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维药异黑成熟颗粒对异常黑胆质型慢性阻塞性肺疾病大鼠肺部黏蛋白分泌影响
目的:研究维药异黑成熟颗粒(ASM)对异常黑胆质型(ASS)慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺部黏蛋白(MUC5AC,MUC5B)表达的影响.方法:用熏炯90d结合气道滴注弹性蛋白酶法建立COPD模型,在此基础上叠加干寒环境、干寒饮食和足底电刺激建立ASSCOPD.ASSCOPD于建模后第90天随机分为ASSCOPD组和异黑成熟颗粒干预组(ASMCOPD)组,ASMCOPD组予异黑成熟颗粒灌胃(0.54g· 200g-1·d-1),共7d.Western blot法检测大鼠肺部组织MUC5AC及MUC5B.数据用SPSS l l.5统计软件进行分析.结果:与对照组比较,COPD组和ASSCOPD组MUC5AC显著升高(P＜0.O1,P＜0.05).ASMCOPD组MUC5AC较COPD组降低(p＜0.01).与对照组比较,ASMCOPD组MUC5B升高(P＜0.05).结论:ASM能够降低ASSCOPD气道升高了的MUC5AC蛋白表达,并增加MUC5B蛋白的表达,这可能是其治疗COPD作用特点之一.
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解毒清肺合剂对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织中性粒细胞弹性蛋白酶及黏蛋白5AC表达的影响
目的：探讨解毒清肺合剂调节慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道黏液高分泌的作用机制。方法采用气道滴注脂多糖联合烟熏方法建立慢性阻塞性肺疾病模型。40只清洁级Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、解毒清肺组与克拉霉素组。模型组、解毒清肺组、克拉霉素组分别给予生理盐水、解毒清肺合剂、克拉霉素灌胃，空白对照组正常喂养，连续30 d。实验第31日，处死大鼠提取肺组织，每组随机选取6只，HE染色观察肺组织病理形态及黏液腺体增生，实时荧光定量 PCR 检测各组大鼠肺组织中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）、黏蛋白5AC（MUC5AC）mRNA表达，免疫组化检测肺组织及气道上皮NE、MUC5AC蛋白表达。结果与空白对照组比较，模型组气道上皮黏液腺体增生、肺组织NE及MUC5AC mRNA表达、气道上皮NE及MUC5AC蛋白表达升高（P＜0.05，P＜0.01）；与模型组比较，解毒清肺组气道上皮黏液腺体增生显著降低（P＜0.01），且作用与克拉霉素组相当；解毒清肺组肺组织NE、MUC5AC mRNA表达显著降低（P＜0.01），且作用优于克拉霉素组；解毒清肺组气道上皮MUC5AC蛋白表达降低（P＜0.05），且作用与克拉霉素组相当。解毒清肺组和克拉霉素组气道上皮NE蛋白表达与模型组无差异。结论解毒清肺合剂通过NE下调MUC5AC蛋白表达，调节慢性阻塞性肺疾病气道黏液高分泌。
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健胃愈疡颗粒抗消化性溃疡复发的疗效及作用机理
目的 观察健胃愈疡颗粒抗消化性溃疡(PU)复发的临床疗效及其可能机理.方法 381例PU患者随机分为治疗组(202例)和对照组(179例),并设胃镜及组织学正常者18例为正常组.治疗组给予健胃愈疡颗粒每次9g口服,每日3次.对照组给予雷尼替丁胶囊每次0.15g口服,每日2次；幽门螺杆菌(Hp)阳性者加用阿莫西林胶囊和甲硝唑片,用药7天.两组均治疗4周.观察两组患者临床疗效、一年复发率及Hp清除率,并测定治疗前后两组患者及正常组胃黏膜组织血管内皮生长因子(VEGF)、黏蛋白5AC(MUC5AC)、核因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白及其mRNA的表达. 结果 治疗组愈合率为79.2％,一年复发率为9.35％,Hp根除率为76.6％；对照组愈合率为81.8％,一年复发率为30.00％,Hp根除率为81.0％.治疗组复发率显著低于对照组(P＜0.01).治疗组治疗后较治疗前VEGF、MUC5AC及其mRNA表达明显增高,NF-κB p65蛋白及其mRNA表达降低(P＜0.01),并且在升高VEGF、MUC5AC及其mRNA方面优于对照组(P＜0.01).结论 健胃愈疡颗粒具有良好的抗PU复发作用,可能通过提高PU患者溃疡周边组织VEGF、MUC5AC的表达,降低NF-κB p65的表达改善溃疡愈合质量,从而抗PU复发.
关键词： 消化性溃疡 健胃愈疡颗粒 血管内皮生长因子 黏蛋白5AC 核因子-κBp 65 -
Elafin在人支气管上皮细胞系16HBE胞质内对黏蛋白5AC生成的影响
目的 探讨Elafin在胞质内对表皮生长因子(EGF)诱导的黏蛋白(MUC)5AC生成的影响及其作用机制.方法 体外培养人支气管上皮细胞系16HBE,将已构建好的pEGFP-N1-Elafin载体通过LipofectamineTM2000转染到16HBE细胞中,以转染空质粒载体的16HBE细胞作为对照,均给予外源性EGF作为刺激物共同孵育.以RT-PCR和ELISA分别检测细胞内黏蛋白(MUC)5AC mRNA水平和MUC5AC含量.间接免疫荧光细胞化学法结合激光共聚焦显微镜检测细胞核中核因子(NF)-κB的活性.免疫共沉淀法结合Western blot检测SUMO-1-p-IκBα含量.结果 转染重组质粒的细胞中MUCSAC mRNA水平、MUCSAC的含量(0.36 ±0.09)以及NF-κB的活性显著低于转染空载体的对照组细胞(MUC5AC的含量0.55±0.07)(P<0.01),而SUMO-1-p-IκBα的含量则显著高于后者(P<0.01).结论 Elafin能够通过促进p-IκBα的类泛素化阻止NF-κB的活化,从而下调MUC5AC的生成.
关键词： Elafin 核因子-κB 小泛素样修饰蛋白-1 类泛素化 黏蛋白5AC -
BRAP对LPS诱导的人气道上皮细胞系黏液高分泌的影响
目的 探讨蛙皮素受体激活蛋白(BRAP)对脂多糖(uS)诱导的气道黏液高分泌的影响及相关作用机制.方法 体外培养人气道上皮HBE16细胞,转染已构建好的pEGFP-N1-BRAP,以空质粒载体作为对照,给予LPS刺激,同时分别以ERK抑制剂U0126、JNK抑制剂SP600125、P38抑制剂SB203580干预.观察细胞内活性氧(ROS)含量、黏蛋白(MUC)5AC表达和核因子-κB(NF-κB)活性以及细胞活力的变化.结果 转染pEGFP-N1-BRAP后ROS明显减少(P＜0.01);同单纯LPS刺激相比,MUC5AC蛋白含量和mRNA水平在转染pEGFP-N1-BRAP后明显降低(P＜0.01),NF-κB活性亦呈相同趋势(P＜0.05);在U0126组,MUC5AC的表达较转染重组质粒组显著降低(P＜0.01),NF-κB活性也显著下调(P＜0.05).结论 BRAP可以通过ROS/ERK/MAPK信号通路阻止胞质内NF-κB的活化,从而下调MUC5AC的生成.
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T细胞免疫球蛋白-黏蛋白-1对卵蛋白致敏小鼠气道 MUC5 AC 及 Th1／Th2细胞因子表达的影响
目的研究T细胞免疫球蛋白-黏蛋白-1（TIM-1）对卵蛋白（OVA）致敏小鼠气道MUC5AC及Th1/Th2细胞因子表达的影响，探讨气道黏液高分泌的机制。方法 OVA腹腔注射致敏小鼠，随机分组为：正常对照组（A组）、哮喘组（B组）和哮喘＋TIM-1抗体处理组（C组），每组8只，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠肺泡灌洗液（BALF）中IL-4、IFN-γ的水平变化，实时RT-PCR检测外周血单个核细胞（PBMCs）TIM-1 mRNA及气道MUC5AC mRNA表达。结果（1）与A组小鼠外周血PBMCs表达TIM-1 mRNA（0.618±0.043）相比，B组（1.129±1.101）及C组（0.898±0.071）TIM-1 mRNA表达明显增多（P＜0.01），且C组明显低于B组（ P＜0.01）；（2） B组和C组小鼠BALF中IL-4表达分别为（67.123±3.341） ng/L和（44.217±2.201）ng/L，较A组[（23.211±2.142）ng/L]明显增多（P＜0.01），且C组明显低于B组（P＜0.01）；B组及C组小鼠BALF表达IFN-γ分别为（53.475±4.776）ng/L和（87.116±5.611）ng/L，均低于A组[（124.624±9.292）ng/L]（P＜0.01），而C组与B组相比，有所增加（P＜0.01）；（3）B组（1.004±0.081）及C组（0.673±0.029）小鼠气道MUC5A mRNA表达与A组（0.314±0.027）相比，明显增加（P＜0.01），且C组低于B组（P＜0.01）；（4）小鼠外周血PBMCs TIM-1 mRNA表达与IL-4、MUC5AC表达呈正相关，而与IFN-γ表达呈负相关。结论抑制TIM-1表达可减少IL-4和MUC5AC的分泌，提高IFN-γ表达，提示在调节黏液高分泌及哮喘治疗中具有意义。
关键词： 哮喘 T细胞免疫球蛋白-黏蛋白-1 黏蛋白5AC -
MUC5AC特异性siRNA对胆管癌细胞株HCCC-9810增殖及凋亡的影响
目的:探讨黏蛋白5AC特异性siRNA对人肝内胆管癌细胞珠HCCC-9810体外增殖及凋亡能力的影响.方法:设计合成三对特异性siRNA, 构建了三个可在哺乳动物细胞中表达siRNA的表达质粒, pRNAT-U6.1/Neo-MUC5AC-siRNA1/2/应用脂质体转染技术分别将三个稳定表达的质粒和对照质粒( 空质粒对照) 转染HCCC-9810, 应用有荧光标记的非特异性小分子的siRNA检测转染效率, RT-PCR检测黏蛋白5AC基因mRNA水平;SABC免疫组化染色技术检测黏蛋白5AC的表达;MTT检测细胞生长增殖情况;流式细胞仪分析细胞凋亡.结果:基因测序表明成功构建质粒;转染后荧光蛋白表达率28.57%;RT-PCR结果表明在mRNA水平, 三个质粒都可抑制黏蛋白5AC基因的表达, 并可使黏蛋白5AC的表达下降,MTT结果对细胞的生长有一定的抑制作用,流式细胞仪分析结果使肿瘤细胞凋亡增加.结论:构建pRNAT-U6.1/Neo-MUC5ACsiRNA1/2/3质粒明显抑制了黏蛋白5AC基因在mRNA水平及蛋白的表达, 并可抑制肿瘤细胞的生长增殖和诱导其凋亡.
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链霉蛋白酶对胃组织中治疗幽门螺杆菌药物浓度的影响
目的 明确链霉蛋白酶应用对胃组织中阿莫西林和甲硝唑浓度的影响.方法 C57BL/6小鼠随机分为实验组和对照组(每组70只),给予奥美拉唑(138.2 mg/kg)+阿莫西林(28.6 mg/kg)+甲硝唑(22.5 mg/kg),并分别予链霉蛋白酶(110 mg/kg)或等量的无菌PBS,上述药物灌胃1次,给药后15～360 min共10个时间点(每组7只/时间点)取血浆和胃组织,高效液相色谱法检测阿莫西林和甲硝唑浓度,并检测给药后120、360min的胃组织黏膜层胃炎指数(HE法)和黏蛋白5AC的相对表达量(蛋白质印迹法).结果 阿莫西林和甲硝唑的胃组织浓度达峰时间早于在血浆出现的时间(均为15 min比60 min),实验组的胃组织浓度明显高于对照组(P＜0.05),主要集中在15～90 min.实验组药物血浆浓度在15和30 min较对照组高(P＜0.05).给药后120、360 min,实验组与对照组的胃黏膜层胃炎指数的差异均无统计学意义(0.28±0.18比0.14±0.14,P＞0.05;0.43 ±0.20比0.28 ±0.18,P＞0.05);黏蛋白5AC的相对表达量实验组较对照组低(0.036 ±0.006比0.197±0.058,P＜0.05;0.039±0.008比0.208±0.072,P＜0.05).结论 链霉蛋白酶明显增加了抗菌药物从胃腔向胃黏膜方向的弥散量,使局部胃组织和血浆浓度升高,且以局部胃组织浓度升高为主,持续时间更长.
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TIM-1对卵蛋白致敏小鼠肺组织黏蛋白5AC及T-bet表达的影响
目的 研究T细胞免疫球蛋白-黏蛋白1(T cell Ig and mucin-1,TIM-1)对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠肺组织黏蛋白(mucin5AC,MUC5AC)及T-bet表达的影响,探讨TIM-1参与气道黏液高分泌的机制.方法 卵蛋白(ovalbumin,OVA)腹腔注射致敏小鼠,随机分为正常对照组、哮喘组和哮喘+TIM-1抗体处理组(TIM-1组),每组10只.检测小鼠外周血单个核细胞(PBMCs) TIM-1+细胞比例,实时RT-PCR检测小鼠肺组织MUC5AC mRNA及T-bet mRNA表达变化.结果 ①哮喘组及TIM-1组小鼠外周血PBMCs中TIM-1+细胞比例分别为(13.15%和7.42%),均高于正常对照组(1.12%)(P＜0.01),且TIM-1组低于哮喘组(P＜0.01);②与对照组小鼠肺组织表达MUC5AC mRNA(0.223±0.017)相比,哮喘组(1.121±0.082)及TIM-1组(0.771±0.040)表达明显增多(P＜0.01),且TIM-1组小鼠肺组织表达MUC5AC mRNA较哮喘组降低(P＜0.01);③哮喘组及TIM-1组小鼠肺组织表达T-bet mRNA分别为(0.187±0.011)及(0.689±0.057),较对照组降低(1.001±0.085)(P＜0.01),而与哮喘组相比,TIM-1组表达有所增多(P＜0.01);④TIM-1+细胞比例与MUC5AC mRNA表达比例呈正相关(r1=0.918,P＜0.01),而与T-bet mRNA表达呈负相关(r2=-0.958,P＜0.01).结论 抑制TIM-1表达可通过增强T-bet mRNA表达,减少气道MUC5AC mRNA表达,调控气道黏液分泌.
关键词： T细胞免疫球蛋白-黏蛋白-1 哮喘 黏蛋白5AC -
JNK/AP-1通路在柚皮素抑制RSV感染引起气道黏液高分泌中的作用
目的 探讨JNK/AP-1通路在柚皮素抑制呼吸道合胞病毒(RSV)感染引起气道黏液高分泌中的作用.方法 通过RSV A2株感染人肺腺癌上皮(A549)细胞,细胞维持液培养为细胞对照组,细胞中加入不同MOI的RSV吸附2h为RSV感染组(R1、R2、R3组MOI分别为0.5、1.0、5.0),在RSV感染前加入柚皮素(Nar)预处理1h为Nar干预组(N1组为Nar 30 μmol/L+ RSV、N2组为Nar100 μmol/L+ RSV),不同浓度的Nar培养液培养为Nar组(N3、N4组的Nar分别为30 μmol/L和100 μmol/L),含0.1％的二甲基亚砜的细胞培养液培养细胞为DMSO组(D组),用10.μmol/L的JNK通路阻断剂SP600125预处理1h后加用MOI=1.0的RSV感染2h,感染后加入细胞维持液为SP600125干预组(S组).采用实时荧光定量PCR、ELISA检测各组细胞黏蛋白(MUC)5AC的表达情况;采用Western blot检测JNK、P-JNK、AP-1蛋白的表达水平.结果 RSV感染组MUC5AC mRNA及蛋白表达水平均高于细胞对照组(P＜0.05),且随病毒感染量的增加,MUC5AC基因及蛋白表达量也逐渐增加.Nar干预组与RSV感染组相比,MUC5AC mRNA和蛋白水平降低,随Nar浓度增加,降低更为明显,呈剂量相关性(P＜0.05).R2组p-JNK、AP-1蛋白相对表达量分别为3.31 ±0.34、1.94±0.05,显著高于细胞对照组(均为1.00 ±0.00)(P＜0.05).N2组、S组p-JNK蛋白相对表达量为2.10±0.27、1.97 ±0.16,AP-1蛋白表达量为1.40±0.03、1.36±0.05,均较R2组下降(P＜0.05).N2组和S组MUC5AC蛋白表达量为(43.17±1.06)μg/L、(44.02±0.99) μg,/L,差异无统计学意义(P＞0.05),但两组均低于R2组(48.19 ±0.47)μg/L(P＜0.05).结论 RSV A2株感染A549细胞会导致黏蛋白MUC5AC基因转录和蛋白表达增加,JNK/AP-1通路在柚皮素抑制RSV感染引起的气道黏液高分泌中起调控作用.
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白细胞介素13在嗜酸粒细胞性慢性鼻-鼻窦炎合并鼻息肉组织中的表达及其与黏蛋白高分泌的相关性研究
目的 明确白细胞介素13(IL-13)在嗜酸粒细胞性慢性鼻-鼻窦炎(eosinophilic chronic rhinosinusitis with nasal polyps,EOS-CRSwNP)中的表达,探讨在EOS-CRSwNP中IL-13和黏蛋白5AC(mucin 5AC,MUC5AC)的相关性.方法 利用免疫组化和ELISA方法观察和测量MUC5AC在对照组鼻黏膜组织和EOS-CRSwNP组织的表达,ELISA法检测IL-13在对照组鼻黏膜组织和EOS-CRSwNP组织的表达;双变量相关性分析研究EOS-CRSwNP中IL-13和MUC5AC的相关性.IL-13与原代培养鼻黏膜上皮细胞共孵育,ELISA检测细胞上清中MUC5AC的表达.结果 免疫组化染色见MUC5AC主要表达在鼻黏膜上皮,通过ELISA检测,EOS-CRSwNP中MUC5AC和IL-13均较对照组显著升高.双变量相关性分析表明在EOS-CRSwNP中MUC5AC与IL-13存在高度相关,进一步通过IL-13与气液界面原代培养人鼻黏膜上皮细胞共孵育,MUC5AC分泌显著增加.结论 MUC5AC和IL-13在EOS-CRSwNP中表达升高,MUC5AC的高分泌与IL-13高表达密切相关.
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慢性鼻-鼻窦炎中缺氧诱导因子1α的表达及与黏蛋白分泌的关系
目的 研究缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1 α)在慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS)中的表达及与黏蛋白MUC5AC、MUC5B的关系.方法 选取23例伴鼻息肉的CRS患者、20例不伴鼻息肉的CRS患者和15例无CRS的正常鼻窦黏膜,分别采用过碘酸-雪夫染色(periodic acid-schiff stain,PAS)检测各组中总黏蛋白的表达,免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)、半定量反转录聚合酶链反应法(RT-PCR)分别检测HIF-1 α及黏蛋白MUC5AC、MUC5B的表达,免疫印记法(Western Blot法)检测各组中HIF-1α表达情况.以SPSS 16.0软件统计分析HIF-1 α与各黏蛋白mRNA表达的相关性.结果 HIF-1α、MUC5AC、MUC5B、总黏蛋白主要表达于伴或不伴鼻息肉CRS患者的黏膜上皮及腺体内,且较健康对照组明显增多,差异有统计学意义(上皮:t值分别为8.650、9.305,9.382、8.524,7.533、5.417,5.507、5.556,P值均＜0.05;腺体:t值分别为8.285、7.098,6.798、7.308,8.574、7.933,6.798、7.308,P值均＜0.05);伴鼻息肉CRS与不伴鼻息肉CRS组间差异无统计学意义(上皮:t值分别为0.734、0.415、0.572、0.248,P值均＞0.05;腺体:t值分别为0.331、0.662、0.249、0.644,P值均＞0.05).HIF-1α蛋白在伴或不伴鼻息肉CRS组织中较正常鼻窦黏膜显著增高(t值分别为3.522、3.314,P值均＜0.05).HIF-1α、MUC5AC、MUC5B mRNA在伴或不伴鼻息肉CRS患者中相对表达量分别为1.35±0.84、1.36±0.94,0.81±0.54、0.78±0.46,1.13±1.00、1.22±1.02,在健康对照组的相对表达量为0.43±0.34、0.42 ±0.36、0.48±0.42,二者相比差异有统计学意义(t值分别为4.087、4.089,2.519、2.550,2.738、2.955,P值均＜0.05).伴鼻息肉CRS患者HIF-1α与MUC5AC、MUC5B mRNA呈正相关(r值分别为0.474、0.464,P值均＜0.05);不伴鼻息肉的CRS患者HIF-1α与MUC5AC、MUC5B mRNA呈正相关(r值分别为0.477、0.514,P值均＜0.05).结论 HIF-1α、MUC5AC和MUC5B在伴或不伴鼻息肉的CRS患者中表达升高,提示CRS是高黏液性疾病,且HIF-1 0与其中高分泌性的黏蛋白MUC5AC、MUC5B存在密切的关系.
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针刺对干眼症患者泪液黏蛋白5AC表达的影响
目的 观察针刺治疗干眼症的疗效及对泪液黏蛋白(Mucin,MUC)5AC表达的影响.方法 50例(100只眼)干眼症患者采用针刺局部和远端相结合的方法,取穴睛明、攒竹、太阳、四白等,治疗前后观察患者干眼症状,并行泪液分泌试验(Schirmer Ⅰ test,Sit)、泪膜破裂时间(tear break-up time,BUT)检查,免疫组化方法检测泪液黏蛋白5AC的表达量.结果 泪液分泌量(mrn/5 min):治疗前5.2±2.6,治疗后7.3±2.1 (t=2.71,P=0.03).泪膜破裂时间(s):治疗前3.7±1.4,治疗后6.9±3.8(t=2.59,P=0.04).泪液黏蛋白5AC表达量(μg/ml):治疗前0.77±0.13,治疗后0.99±0.11 (t=1.98,P=0.05).临床疗效:显效43只眼,有效46只眼,无效11只眼,总有效率为89％.结论 针刺治疗可以促进泪液黏蛋白5AC的表达,提高泪膜稳定性,明显改善干眼症状.
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细胞外信号调节蛋白激酶1/2磷酸化及白细胞介素-32在哮喘小鼠气道黏液高分泌中的作用
目的 探讨细胞外信号调节蛋白激酶1/2 (ERK1/2)特异性抑制药U0126和地塞米松干预对支气管哮喘小鼠肺组织中ERK1/2磷酸化(p-ERK1/2)、白细胞介素-32(IL-32)及黏蛋白5ac(Muc5ac)蛋白表达的影响.方法 将40只支气管哮喘模型小鼠随机分为模型组、实验A组、实验B组、实验C组,每组10只;另取10只正常小鼠作为对照组.模型组于第1和13天腹腔注射卵清白蛋白(OVA)混悬液0.2 mL致敏,第19天开始雾化吸入5％ OVA,每次30 min,连续5d;实验A组、实验B组及实验C组在雾化激发前30 min分别腹腔注射2mg·kg-1地塞米松、30 mg·kg-1 U0126及二甲亚砜0.2 mL,其余操作同模型组;对照组予以0.9％ NaCl,其余操作同模型组.用酶联免疫吸附试验检测肺泡灌洗液中IL-32的表达,用免疫组织化学法检测肺组织中Muc5ac、p-ERK1/2及IL-32蛋白的表达.结果 模型组、实验A组、实验B组的IL-32光密度(OD)值分别为(0.81±0.25),(0.34 ±0.06)和(0.37 ±0.12),Muc5 ac的积分光密度(IOD)值分别为(54462.97±6907.17),(7904.62±1639.96)和(7447.74±1233.68),p-ERK的IOD值分别为(95621.04±11112.78),(10225.53±1456.72)和(10718.69±2554.13),IL-32的IOD值分别为(44870.78±7330.11),(15075.80±3490.51)和(16847.16±3485.83).模型组的上述指标与实验A,B组比较,差异均有统计学意义(均P ＜0.01).结论 p-ERK1/2及IL-32均参与支气管哮喘小鼠气道Muc5ac的表达及分泌,且二者呈协同刺激作用.
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p38丝裂原激活蛋白激酶信号通路参与高渗应激诱导黏蛋白5AC高表达研究
目的 探讨p38丝裂原激活蛋白激酶(P38)信号通路参与高渗应激诱导黏蛋白5AC(MUC5AC)高表达的作用机制.方法 利用545、695、855、1055和1280 mOsm/L高渗氯化钠溶液培养人气道上皮NCl-H292细胞.同时以1280mOsm/L高渗氯化钠为刺激因素,以P38特异性抑制剂SB203580、c-jun氨基末端激酶(JNK)特异性抑制剂SP600125及细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)特异性抑制剂U0126为干预因素,采用RT-PCR技术及ELISA观察培养细胞MUC5AC转录水平和MUC5AC蛋白水平改变.采用Western blotting法检测1280 mOsm/L高渗氯化钠培养上清液中细胞匀浆磷酸化P38(p-P38)、磷酸化JNK(p-JNK)及磷酸化ERK(p-ERK)蛋白水平.结果 分别以545、695、855、1055和1280mOsm/L高渗氯化钠刺激后,培养细胞中MUC5ACmRNA及蛋白含量显著高于对照组(P<0.01),且呈现出与渗透浓度相关的趋势.SB203580显著下调1280mOsm/L高渗氯化钠所致的p-P38含量升高,同时显著下调MUC5ACmRNA及蛋白含量(P<0.05);SP600125则明显下调p-JNK的含量,并下调MUC5ACmRNA转录及蛋白含量(P<0.05),但作用弱于SB203580;1280 mOsm/L高渗氯化钠对ERK的含量无影响(P>0.05),U0126对MUC5ACmRNA转录及蛋白含量也无明显影响(p>0.05).结论 高渗应激可呈浓度依赖性地从转录水平诱导气道上皮细胞呈现黏液高分泌状态,且P38信号通路起主要作用.
关键词： 高渗应激 p38丝裂原激活蛋白激酶 黏蛋白5AC 酶联免疫吸附测定 -
基质金属蛋白酶-9参与吸烟所致气道黏液高分泌的信号转导通路
目的 研究基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在香烟所致气道黏液高分泌中的作用及其信号转导机制.方法 培养人气道BEAS-2B上皮细胞系,分别给予香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)和外源性表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)刺激,以MMP-9抑制剂Ⅰ(MMP-9inhibitorⅠ)为干预因素.采用RT-PCR检测黏蛋白(mucin,MUC)5ACmRNA,以Western blot检测MMP-9蛋白及磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)蛋白含量,以ELISA检测MUC5AC蛋白及EGF蛋白含量,以明胶酶谱法测定细胞上清液中MMP-9活力.结果 以5%,10%,20%CSE染毒后,MUC5AC的基因转录和MUC5AC蛋白含量显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.01),且呈现与CSE染毒浓度相关的趋势;同时,10%,20%CSE染毒组伴有MMP-9蛋白含量及MMP-9明胶酶活力增高,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).20%CSE染毒能增加EGF蛋白、p-EGFR蛋白、MUC5AC蛋白含量及MUC5AC的基因转录,MMP-9inhibitorⅠ能显著下调CSE染毒引起的上述变化,与单纯CSE染毒组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),但MMP-9 inhibitorⅠ不能下调外源性EGF刺激引起的p-EGFR蛋白、MUC5AC蛋白含量和MUC5AC基因转录水平增加的效应(P＞0.05).结论 在香烟所致气道黏液高分泌过程中,MMP-9能水解产生可溶性EGF,后者结合并磷酸化EGFR,从而启动下游信号通路,增加MUC5AC基因转录和蛋白产物生成.
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三叶因子Ⅰ与黏蛋白5AC在胃癌及癌前病变中的表达及意义
胃癌是严重危害人类健康常见的恶性肿瘤之一,其病死率在我国居恶性肿瘤首位,发病机制迄今未明.近年来,关于胃癌发病机制的研究中,三叶因子(trefoil factors,TFFs)、黏蛋白(mucins)与胃癌的发生、发展逐渐引起关注.在此,我们用免疫组织化学方法研究三叶因子Ⅰ(TFF1)与黏蛋白5AC(MUC-5AC)在正常胃黏膜、萎缩性胃炎伴肠化生、不典型增生、早期胃癌、进展期胃癌的表达情况,初步探讨其在胃癌发生发展中的作用.
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不同频率振动对大鼠胃黏膜黏液分泌及形态学的影响
目的:从生物化学、组织学和分子生物学角度观察4～6 Hz振动对大鼠胃黏膜氨基己糖含量、黏蛋白5AC MRNA表达及其组织形态学变化,探讨振动对大鼠胃黏膜黏液分泌及形态的影响.方法:实验于2007-03/05在南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室进行.取健康成年SD大鼠30只,随机分成对照组和4,5及6Hz振动组,对照组6只,其余3个组各8只,分别给予0,4,5及6Hz振动2 h后立即断颈处死,取胃黏膜及胃腺区组织,测定胃黏膜氨基己糖含量、检测黏蛋白5AC MRNA表达,观察其胃黏膜形态学变化.结果:30只大鼠均进入结果分析,无脱失.①大鼠胃黏膜氨基己糖含量:随着振动频率的增加而下降,4 Hz振动组与对照组相比无显著变化,而5,6Hz振动组显著低于对照组(P＜0.05,0.01).②黏蛋白5AC MRNA表达:5Hz振动组高于对照组(P＜0.01),而6Hz振动组与对照组相比无显著差异(P＞0.05).⑧胃黏膜形态:5,6Hz振动组大鼠胃黏膜上皮不完整,上皮及固有层细胞脱落.结论:5Hz和6 Hz的振动会导致大鼠胃黏膜损伤,黏液分泌减少,并且在此过程中可能存在应激的代偿效应.
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呼吸道黏蛋白5AC基因顺式调控元件特殊蛋白-1在其转录调控中的作用
目的 探讨中性粒细胞弹力酶(neutrophil elastase,NE)诱导气道黏液上皮细胞呼吸道黏蛋白(MUC)5AC产生和mRNA表达以及MUC5AC基因顺式调控元件特殊蛋白-1(specificity protein,Sp-1)在该基因转录调控中的作用.方法 2006年3月至9月,在重庆医科大学病毒性肝炎研究所采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法分别检测培养细胞经0,10,50,100 nmol/L NE刺激诱导5,10,30 min后上清液MUC5AC质量浓度和细胞中MUC5AC mRNA表达水平.应用定点突变技术,在重组质粒的基础上建立MUC5AC启动子区Sp-1结合位点和核转录因子(NF)-kB结合位点单独突变体,并测定NE刺激的转染细胞荧光素酶相对活性.结果 (1)10,50,100 nmol/L NE处理A549细胞30 min,相同时间点不同浓度NE组MUC5AC蛋白表达水平分别与对照组比较差异均有显著性意义(t=3.406～20.909,均P＜0.05),且呈剂量依赖的趋势(P＜0.01).(2)100 nmol/L NE处理30 min后A549细胞MUC5AC mRNA相对表达量明显高于对照组(t=10.299,P＜0.01).(3)NE可诱导含有启动子序列-324 bp的重组质粒荧光素酶相对光强度(1.430±0.042)及pGL3E-MUC5ACNF-κB-MU荧光素酶相对光强度(1.570±0.071)增加,与未经NE诱导的未突变对照组相对光强度(0.799±0.051)相比差异具有显著性意义(t=25.675,t=11.110,P均＜0.01),而NE不能诱导pGL3E-MUC5AC-Sp-1-MU荧光素酶表达增加(P＞0.05).结论 NE可诱导A549细胞MUC5AC产生及其mRNA表达;MUC5AC基因启动子顺式作用元件下游Sp-1位点在NE诱导MUC5AC基因表达机制中起重要作用.
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福多司坦对慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者痰液黏蛋白5AC研究
气道黏液高分泌是慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)的重要病理表现,其黏液的黏弹性主要取决于其中黏蛋白5AC (MUC5AC)[1].现已明确,福多司坦可以通过抑制气道上皮杯状细胞化生和下调MUC5AC基因表达等方式减少MUC5AC的生成.现有结论均是通过观察实验动物和体外培养细胞获得的,而在实际临床应用时福多司坦对慢阻肺患者痰液中MUC5AC的影响情况鲜有报道,其作用机制也未完全明确.白介素(IL)-13是导致慢阻肺患者气道黏液高分泌的重要因子,它可以激活醛糖还原酶(AR)促进气道上皮细胞产生过量的活性氧(ROS),导致气道损伤及黏液高分泌[2-3].
