮质激素中的地塞米松(Dexamethasone，Dex)对缺氧／再给氧(hypoxia ／reoxygenation，H／R)条件下对体外肾小球血管内皮细胞ICAM-1表达的影响。1 材料与方法 (1)试剂 纯化抗鼠CD54单克隆抗体(IgG)和FITC标记抗鼠IgG二抗(深圳晶美生物工程有限 公司)，Dex和PDTC(美国SIGMA公司)，RPMI 1640细胞培养基(美国GIBCOBRL公司)，小牛血清 (杭州四季青生物公司)。 (2)细胞培养 小鼠肾小球血管内皮细胞株ESDO由长征医院肾内科提供。复苏后，加入 含20％灭活小牛血清的1640培养液，25 cm细胞培养瓶生长，待1～2 d细胞长满瓶底后，以1 08/L浓度接种传代。细胞存活率用台盼蓝染色判断。 (3)方法 向氧分压可调控的Queue细胞培养箱中注入95％的氮气和5％的CO2混合气体 ,使氧分压为零，为缺氧条件。注入空气和5％CO2混合气体为再给氧。缺氧时间为l0 h， 再给氧时间为6 h，PDTC的浓度为50 μmol/L、5 μmol/L，Dex为l00 μmol/L、1 μmo l /L，分别在缺氧前30 min和再给氧时加入。ICAM-1表达的测定：将生长成单层的内皮细 胞用0．2%EDTA在37℃消化l0 min，PBS洗涤后，调整浓度为108/L。取调整好的细胞悬液l 00 μl,加入CD54单克隆抗体20 μl，混匀后室温避光孵育30 min，加FITC标记IgG二抗2 μl 孵育30 min，PBS洗涤2次，固定。阴性对照以FITC标记的同型抗体代替。24 h内EPICS-XL 型流式细胞仪(美国Coulter公司产品)检测。每个样本分析5000个细胞，结果以阳性细胞的 百分率(％)表示。
