首页 > 文献资料
-
鼠尾胶原、多聚赖氨酸和明胶3种基质对角膜上皮细胞增殖的影响
目的 探讨鼠尾胶原、多聚赖氨酸和明胶3种基质对体外培养角膜上皮细胞增殖的影响.方法 采用鼠尾胶原、多聚赖氨酸和明胶作为基质包被培养器皿,以普通培养器皿作对照,培养角膜上皮细胞,观察细胞形态,进行细胞计数并描绘细胞生长曲线,比较不同基质对角膜上皮细胞的增殖作用.结果 使用基质包被的培养器皿培养角膜上皮细胞,细胞增殖速度较普通组快,细胞形态、活力和长势比普通组更佳,促进增殖的能力为鼠尾胶原＞多聚赖氨酸＞明胶.结论 鼠尾胶原可促进角膜上皮细胞增殖,且增殖效果优于多聚赖氨酸和明胶.
-
BMP2活性多肽/鼠尾Ⅰ型胶原复合物植入异位成骨的实验研究
用动物实验的方法验证鼠尾Ⅰ型胶原支架与自行研制合成的BMP2活性多肽复合后诱导异位成骨的能力与作用.自行提取鼠尾Ⅰ型胶原以及与BMP2活性多肽复合,冻干后低真空模式下电镜观察胶原结构.实验分2组.对照组:单纯鼠尾Ⅰ型胶原组;实验组:BMP2活性多肽/鼠尾Ⅰ型胶原复合物组.将12只大白鼠随机分成2组,每只大白鼠右侧大腿作2 cm的切口,制备股四头肌肌袋模型,将上述材料分别植入肌袋.术后第3周和第6周分别作放射学检查(X-ray,CT),第6周将所有大白鼠处死作组织学(HE染色)检查.鼠尾Ⅰ型胶原冻干后孔径大小合适与BMP2活性多肽复合后无明显改变.术后第3周和第6周放射学检查可见实验组有明显的钙化影形成,且第6周成骨范围要明显大于第3周时所见,而对照组无成骨现象.术后第6周组织学观察可见实验组植入区有成骨细胞和大量新骨形成,而对照组仅见炎性细胞改变.鼠尾Ⅰ型胶原是一种较好的载体支架材料,自行研制合成的BMP2活性多肽与其复合后,具有较强的异位诱导成骨能力.
-
鼠尾胶原为底物的人鼻腔纤毛上皮细胞培养模式的建立
目的 建立以鼠尾胶原为贴附底物的人鼻腔纤毛上皮细胞的体外培养模式,为人鼻腔黏液纤毛运输系统的研究提供科学有效的方法.方法 制备鼠尾胶原并铺片,以鼠尾胶原为贴附底物组织块培养法培养人鼻腔纤毛上皮细胞,培养7天时进行HE染色及扫描电镜和透射电镜观察细胞形态和结构,应用高速摄像技术测量纤毛摆动频率.结果 鼠尾胶原要平坦均匀,平均厚度约为1 mm;HE染色可见上皮细胞呈单层向周围爬开;扫描电镜下见纤毛上皮细胞呈不规则多角形,纤毛周围可见微绒毛;透射电镜下可见纤毛上皮细胞间为紧密连接;同一细胞任意两点纤毛摆动频率是相同的;同一来源体外培养的钩突和下鼻甲的纤毛摆动频率是相同的.结论 以鼠尾胶原为贴附底物人鼻腔纤毛上皮细胞的体外培养模式的成功建立,为今后研究鼻内用药对纤毛清除功能的影响提供了良好的方法和途径.
-
不同生长基质对神经干细胞分化为类毛细胞影响的实验研究
目的 探讨新生豚鼠海马神经干细胞在人工外淋巴液中分化为类毛细胞的佳生长条件.方法 将原代培养的新生豚鼠海马来源的神经干细胞进行体外培养(15%人工外淋巴液+DMEM/F12),分别接种于包被多聚赖氨酸和鼠尾胶原的盖玻片上使其分化,3周后对分化的细胞进行免疫荧光检测,分别计数产生表达毛细胞标记蛋白MvsionⅦa阳性细胞的比例.结果 神经干细胞在接种鼠尾胶原的盖玻片上生长,分化为MysionⅦa阳性细胞的比例为13.6%.但在接种多聚赖氨酸的盖玻片上生长,MvsionⅦa阳性细胞的比例仅为1.9%.结论 鼠尾胶原是适合新生豚鼠海马神经干细胞在人工外淋巴液中分化为表达毛细胞特异抗体细胞的生长基质.
-
两种不同基质对体外培养成骨细胞促贴壁生长的影响
目的 比较多聚赖氨酸(PoLy lysine PLL)与鼠尾胶原对成骨细胞体外培养生长的影响.方法 分别采用PLL和鼠尾胶原铺制培养皿,然后接种成骨细胞.于24 h、48 h、72 h镜下观察细胞形态及占培养皿面积的百分比.结果 24 h PLL组,细胞贴壁呈均匀分布状,贴壁面积比为(30.6±12.9)％；鼠尾胶原组细胞贴壁呈团状,贴壁面积比为(42.5±15.7)％,两者比较差异显著(P ＜0.05)；48 h PLL组,细胞呈均匀分布生长,贴壁面积比为(43.8±14.5)％；鼠尾胶原组,细胞团相互连接,生长面积比为(61.3±17.1)％,差异极显著(P ＜0.01)；72 h PLL组细胞相互连接生长面积比为(56.3±15.4)％；鼠尾胶原组,细胞连成片,生长面积比为(94.4±14.1)％,两者比较差异极显著(P＜0.01).结论 对体外培养成骨细胞鼠尾胶原促贴壁生长比PLL更为适宜.
关键词： 成骨细胞 多聚赖氨酸(PLL) 鼠尾胶原 贴壁 -
鼠尾胶原蛋白提取、分离、纯化方法的建立及鉴定
目的 建立一种高效提取、分离、纯化鼠尾胶原蛋白的方法.方法 通过对鼠尾进行剥离获得鼠尾腱,用Tris-HCl缓冲液、胃蛋白酶处理获得鼠尾胶原蛋白原液、反复使用氯化钠溶液进行分级盐析、醋酸溶液复溶进行鼠尾胶原蛋白的纯化.超纯水透析除去无机盐类获得纯化的鼠尾胶原蛋白.通过SDS-PAGE蛋白质电泳、氨基酸含量分析等技术手段鉴定.结果 本研究建立的方法可以获得高纯度的鼠尾胶原蛋白,纯度达到电泳纯.与国外进口的商业化鼠尾胶原蛋白产品相比无差异.研究了提取、分离、纯化参数对得率、纯度的影响,建立了优的鼠尾胶原蛋白提取条件,胃蛋白酶用量:1∶500,酶解时间:72 h,盐析浓度:2 mol/L,提取所用酸溶液:0.05 mol/L醋酸溶液.结论 为鼠尾胶原蛋白的扩大化生产提供了合适的工艺参数,为大量获得鼠尾胶原蛋白并进行更深层次的功效方面研究提供了理论支持和实践基础.
-
人胃癌原代细胞培养方法的探讨
目的 探讨一种经济、易行的人胃癌原代细胞培养的方法.方法 培养瓶瓶底用鼠尾胶原包被,放置经过处理的1 mm×1 mm×1 mm大小的人胃癌组织块数个,加入适量培养液使组织块底部刚好没入液体内,24小时换液一次,至大量肿瘤细胞培养出来.结果 肿瘤细胞在2天～3天后从组织块内爬出,呈半贴壁生长,并开始大量生长,蔓延至整个瓶底.结论 利用经济易行的方法对人胃癌新鲜标本进行原代细胞培养,可以得到存活的肿瘤细胞.
-
不同人参提取物对胶原诱导的血小板聚集的影响
为评价人参粗提取物及单体的药效活性,按比浊法进行血小板聚集测定,结果报告如下.1材料与方法1.1 试剂:Tyrode buffered的配置:137 mmol/L NaCl;0.3mmol/L Na2 HPO4;2 mmol/L KCl;12 mmol/L NaHCO3;0.35％牛血清;1 mmol/L CaCl2;5 mmol/L Hepes.诱导剂:胶原:鼠尾胶原( Sigma,1 mg/mL);麻醉剂:戊巴比妥钠(1％),30～40mg/kg.抗凝剂:枸橼酸钠(3.8％),血液和抗凝剂比例(9∶1).
-
鼠尾胶原联合血小板源性生长因子BB培养内皮细胞
背景：有研究证实，Ⅰ型鼠尾胶原可促进成肌纤维细胞的增加，对内皮细胞的迁移及成管有较为明显的作用，推断胶原可为细胞的生长提供一个较为合适的内环境。目的：探讨鼠尾胶原联合血小板源性生长因子BB抗人脐静脉内皮细胞凋亡的效果及安全性。方法：将第4代人脐静脉内皮细胞培养于铺有鼠尾胶原的培养皿上，用Alamar Blue法检测不同时间点的还原比率。将第4代人脐静脉内皮细胞分为4组培养于24孔板，其中生长因子组是在细胞接种前加入血小板源性生长因子BB蛋白于细胞悬浮液中；联合组需事先加入血小板源性生长因子BB蛋白于鼠尾胶中，铺于板底；后各组均使用H2O2诱导凋亡，73 h后采用Western blot测定血小板源性生长因子BB、凋亡相关蛋白及抗凋亡蛋白的表达，同时Tunnel检测细胞凋亡阳性率。结果与结论：在铺有鼠尾胶原培养皿中培养人脐静脉内皮细胞的成管数量明显多于正常培养人脐静脉内皮细胞的成管数量(P <0.05)。鼠尾胶原培养的细胞与正常对照细胞生长状态相似，说明鼠尾胶原对细胞无明显毒性作用。联合组血小板源性生长因子BB、Bcl-2、p-Akt表达高于其余3组(P <0.05)，Bax表达低于其余3组(P <0.05)。联合组细胞凋亡率低于生长因子组、H2O2组(P <0.05)。表明鼠尾胶原对人脐静脉内皮细胞无明显毒性作用，联合血小板源性生长因子BB生长因子后可显著增强抗细胞凋亡效果。
-
鼠尾胶原在心肌细胞氧化损伤中的保护作用
背景：胶原蛋白具有抗氧化作用，但既往在实验室主要将鼠尾胶原用于促进细胞贴壁和支架构建，对于其抗氧化作用目前尚无相关研究。
目的：探讨鼠尾胶原对过氧化氢导致离体心肌细胞氧化损伤的保护作用。
方法：将原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机接种到铺有鼠尾胶原的培养皿(实验组)和普通培养皿(对照组)中，并且均用0，10，100μmol/L H2O2诱导。24 h后，以电子显微镜观察各组乳鼠心肌细胞的形态，应用MTT 比色法检测心肌细胞存活率，TUNEL 法检测心肌细胞凋亡形态，流式细胞技术检测心肌细胞凋亡率，黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶活力，硫代巴比妥比色法检测丙二醛水平，Western-Blot 检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达。
结果与结论：两组培养皿中，随着过氧化氢浓度的增高，均可见细胞凋亡状态明显加重，细胞存活率及细胞内过氧化氢活力明显下降，细胞凋亡率及细胞内丙二醛水平明显增高，Bcl-2/Bax比值显著降低，呈剂量依赖性。而在相同浓度过氧化氢诱导下，与对照组相比，实验组细胞凋亡状态明显减弱，细胞存活率、超氧化物歧化酶活力及Bcl-2/Bax比值增高，细胞凋亡率和丙二醛水平明显减低。表明鼠尾胶原对过氧化氢所致的心肌细胞氧化损伤具有保护作用，其机制可能与提高超氧化物歧化酶活力，减少丙二醛产生及提高Bcl-2的表达有关。 -
鼠尾胶原建立胶滴肿瘤药敏检测方法的初步研究
目的:用鼠尾胶原建立胶滴肿瘤药敏检测方法(CD-DST),探讨此方法在体外药物敏感性检测中的可行性.方法:建立Hela细胞在鼠尾胶原中培养的三维立体模型;在此基础上进行药物敏感性检测,用MTT、CD-DST两种药敏检测方法检测Hela细胞对4种化疗药物的敏感性.结果:Hela细胞在鼠尾胶原凝胶滴中生长良好,呈克隆样增殖、放射状生长;两种药敏检测方法有较好的一致性.结论:用鼠尾胶原建立的CD-DST技术是可行的,在体外药敏检测中具有一定的临床应用价值.
-
不同细胞外基质对晚期内皮祖细胞功能特征的影响
本文旨在探讨不同细胞外基质(extracellular matrix,ECM)对大鼠骨髓来源的晚期内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)生物学特性的影响.密度梯度离心法分离大鼠骨髓单核细胞,应用M199完全培养基进行体外培养,培养基中添加15％胎牛血清、10μg/L血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及5μg/L碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF).在接种细胞前,培养板分别用纤维粘连蛋白(fibronectin,Fn)、层粘连蛋白(laminin,Ln)或鼠尾胶原(collagen,Col)包被,定义为Fn组、Ln组及Col组.传至第三代EPCs(晚期EPCs)时,采用CCK-8法、EdU标记法、粘附能力测定实验、划痕实验及Matrigel法分别检测细胞增殖、粘附、迁移及血管形成情况；应用荧光定量RT-PCR检测内皮分化标志基因vWF和CD31的表达；应用流式细胞术检测细胞凋亡.结果显示,Fn组和Col组细胞增殖能力强于Ln组；Fn组细胞粘附能力强于Col组和Ln组；Fn组和Col组细胞迁移能力强于Ln组(P＜ 0.05); Fn组血管形成能力强于Col组及Ln组(P＜0.05);Ln组血清饥饿所诱导的细胞凋亡率大于Fn组和Col组(P＜0.01),但三组vWF和CD31基因表达及自发凋亡之间均无明显差异.以上结果表明,EPCs的生物学特性受ECM的影响,这将为人工心、血管的ECM血管支架材料选择方面提供一定的参考依据.
-
鼠尾胶原在原代培养耳蜗血管纹边缘细胞中的应用
目的:建立利用自制的鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法.方法:制作鼠尾胶原,并观察利用自制的鼠尾胶原所培养出大鼠耳蜗边缘细胞的效果.结果:自制的鼠尾胶原能正常地培养出大鼠耳蜗边缘细胞,细胞角蛋白18表达阳性,免疫组织化学结果和扫描电镜证实所培养的细胞具有典型的分泌上皮细胞特征.结论:成功建立了利用自制鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法,并且制作简便,成本低廉.
-
鼠尾胶原对过氧化氢所致体外心肌细胞氧化损伤的影响
目的：探讨鼠尾胶原对过氧化氢导致的离体心肌细胞氧化损伤的保护作用。方法：原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机接种到铺有鼠尾胶原的培养皿和普通培养皿中，均用0uM、100uM、200uM和300uM H2O2诱导。24h后，通过电子显微镜观察各组乳鼠心肌细胞的形态，应用MTT比色法检测心肌细胞存活率，TUNEL法检测心肌细胞凋亡形态，流式细胞技术检测心肌细胞凋亡率， Western-Blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果：铺有鼠尾胶原的培养皿和普通培养皿中，随着H2O2浓度的增高，电子显微镜下可观察到细胞凋亡状态明显加重，细胞存活率明显下降，细胞凋亡率明显增高，Bcl-2/Bax比值显著降低。而在相同浓度H2O2诱导的鼠尾胶原组与普通组中，铺有鼠尾胶原培养皿培养的细胞凋亡状态较普通培养皿培养的细胞明显减弱，且细胞存活率及Bcl-2/Bax比值增高，细胞凋亡率减低。结论：鼠尾胶原对过氧化氢所致的心肌细胞氧化损伤具有保护作用。
关键词： 鼠尾胶原 I型胶原蛋白心肌细胞 氧化应激 过氧化氢 -
以鼠尾胶原为支架的真皮类似物的建立
目的:探寻建立真皮类似物的培养方法.方法:原代培养人皮肤成纤维细胞,制备鼠尾胶原,将鼠尾胶原溶液、浓缩培养基、NaOH溶液和以血清重悬的成纤维细胞溶液在适当的比例下混合后形成凝胶构建真皮类似物.结果:形成的真皮类似物中成纤维细胞生长状态良好,并且组织块具有一定弹性和抗拉伸能力.结论:①利用鼠尾胶原可以构建真皮类似物,该模型是进行皮关键与基础;②成纤维细胞胶原凝胶复合物有着良好的生物学特性,它是研究成纤维细胞与细胞肤器官型培养和制作复合皮的外基质之间以及细胞之间相互作用的良好模型.
-
鼠尾胶原在培养鼠下切牙颈环上皮细胞中的应用
目的: 建立用自制鼠尾胶原为贴附底物的大鼠颈环上皮细胞的体外培养模式.方法: 制作鼠尾胶原,观察用自制的鼠尾胶原培养出大鼠颈环上皮细胞的效果,并对纯化的上皮细胞进行免疫组织化学染色鉴定.结果: 自制的鼠尾胶原能正常地培养出大鼠颈环上皮细胞,呈多角形,克隆状生长,β1整合素和角蛋白免疫组织化学染色阳性.结论: 鼠尾胶原可作大鼠颈环上皮细胞的体外培养贴附底物,为今后研究牙齿发育机制提供简便的方法和途径.
-
鼠尾胶原蛋白海绵止血作用研究
目的 制备一种高纯度的鼠尾胶原蛋白海绵,研究鼠尾胶原海绵的止血作用.方法 用制备的鼠尾胶原蛋白海绵对新西兰兔耳缘静脉、耳缘动脉、肝脏、股动脉创面止血,观察其止血时间、敷料与创面的黏合情况、再出血、渗血和吸收及伤口愈合情况.结果 鼠尾胶原海绵组、胶原蛋白海绵组耳缘动脉、肝脏、股动脉创面止血时间与对照组比较明显缩短,差异有统计学意义(P<0.05);同时,鼠尾胶原海绵组在肝脏、股动脉创面止血时间比胶原蛋白海绵组缩短,差异有统计学意义(P<0.05).鼠尾胶原蛋白海绵在对创面的修复性能上优于胶原蛋白.结论 鼠尾胶原蛋白及其冻干海绵可以作为人工皮肤及创伤敷料研究的首选材料,同时也为鼠尾胶原蛋白海绵用于止血、创面修复及进一步研究其止血机制提供事实依据.
