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香烟烟雾提取物对小鼠精子活力的影响
目的 探讨香烟烟雾中所含外源活性氧物质(ROS)对小鼠精子活力的影响. 方法 香烟燃点后烟雾溶于二甲亚砜,配制成高ROS含量的香烟烟雾浓缩物(CSC).采用4周龄C57BL/6J小鼠45只,实验设置对照组(0 mg/ml CSC)、低剂量组(0.2 mg/ml CSC)和高剂量组(2.0 mg/ml CSC).连续饲喂含有CSC的饮用水4周,观察小鼠的生殖系统发育情况和可能的全身毒性反应,并检测肝功能指标.处死小鼠后即刻检测精子浓度和活力,检测睾丸内抗氧化酶类的表达水平,并制片观察睾丸组织病理变化. 结果 与对照组相比,低剂量和高剂量组小鼠精子浓度无显著变化,但高剂量组精子活力呈现显著下降.CSC低剂量组和高剂量组小鼠连续饲喂4周后精子总活动力分别为32％和19％,A级活动精子分别为13％和12％,均显著低于对照组(61％和24％)(P＜0.05).但在本实验剂量范围内,CSC对小鼠发育和生殖系统无明显毒性损伤,对睾丸抗氧化基因表达无显著影响. 结论 CSC对小鼠精子活力有显著影响,但是对小鼠全身和生殖系统无明显毒性作用.CSC饲喂法可推荐用于诱导小鼠弱精子症模型.
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香烟烟雾提取物致小鼠生殖细胞的遗传学损伤及其机制
吸烟与许多疾病有关[1],但其对遗传或生殖损害研究报道尚少.香烟烟雾提取物可致小鼠生殖细胞染色体损伤[2],但该作用是否可能遗传给后代或影响生殖细胞的功能尚未见报道.香烟烟雾中含有许多自由基,而自由基可致DNA损伤[3].
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淫羊藿苷对香烟烟雾提取物诱导上皮细胞炎症的保护作用
目的:探讨淫羊藿苷对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的上皮细胞炎症的影响.方法:CSE刺激SD乳鼠肺泡上皮细胞(ATⅡ)建立细胞模型.细胞分6组:对照组、CSE组、PDTC[核因子KappaB(NF-κB)抑制剂]组、淫羊藿苷低(40μ g/mL)、中(80μg/mL)和高(160μ g/mL)剂量组.改良巴氏染色和电镜鉴定ATⅡ细胞；CCK-8法检测药物对细胞增殖的影响；ELISA法检测细胞上清液中细胞因子含量；蛋白质印迹法检测I Kappa B-α(IκB-α)和P-p65磷酸化水平；凝胶迁移实验(EMSA)检测NF-κB的DNA结合活力.结果:分离培养的细胞巴氏染色阳性；淫羊藿苷各组均未显示出细胞毒性,CSE对ATⅡ细胞呈现出时间和浓度依赖性抑制；CSE组细胞上清液中白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-6 (IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)较对照组显著性升高(P＜0.05),IL-10显著性降低(P＜0.05),淫羊藿苷组随着剂量增高IL-8、IL-6、TNF-α表达逐渐降低,IL-10表达增加.经CSE诱导后,P-p65蛋白表达较对照组增加(P＜0.05),IκB-α则减少(P＜0.05)；淫羊藿苷干预后,P-p65表达减少(P＜0.05),IκB-α增多(P＜0.05).对照组NF-κB的DNA结合活力较弱,CSE组显著性增强(P＜0.05),淫羊藿苷干预后减弱(P＜0.05).结论:淫羊藿苷抑制CSE诱导的ATⅡ细胞IL-8、IL-6、TNF-α表达和NF-κB活化,促进IL-10表达.
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调补肺肾三法对香烟烟雾提取物和脂多糖刺激单核巨噬细胞THP-1分泌细胞因子的影响
目的 探讨调补肺肾三法治疗慢性阻塞性肺疾病的分子机理. 方法 用香烟烟雾提取物(CSE)和脂多糖(LPS)及两者联合(LC)体外刺激单核巨噬细胞THP-1,每种刺激物下分为正常组(加入20％正常大鼠血清)、刺激物组(加入20％正常大鼠血清和5％CSE,或75pg/ml LPS,或5％CSE和75pg/ml LPS)、补肺益肾组、补肺健脾组和益气滋肾组(加20％相应方药大鼠含药血清和5％CSE,或75pg/ml LPS,或5％CSE和75pg/ml LPS),检测各组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-3(IL 3)、巨噬细胞-粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)、转化生长因子-β(TGF-β)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)、超氧化物歧化酶(SOD)、CD36、磷脂酸磷酸酶2B(PPAP2B),应用网络工具分析细胞因子的转录因子.结果 与正常组比较,CSE组、LPS组和LC组分泌MMP-9增加,分泌TNF-α和PPAP2B减少；CSE组分泌TIMP-1减少,LPS组分泌TGF-β增加,LC组GM-CSF分泌增加(P＜0.05或P＜0.01).3个复方对细胞分泌的各因子调节明显不同(P＜0.05或P＜0.01),其中补益肺肾方在各条件下,所调节分泌的因子和涉及转录因子较为广泛. 结论 CSE和LPS对THP-1分泌细胞因子影响不同,调补肺肾三法在一定程度上都对CSE和LPS刺激下分泌细胞因子有调控作用,补益肺肾方药作用明显而广泛,补肺健脾方次之.
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N-乙酰半胱氨酸减轻香烟烟雾提取物所致的A549细胞损伤
目的 研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对香烟烟雾提取物(CSE)暴露后的A549细胞的影响.方法 MTT法测定不同处理后A549细胞的存活率;用PI单染和AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞的周期变化和凋亡变化;用荧光探针H2DCFDA检测细胞内活性氧簇(ROS)变化;用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)的表达变化.结果 CSE致A549细胞存活的A值为0.55 ±0.04,显著低于对照组的0.78±0.03(P＜0.05),NAC处理使A值显著上升至0.67±0.04(P ＜0.05),并消除了G1期阻滞,降低细胞凋亡率等.IGFBP-3的表达在CSE刺激后,有所升高,在接受NAC保护后,其表达水平有所降低(P＜0.05).结论 NAC可以抑制香烟烟雾提取物造成的A549细胞损伤,IGFBP-3可能在香烟烟雾提取导致细胞损伤的机制中发挥作用.
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香烟烟雾提取物致体外皮肤成纤维细胞损伤和对胶原合成的影响
目的 探讨香烟烟雾提取物(CSE)对体外培养的皮肤成纤维细胞的损伤作用,观察CSE对成纤维细胞Ⅰ型胶原合成的影响作用.方法 在光镜下观察染毒后细胞形态和结构的变化;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度的CSE在不同的时间对体外皮肤成纤维细胞存活力的影响,并绘制不同浓度下细胞的生长曲线;β-半乳糖苷酶染色方法检测CSE连续作用5代后成纤维细胞β-半乳糖苷酶的变化情况;流式细胞仪检测不同浓度的CSE作用下和不同染毒时间的细胞周期变化情况;RT-PCR检测不同浓度的CSE对成纤维细胞Ⅰ型前胶原mRNA表达的影响.结果 染毒后光镜下呈典型的损伤细胞形态;随着CSE染毒浓度的增大和时间的延长,细胞存活力明显下降;细胞生长曲线示各染毒组细胞生长速度较对照组明显减慢;染毒后细胞经5次传代后β-半乳糖苷酶染色呈明显的阳性,对照组染色为阴性;细胞周期动力学显示,随着作用浓度的增加和作用时间的延长,G1、G2期细胞数增加,S期细胞数减少;CSE作用后,成纤维细胞的Ⅰ型前胶原mRNA表达降低.结论 CSE对体外成纤维细胞具有明显的损伤作用,对细胞的增殖和生长有一定的抑制作用;低浓度CSE长期作用的积累,使多次传代的成纤维细胞具有衰老细胞的特点;CSE能够抑制细胞活性,引起细胞DNA复制和有丝分裂障碍,对各期有不同程度的阻滞.CSE对成纤维细胞的胶原合成有一定抑制作用.
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香烟烟雾提取物致Th17/Treg的失衡在慢性阻塞性肺疾病发生发展中的作用与意义
目的：观察慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者外周血中Th17细胞、Treg细胞占CD4+T细胞的比例及香烟烟雾提取物（CSE）对其的影响，探讨CSE对Th17细胞、Treg细胞的影响及Th17/Treg的平衡关系在COPD发生发展中的作用。方法随机收集慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）患者20例（A组），COPD稳定期患者20例（B组），吸烟肺功能正常者20例（C组），不吸烟肺功能正常者20例（D组）。抽取空腹静脉血制备单个核细胞悬液（PBMC），将每个试验对象的PBMC分为空白对照组和CSE干预组，采用流式细胞术检测所有试验对象对照组和干预组CD4+Th17细胞及CD4+Treg细胞各占CD4+T细胞的比例；ELISA法检测各组血浆中IL-17的浓度。结果 Th17/CD4+T细胞百分比对照组A组（5.33±0.66）高于B组（2.99±0.50）、C组（2.09±0.68）、D组（1.19±0.48）（P＜0.001），CSE干预组较对照组升高（P＜0.001）； Treg/CD4+T细胞百分比对照组C组（5.88±0.52）高于D组（3.35±0.30）、B组（2.25±0.30）、A组（1.58±0.39）（P＜0.001），CSE干预组较对照组升高（P＜0.001）；CD4+ Th17细胞百分比对照组与CSE干预组差值A、B组高于C、D组（P＜0.001），A组与B组之间差异无统计学意义（P＝0.866），C组与D组之间差异无统计学意义（P＝0.793）；CD4+Treg细胞百分比对照组与CSE干预组差值C、D组高于B组、A组（P＜0.001）， C组与D组之间差异无统计学意义（P＝0.756）；外周血IL-17水平A组（145.22±5.50）高于B组（94.99±3.19）、C组（59.77±5.09）、D组（50.84±5.85）（P＜0.001）；COPD组血浆中IL-17的水平与外周血Th17细胞比例呈正相关（rA＝0.524，rB＝0.462）；与FEV1/FVC值呈负相关（rA＝-0.456， rB＝-0.567）；与FEV1/预计值%呈负相关（rA＝-0.503，rB＝-0.445）。结论 Th17与Treg比例的失衡可能是COPD的其中一个重要的发病机制；外周血IL-17水平与FEV1/FVC值、FEV1/预计值%呈负相关。
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羟基红花黄色素A对香烟提取物诱导A549细胞炎症因子表达作用的研究
目的:探讨羟基红花黄色素A(HSYA)抑制香烟烟雾提取物(CSE)诱导的A549肺泡上皮细胞炎症介质表达升高的作用.方法:用CSE刺激A549肺泡上皮细胞建立损伤模型,细胞分七组:单纯HSYA组、Sham组、CSE组、CSE+ HSYA低剂量组(1μmol/L)、CSE+ HSYA中剂量组(4μmoL/L)、CSE+ HSYA高剂量组(16μmol/L)和CSE+阳性对照药红霉素(5μg/mL)组.以RT-qPCR技术检测白介素(IL)-6、白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、细胞间黏附分子(ICAM)-1和血管细胞黏附分子(VCAM)-1 mRNA的表达水平;ELISA法检测细胞培养液中IL-6、IL-1β及TNF-α的蛋白水平表达;蛋白质印迹法(westem blot)检测细胞p38MAPK磷酸化的水平.结果:与Sham组相比,CSE组IL-6、IL-13、TNF-α、ICAM-1和VCAM-1 mRNA水平均明显升高(P ＜0.001),给予不同浓度的HSYA后炎症因子的高表达受到抑制,红霉素组也见较明显的抑制.与Sham组相比,CSE组细胞上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α蛋白的表达水平明显升高(P＜0.001),给予不同浓度的HSYA后CSE所诱发的炎症因子的高表达受到抑制,红霉素组也见较明显的抑制.与Sham组比较,CSE组的p38 MAPK的磷酸化水平明显升高(P＜0.001),给予不同浓度的HSYA后细胞p38 MAPK的磷酸化水平升高受到抑制,红霉素组也可见明显的抑制.结论:HSYA可抑制CSE诱导A549细胞的炎症因子的表达升高.
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香烟烟雾提取物对人胚肺成纤维细胞增殖及转化生长因子β1、表皮生长因子表达的影响
目的观察香烟烟雾提取物(CSE)对人胚肺成纤维细胞(HELF)增殖及转化生长因子β1(TGF-β1 )、表皮生长因子(EGF)表达的影响. 方法用含不同浓度CSE[分别为1∶ 50(CSE1组)、1∶ 25(CSE2组)和1∶ 10(CSE3组)倍稀释]的培养基作用于体外培养的HELF,对照组(C组)不含CSE.观察不同浓度的CSE对细胞增殖及增殖细胞核抗原(PCNA)水平的影响.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组细胞TGF-β1 mRNA表达量.用免疫组织化学方法检测各组细胞TGF-β1和EGF蛋白的表达量. 结果经CSE作用后,随着CSE浓度的增高,HELF增殖呈逐渐减弱的趋势,PCNA表达阳性率在CSE1组为26.94%、CSE2组为20.06%、CSE3组为11.07%,均比C组(36.05%)明显下降(P＜0.05).RT-PCR和免疫组织化学染色结果发现:低浓度的CSE(1∶ 50和1∶ 25)使HELF的 TGF-β1mRNA及蛋白表达明显增强,与C组比较差异有显著性意义(P＜0.05).免疫组织化学染色显示:较高浓度的CSE(1∶ 25和1∶ 10)可引起HELF的 EGF蛋白表达减弱,与C组比较差异有显著性(P＜0.05). 结论 CSE可抑制HELF的增殖,其抑制作用可能与TGFβ1及EGF表达的失调有关.
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香烟烟雾提取物影响肺泡上皮细胞谷胱甘肽和γ谷氨酰半胱氨酸合成酶的表达
香烟中含有大量的氧化剂,吸烟可导致肺内氧化/抗氧化失衡,并终导致慢性阻塞性肺疾病(COPD).谷胱甘肽(GSH)是肺内一种重要的抗氧化剂,在氧化剂介导的肺部炎症和肺损伤中起着重要的防御作用.本组研究系统观察香烟烟雾提取物(CSC)对大鼠肺泡上皮细胞(CCL149)GSH及其合成限速酶γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的影响,旨在深入探讨吸烟引起慢性气道炎症的机制.
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γ连环素在小鼠气道上皮细胞中的表达
γ连环素(γ-cat)是实质细胞粘附连接和桥粒的组成成分,在维持上皮极性和完整性过程中发挥着重要作用.我们的实验采用免疫组织化学、原位杂交及图像分析法研究小鼠吸烟动物模型及香烟烟雾提取物(CSE)作用的猪气道上皮细胞(AEC)中γ-cat表达的动态变化,探讨其在气道上皮细胞损伤中的作用.
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低压低氧环境对肺气肿大鼠肺组织结构的影响
目的 探讨低压低氧对肺气肿大鼠肺组织结构的影响.方法 选择40只Wistar雄性大鼠随机分为中海拔(海拔2 260 m)空白对照组、盐水组、肺气肿组及高海拔(低压氧舱模拟海拔5000m)盐水组、肺气肿组,每组8只.盐水组及肺气肿组分别腹腔内注射0.8 ml盐水及香烟烟雾提取物(CSE),每周一次,连续四周.第32天活杀小鼠取缔组织肺组织病理切片苏木素-伊红染色(HE)后,测定不同海拔高度大鼠的平均内衬间隔(MLI)、肺泡破坏指数(DI)、单个肺泡面积(APA)及单位面积肺泡数(DPA).结果 4周后中、高海拔肺气肿组大鼠肺组织呈现肺气肿病理改变.高海拔肺气肿组MLI[(226.61±27.51)μm]、DI[(73.98±6.97)％]、APA[(10 606.83±923.05) μm2]明显高于中海拔肺气肿组,DPA[(88.84±5.67)/mm2]明显低于中海拔肺气肿组(均P＜0.05);高海拔盐水组MLI[(193.13±24.66) μm]、DI[(57.64±6.72)％]、APA[(5 399.42±1 058.47) μm2]明显高于中海拔盐水组,DPA[(182.11 ±39.79)/mm2]明显低于中海拔盐水组(均P＜0.05).结论 低压低氧环境可加重肺气肿大鼠肺组织结构的破坏.
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香烟烟雾提取物对成纤维细胞Fibulins家族的影响及黄芪甲苷干预作用
目的 探索吸烟对皮肤成纤维细胞Fibulins家族的影响以及黄芪甲苷的干预作用.方法 在光镜下观察香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)染毒后成纤维细胞形态变化；采用MTr比色法检测不同浓度的CSE对成纤维细胞存活力的影响及黄芪甲苷(AST)干预后其存活力的变化；荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测成纤维细胞中Fibulin-3,Fibulin-4,Fibulin-5在CSE处理及加入AST干预后的表达变化.结果 光镜下可见CSE染毒后的成纤维细胞失去正常形态；MTT结果显示,CSE对体外培养的成纤维细胞有显著的抑制作用,其抑制率呈剂量依赖性；向CSE染毒后的成纤维细胞加入黄芪甲苷,可使其增殖率升高,且呈现剂量依赖性,在100 mg/L浓度时促进增殖活性强；荧光定量PCR结果显示,CSE处理后Fibulin-3,Fibulin-4,Fibulin-5的mRNA表达水平明显降低,加入黄芪甲苷干预后表达上升(P＜0.05).结论 吸烟可通过影响Fibulins家族的表达引起弹力纤维组装的异常,造成弹性组织变性,而黄芪甲苷对其有逆转性保护作用.
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香烟烟雾提取物对小鼠C2C12细胞myostatin及炎症介质的影响
目的 探讨香烟烟雾提取物(CSE)对小鼠C2C12细胞肌肉生长抑制素(myostatin)及炎症介质的影响.方法 不同浓度CSE和(或)myostatin-siRNA刺激和(或)干扰小鼠C2C12细胞后利用MTT检测CSE对细胞生长的影响,根据处理方式不同,实验分为4个组,分别为对照组、5％ CSE组、myostatin-siRNA组、5％ CSE+myostatinsiRNA组,采用Real-time PCR检测myostatin mRNA表达情况,采用Western blot检测myostatin蛋白表达情况,采用ELISA检测细胞培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素8(IL-8)含量.结果 5％以上的CSE处理能显著抑制小鼠C2C12细胞增殖(P＜0.05);5％的CSE处理小鼠C2C12细胞48 h后,myostatin mRNA和蛋白表达明显高于对照组(P＜0.05),细胞培养液中IL-8和TNF-α含量明显高于对照组(P＜0.05);siRNA干扰myostatin 后再采用CSE处理小鼠C2C 12细胞,细胞培养液中IL-8和TNF-α含量明显低于CSE处理组(P＜0.05).结论 CSE上调小鼠C2C12细胞myostatin表达,增加炎症介质释放.
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香烟烟雾提取物对肺上皮影响的研究进展
香烟烟雾中含有多种化学成分，绝大部分有致癌作用，能增加罹患肺癌的风险。除此之外，大量的研究表明，吸烟可诱导细胞凋亡、氧化应激、促炎症反应等，是慢性阻塞性肺疾病发病的主要影响因素，可见吸烟对肺功能有直接的影响。研究香烟烟雾对肺上皮的影响可从细胞水平或分子水平上揭示各种肺部疾病的发病机制，从而为疾病的预防和治疗奠定基础。
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香烟烟雾对慢性阻塞性肺疾病患者单核细胞源性巨噬细胞吞噬功能的影响
目的 探讨香烟烟雾提取物(CSE)对慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)患者单核细胞源性巨噬细胞(MDM)吞噬功能的影响.方法 选择2012年1月至2013年3月兰州大学第一医院慢阻肺稳定期患者32例,选择同期健康体检者32名,分离外周血单核细胞,体外诱导培养成MDM.分别将慢阻肺患者和健康体检者的MDM分为慢阻肺非CSE组(常规培养)、慢阻肺CSE组(4％ CSE干预6h)、健康非CSE组(常规培养)、健康CSE组(4％ CSE干预6h).以流式细胞术的平均荧光强度和激光共聚焦显微镜的荧光灰度值判断MDM吞噬荧光标记大肠杆菌(FITC-E.coli的能力,菲罗啉比色法检测细胞上清液总抗氧化能力(TAC),硫代巴比妥酸比色法检测丙二醛含量,改良Hafeman直接测定法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力.结果 平均荧光强度、荧光灰度值:慢阻肺非CSE组(20.2±2.2、51.5±5.8)显著低于健康非CSE组(56.9±6.7、87.3 ±7.3),慢阻肺CSE组(7.6±0.7、14.1 ±3.4)和健康CSE组(48.0±5.4、69.7±6.0)分别显著低于慢阻肺非CSE组和健康非CSE组(均P＜0.01).TAC、GSH-PX水平:慢阻肺非CSE组[(4.1±0.5)、(47.1±4.1)U/ml]显著低于健康非CSE组[(5.1±0.6)、(88.4 ±2.3)U/ml],慢阻肺CSE组和健康CSE组[(3.1±0.4)、(26.8±6.2) U/ml和(4.5±0.4)、(72.3±5.1) U/ml]分别显著低于慢阻肺非CSE组和健康非CSE组(均P＜0.01).丙二醛水平:慢阻肺非CSE组[(4.8 ±0.5)μmol/L]显著高于健康非CSE组[(2.1±0.4)μmol/L],慢阻肺CSE组和健康CSE组[(7.7±0.9)和(3.0±0.6) μmol/L]分别显著高于慢阻肺非CSE组和健康非CSE组(均P＜0.01).慢阻肺组平均荧光强度在基础状态下与TAC、GSH-PX水平呈正相关(r =0.523、0.818,P=0.038、0.001),与丙二醛水平呈负相关(r=-0.501,P=0.048),CSE干预后上述相关关系依然存在(r=0.704、0.716、-0.522,P=0.002、0.002、0.038).结论 香烟烟雾可导致慢性肺患者MDM吞噬能力下降,这可能与氧化应激密切相关.
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香烟烟雾提取物对猪气道上皮细胞β-连环素及酪氨酸磷酸化的影响
据<中华医学杂志>2001年4月81卷第7期报道华中科技大学同济医院病理学教研室陈芳等教授,为观察香烟烟雾提取物(CSE)和酪氨酸激酶抑制剂(tyrophostin 25)对气道上皮细胞(AEC)酪氨酸磷化程度、细胞Src蛋白(c-Src)及β-连环素(β-cat)表达的影响,探讨细胞酪氨酸磷酸化程度及β-cat在吸烟致AEC损伤和修复中的作用及调控机制,体外培养猪AEC,将培养细胞分成3组:N组加无血清培养基,C组在无血清培养基上分别加CSE,CT组加tyrophostin 25及CSE.
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香烟烟雾影响肺细胞分泌IL-1、IL-6、IL-8水平的体内外研究
目的 研究香烟对肺部炎性介质IL-1、IL-6、IL-8分泌的影响。方法 制备香炯烟雾提取物(CSE)，用不同浓度的CSE(10％～100％)刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞A549,以放射免疫法检测细胞培养上清液中IL-1、IL-6、II-8的水平。用不同吸烟剂量（低、中、高剂量组分别每天吸烟4、8、16支）制备动物吸烟模型，采用自主开发的吸烟机给烟12周，以放免法检测肺灌洗液(BALF)中IL-1、IL-6、IL-8的水平。结果 各浓度CSE组IL-1水平与对照组相比，差异无统计学意义(P＞0.05),20％、50％、1 00％ CSE组IL-6的水平明显升高,IL-8的水平下降，差异有统计学意义（P＜0.05）；各吸烟剂量组IL-1的水平与对照组相比，差异无统计学意义（P＞0.05），低、中、高剂量组IL-6、IL-8的水平显著升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 香烟会影响肺部炎性介质IL-6、IL-8的分泌。
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基质金属蛋白酶-9参与吸烟所致气道黏液高分泌的信号转导通路
目的 研究基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在香烟所致气道黏液高分泌中的作用及其信号转导机制.方法 培养人气道BEAS-2B上皮细胞系,分别给予香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)和外源性表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)刺激,以MMP-9抑制剂Ⅰ(MMP-9inhibitorⅠ)为干预因素.采用RT-PCR检测黏蛋白(mucin,MUC)5ACmRNA,以Western blot检测MMP-9蛋白及磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)蛋白含量,以ELISA检测MUC5AC蛋白及EGF蛋白含量,以明胶酶谱法测定细胞上清液中MMP-9活力.结果 以5%,10%,20%CSE染毒后,MUC5AC的基因转录和MUC5AC蛋白含量显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.01),且呈现与CSE染毒浓度相关的趋势;同时,10%,20%CSE染毒组伴有MMP-9蛋白含量及MMP-9明胶酶活力增高,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).20%CSE染毒能增加EGF蛋白、p-EGFR蛋白、MUC5AC蛋白含量及MUC5AC的基因转录,MMP-9inhibitorⅠ能显著下调CSE染毒引起的上述变化,与单纯CSE染毒组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),但MMP-9 inhibitorⅠ不能下调外源性EGF刺激引起的p-EGFR蛋白、MUC5AC蛋白含量和MUC5AC基因转录水平增加的效应(P＞0.05).结论 在香烟所致气道黏液高分泌过程中,MMP-9能水解产生可溶性EGF,后者结合并磷酸化EGFR,从而启动下游信号通路,增加MUC5AC基因转录和蛋白产物生成.
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阿奇霉素与罗红霉素对香烟烟雾提取物诱导A549细胞 IL －8，IL －10和 TGF －β1的影响
目的：探究阿奇霉素与罗红霉素对香烟烟雾提取物（ CSE）诱导A549细胞白细胞介素（IL）－8，IL－10和转化生长因子－β1（TGF－β1）的影响。方法实验分为空白对照组（无血清的DMEM）、CSE组（浓度10％CSE）、10％CSE＋阿奇霉素组（0．1 mg／mL阿奇霉素预处理2 h后加入浓度10％CSE）、10％CSE＋罗红霉素组（0．1 mg／mL罗红霉素预处理2 h后加入浓度10％CSE），将培养好A549细胞分别滴入上述培养皿，应用倒置显微镜观察不同时间段细胞形态变化，酶联免疫法（ ELISA）检测各组IL－8，IL－10和TGF－β1水平。结果CSE组IL－8及TGF－β1水平在9 h前呈增长趋势，IL－10在3 h后逐渐降低。10％CSE＋阿奇霉素组和10％CSE＋罗红霉素组IL－8及TGF－β1在3 h后均降低，且10％CSE＋阿奇霉素组降低更明显；在3 h后2组IL－10水平均逐渐增高，但2组比较差异无统计学意义。空白对照组IL－8、IL－10及TGF－β1水平变化不明显。结论从抑制炎症递质失控性释放的角度出发，推断治疗慢性肺部炎性疾病时，阿奇霉素较罗红霉素效果显著。
