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体外培养细胞工作中支原体污染及对策
一、细胞培养中常见的污染问题由不同细胞、不同组织器官构成的哺乳动物,其细胞在整体存活时,互相调节、互相依赖,有很好的内环境平衡稳定系统,有特化的应对外来微生物感染、致病因子作用的免疫系统.细胞生活在温度、pH、离子强度、营养成分等相对稳定的状态下.哺乳类细胞在体外培养成活本身就是一项研究.科学家模仿并尽可能创造接近体内的环境,成功地在实验室中培养了各种哺乳类细胞,是20世纪很重要的成就.
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exosome与肿瘤免疫治疗的研究进展
exosome是由细胞内多泡体(muhivesicularbody,MVB)与细胞膜融合后,释放到细胞外基质中的一种膜性囊泡,它可从一种细胞到达另一种细胞,在细胞问传递多种分子,具有与抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)相似的功能,能诱发和增强机体的免疫反应.exosome由Johnstone等[1]初报道,他们在研究网织红细胞向成熟红细胞转变过程中,从体外培养羊网织红细胞的上清液中分离纯化了这种囊泡状沉淀物.后来,exosome又从其他类型的造血和非造血细胞的培养基中被分离出来,如肥大细胞[2]、血小板[3]以及多种肿瘤细胞[4-6].不同细胞来源的exosome所含的蛋白质不同,其生物学功能也有差异.
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干细胞研究攀向生命科学高峰——我科学家率先在体外培养成功胃肠器官
关键词: 细胞研究 生命 科学高 科学家 体外培 养成 胃肠 器官 Life Science stem cells -
香烟烟雾提取物对猪气道上皮细胞β-连环素及酪氨酸磷酸化的影响
据<中华医学杂志>2001年4月81卷第7期报道华中科技大学同济医院病理学教研室陈芳等教授,为观察香烟烟雾提取物(CSE)和酪氨酸激酶抑制剂(tyrophostin 25)对气道上皮细胞(AEC)酪氨酸磷化程度、细胞Src蛋白(c-Src)及β-连环素(β-cat)表达的影响,探讨细胞酪氨酸磷酸化程度及β-cat在吸烟致AEC损伤和修复中的作用及调控机制,体外培养猪AEC,将培养细胞分成3组:N组加无血清培养基,C组在无血清培养基上分别加CSE,CT组加tyrophostin 25及CSE.
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利多卡因对体外培养兔膝关节软骨细胞合成代谢的影响
关节软骨是一种特殊的结缔组织,由软骨细胞和基质组成。基质由软骨细胞合成和分泌,主要成分是Ⅱ型胶原(col-lagen typeⅡ)和蛋白多糖,蛋白多糖的组成成分中均含氨基多糖(glycosaminoglycans GAG)。基质合成与降解失衡是造成关节软骨破坏的重要原因之一[1]。与基质合成与降解有关的酶主要有基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制剂(TIMPs)。MMPs是一组有20多个成员的酶活性依赖Zn2+的蛋白水解酶家族,主要降解GAG和Ⅱ型胶原,在骨关节炎(osteoarthri-tis,OA)基质的降解过程中起重要的作用,其中MMP-3是基质降解中重要的酶[2]。MMP-3可由软骨细胞、成纤维细胞及成骨细胞分泌,激活后可降解基质中的胶原以及蛋白多糖,破坏关节软骨。MMP-3不仅降解多种细胞外基质,还可激活其他蛋白酶原,如 MMP-1、3、9、13酶原,从而产生瀑布放大效应,加速软骨的破坏[3]。但在正常情况下,MMP-3的活性受TIMP-1的抑制,处于无活性或低活性状态。
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铅神经毒作用机理研究的新进展
人们对铅毒性的认识过去主要局限于职业接触的人群。随着工业化和交通运输业的飞速发展,铅污染问题变得越来越严重。据调查在使用含铅汽油的城市,由于汽车尾气排放的原因使大气中铅含量普遍上升,其浓度一般在0.5~3.0μg/m3。同时,由于一些含铅日用品的使用,人们可通过日常生活的一些途径如玩具、油漆、陶器制品、化妆品、钥匙等接触铅。铅作为一种不可降解的环境污染物,在环境中可以长期积蓄,可通过空气、水、食物链、土壤等途径进入人体[1]。铅进入人体后可在人体内蓄积,对造血、泌尿、生殖、免疫、神经、心血管等各系统引起长期的慢性损伤。流行病学的研究表明,环境中铅对儿童智力和中枢神经系统的正常发育存在严重危害,儿童体内血铅浓度每上升10μg/dl,将导致智商平均下降0.25点[2]。由此,铅污染问题受到世界各国的关注。对于铅的毒作用机理,尤其是对神经系统方面作用机理的研究具有十分重大的意义。经过多年的努力,铅的神经毒性已无可置疑。但是,铅对神经毒作用的真正机理至今尚未完全清楚。本文主要对近年来国内外在该方面研究的一些新进展作一综述。1 铅神经毒作用在细胞水平的研究 有些学者认为铅对神经系统的毒作用很可能与低浓度铅引发了神经细胞的凋亡有关[3]。所谓细胞凋亡(apoptosis)就是指生理性或某些因素诱发的程序化细胞固有的死亡过程,细胞自身结束其生命,裂解为凋亡小体。动物体外实验中,Aberto等人以浓度为1μmol/L的醋酸铅给小鼠体外培养的小脑颗粒细胞染毒,观察到该细胞形态学上发生了凋亡细胞的特征性变化:出现细胞收缩,核染色质密度增高,DNA碎片形成,核仁裂解等变化[4]。同样地,Fox等人观察到低浓度铅使体外培养的视锥细胞、视杆细胞发生凋亡[]。所以,低剂量的铅可引发神经细胞凋亡,影响神经元突触的形成,对神经系统造成损伤,进而影响正常的神经功能。 另一些研究表明,铅的神经毒作用可能与自由基引起神经细胞损伤有关[6]。由于铅的存在,中枢神经系统中氧化与抗氧化机制之间的平衡失调,使一些关键的生物大分子被氧化破坏,从而影响细胞的正常功能。
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人胚心肌细胞的分离与体外培养
由于在体内研究人心肌细胞具有一定的局限性,因此心肌细胞的分离与体外培养成为一项重要技术.
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间歇性机械拉伸对体外培养兔关节软骨细胞微管蛋白-β取向的影响
目的 探讨间歇性机械拉伸对兔关节软骨细胞生长和细胞形态及骨架的影响,为软骨细胞内力学信号传导研究的提供参考.方法 采用FX-4000TM柔性基底拉伸系统对体外单层原代培养的兔软骨细胞实施正弦波、0.5 Hz、0~5%间歇性周期应变加载,每日拉伸3h,共加载3天.对照组静态培养.3天后检测细胞活力、基质合成情况以及微管蛋白-β细胞免疫荧光染色,并对细胞周期进行检测.结果 加载组软骨细胞生长良好,氨基多聚糖和蛋白多糖的合成与对照组无明显差异;但细胞增殖指数显著增高(P<0.05);微管蛋白-β沿细胞长轴发生重排,细胞形态和取向趋于一致.结论 间歇性机械拉伸对细胞生长起到积极的作用,并且通过微管蛋白-β的重排影响细胞形态和取向.
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神经干细胞及其在神经系统疾病中的应用前景
长期以来,人们认为中枢神经系统神经元在个体出生前业已完成,之后不具有再生能力.20世纪90年代初期,研究者在成年啮齿类动物及人的脑和脊髓中分离出能够不断分裂增殖,在特定条件下,具有向神经元、神经胶质细胞分化潜能的原始细胞,并在体外培养成功,提出了神经干细胞(neuronal stem cell)的概念[1].
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低频电磁场对生殖健康影响的研究进展
低频电磁场(Low Freqlenle-electrou magnetic field,LF-EMF)对动植物生存环境的影响已逐渐引起了广泛关注,尤其对生殖健康的作用已造成不容勿视的影响.1 LF-EMF对动物胚胎毒性的作用近年来,有关低频电磁场对胚胎毒性的动物试验研究十分突出,利用体外培胎培养成活体的动物实验有利于提供更确切的数据,得到较为准确的结论,从而有助于对其影响机制作进一步探讨.
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人工培养"细胞导弹"歼灭残余白血病
从患者血液内提取两种免疫细胞,通过体外培养成一种免疫能力更强的"细胞导弹",然后再输入化疗后的白血病病人体内,帮助患者更好地恢复自身免疫能力.去年12月16日,国内首例接受这种治疗的患者于娇(化名)已康复出院.经观察,这种新疗法可大大降低白血病患者化疗后的复发,提高自血病患者化疗后和造血干细胞移植的成功率.
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人参皂甙Rg1对体外培养牛主动脉内皮细胞作用的适宜浓度范围
随着对人参皂甙认识的逐步深入,目前已确定结构的单体成分达三十多种.其中人参皂甙Rg1具有抗细胞凋亡、改善应激、抑制衰老以及促进学习和记忆等功能[1~3].本文比较了不同浓度的Rg1对内皮细胞生长的影响,旨在探讨人参皂甙Rg1发挥药理效用的适宜浓度范围.
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不同血清型腺相关病毒介导的增强绿色荧光蛋白转染犬骨髓间充质干细胞的比较
间充质干细胞(MSCs)具有多向分化潜能,增殖能力强,是组织工程种子细胞研究热点之一[1].腺相关病毒(AAV)载体是已知可整合在染色体上长期表达而不致病的病毒载体.为明确AAV1与AAV2载体对MSCs的转染特点和表达效率,我们就rAAV载体介导的增强绿色荧光蛋白(EGFP)对体外培养犬MSCs的转染情况进行了观察.
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细胞凋亡抑制剂防护晶状体上皮细胞氧化损伤的信号转导机制
目的:旨在探讨细胞凋亡抑制剂阿魏酸钠(SF)、五味子乙素(Sch B)、菊花(FC)、车前子(SP)对氧化损伤的晶状体上皮细胞(LEC)内Ca2+、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)的影响,揭示天然药物防治白内障的细胞和分子学机制.方法:将四种药物与H2O2造成氧化损伤的体外培养牛LEC共同孵育后,进行以下研究:1、采用四甲基偶氮唑兰(MTT)法观察在不同时间和浓度条件下LEC活性的变化.2、采用荧光分光光度法测定不同时间细胞内钙离子浓度([Ca2+]i).3、采用放射免疫法测定不同时间LEC内cAMP、cGMP的含量.观察药物的剂量效应与时间效应.
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刺激周期未成熟卵体外培养成熟受精并解冻胚胎移植后分娩1例
1 病例报告患者30岁,G1P0,因9年不孕要求助孕于2005年3月23日来我院就诊.患者平素月经规律,碘油造影示"双侧输卵管阻塞".控制性超排卵(COH)采用促性腺激素释放激素类似物(GnRH-a)长方案.