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羟基红花黄色素A对香烟提取物诱导A549细胞炎症因子表达作用的研究
目的:探讨羟基红花黄色素A(HSYA)抑制香烟烟雾提取物(CSE)诱导的A549肺泡上皮细胞炎症介质表达升高的作用.方法:用CSE刺激A549肺泡上皮细胞建立损伤模型,细胞分七组:单纯HSYA组、Sham组、CSE组、CSE+ HSYA低剂量组(1μmol/L)、CSE+ HSYA中剂量组(4μmoL/L)、CSE+ HSYA高剂量组(16μmol/L)和CSE+阳性对照药红霉素(5μg/mL)组.以RT-qPCR技术检测白介素(IL)-6、白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、细胞间黏附分子(ICAM)-1和血管细胞黏附分子(VCAM)-1 mRNA的表达水平;ELISA法检测细胞培养液中IL-6、IL-1β及TNF-α的蛋白水平表达;蛋白质印迹法(westem blot)检测细胞p38MAPK磷酸化的水平.结果:与Sham组相比,CSE组IL-6、IL-13、TNF-α、ICAM-1和VCAM-1 mRNA水平均明显升高(P ＜0.001),给予不同浓度的HSYA后炎症因子的高表达受到抑制,红霉素组也见较明显的抑制.与Sham组相比,CSE组细胞上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α蛋白的表达水平明显升高(P＜0.001),给予不同浓度的HSYA后CSE所诱发的炎症因子的高表达受到抑制,红霉素组也见较明显的抑制.与Sham组比较,CSE组的p38 MAPK的磷酸化水平明显升高(P＜0.001),给予不同浓度的HSYA后细胞p38 MAPK的磷酸化水平升高受到抑制,红霉素组也可见明显的抑制.结论:HSYA可抑制CSE诱导A549细胞的炎症因子的表达升高.
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羟基红花黄色素A抑制转化生长因子-β1诱导NIH/3T3细胞的活化作用
目的:探讨羟基红花黄色素A(HSYA)抑制转化生长因子β1(TGF-β1)诱导NIH/3T3细胞活化的作用.方法:NIH/3T3细胞分8组:正常对照组、HSYA对照组、TGF-β1组、TGF-β1+0.5μmol/L HSYA组、TGF-β1+1μmol/L HSYA组、TGF-β1+ 2μmol/L HSYA组、TGF-1+ 2μmol/L SB-431542和TGF-β1+ SB-431542 +2μmol/L HSYA组.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖;细胞划痕实验观察细胞的迁移.结果:MTT法观察结果表明:与各时间点正常对照组相比,TGF-β1作用24,48及72小时后的OD 570nm值明显升高(均P＜0.01),并且同时高于TGF-β1+HSYA各组(均P＜0.05)和TGF-β1+ SB-43154两组.在TGF-β1作用0,2,8,12及24小时后,与正常对照组相比,细胞迁移距离明显增加(均P＜0.001),并且同时高于TGF-β1+ HSYA组(均P＜0.001)和SB-431542组.结论:HSYA可抑制TGF-β1诱导NIH/3T3细胞活化作用并且呈现时效关系和量效关系.
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羟基红花黄色素A抑制转化生长因子-β1诱导的与肺纤维化相关信号通路的机制研究
目的:探讨羟基红花黄色素A (HSYA)抑制转化生长因子-β1(transforming growth gactor-β1,TGF-β1)诱导的与肺纤维化相关信号通路的机制研究.方法:运用蛋白质印迹法(western blot)检测p38MAPK、Smad2磷酸化水平以及Smad2核转移情况.结果:HSYA能抑制TGF-β1组的p38MAPK、Smad2的磷酸化水平升高和Smad2的核转移,且高剂量HSYA组(16μmol/L)的抑制作用明显(均P＜0.05),此外,TGF-β1+ siRNA和TGF-β1+ 16μmol/L HSYA+siRNA组的p38 MAPK、Smad2的磷酸化水平无明显差异,TGF-β1+ SB-431542和TGF-β1+ SB-431542+ 16μmol/L HSYA组的p38MAPK、Smad2的磷酸化水平以及Smad2的核转移情况均无明显差异.结论:HSYA可抑制TGF-β1诱导NIH/3T3细胞与肺纤维化相关的信号转导,呈现明显的量效关系,其作用靶点可能为TGF-β RⅡ.
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HPLC法测定朱格伦乌日-6中羟基红花黄色素A的含量
目的:目的用高效液相色谱法测定朱格伦乌日-6中羟基红花黄色素A含量.方法色谱柱为phenomenex C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-0.7％磷酸溶液(26∶2∶72),检测渡长为403nm,流速为1.0mL·min-1.结果羟基红花黄色素A进样量线性范围是0.0855～1.2825μg(r=0.999),平均加样回收率为100.1％,RSD=0.9％(n=6).结论该方法简便、灵敏,可用于制剂的质量控制.
