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1-14 低氧处理对肝癌细胞生长和NQ01酶活性的影响
目的研究低氧环境下肝癌细胞生长是否被抑制,胞内Ⅱ相解毒酶NAD(P)H:醌氧化还原酶-1(NQ01)活性是否被诱导增高,以及二者之间的关系.方法肝癌细胞SMMC-7721接种于96孔培养板内,5%CO2孵箱培养24h后,换新鲜培养液(已用混合气预先平衡)放入低氧小罐,用5%CO2~95%N2混合气体进行缺氧处理(O2%<0.1%),分别培养6、9、12、24、36 h后,取出培养板,以MTT比色法检测细胞生长情况;NQ01酶活性采用微孔板直接测定法、细胞数用结晶紫染色法测定,NQ01酶活性结果表达为NQ01酶比活力(specifie activity)=A(NQ01酶活力)/B(细胞数).结果低氧处理6 h后细胞NQ01酶比活力较常氧对照组下降,而细胞生长加快.在9 h后,酶比活力呈现时效性升高,且低氧组酶比活力明显高于对照,而细胞生长则减慢(与常氧对照组比较均为P<0.01).将细胞生长曲线与酶活时间曲线作相关分析,统计学上差异无显著性.结论低氧处理在短时程内能够刺激肝癌细胞生长加快,抑制胞内NQ01酶活性;而超过这一时间段之后则使细胞生长减缓,诱导NQ01酶活性升高.
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无血清培养基培养乳猪肝细胞的效果
目的:比较无血清培养基和含血清培养基培养乳猪肝细胞的效果,以寻找一种用于生物人工肝猪肝细胞无血清培养的良好培养基.方法:采用改良原位两步胶原酶灌注法分离乳猪肝细胞.将肝细胞以5×108@L-1分别培养在无血清培养基和含血清培养基中,动态观察培养7 d中肝细胞活率、蛋白质和葡萄糖合成功能、G6-Pase活性、安定转化功能及LDH漏出量.结果:无血清培养的猪肝细胞各项指标除G-6-Pase活性在0,1,2 d较低、葡萄糖合成功能在2,7 d较低外,其余与含血清培养基培养的肝细胞无显著差异.肝细胞活率随着培养时间的延长而下降,但均高于88%;无血清培养的肝细胞的蛋白质合成功能在培养7 d中保持稳定.安定转化功能在培养2,3 d强(安定浓度2d时为75±4pg@eell-1,3 d时为77±5pg@cell-1);葡萄糖合成功能从1 d时1.00±0.15 nmol@cell-1下降到2 d时0.71±0.02nmol@cell-1;G-6-Pase活性从0d时1290±30zmol@cell-1下降到ld时306±38amaol@cell-1,然后维持在较低水平;LDH漏出量在2,3 d较高.结论:无血清培养基可用于生物人工肝中猪肝细胞的培养.
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钙离子跨缝隙连接在内皮细胞与平滑肌细胞间传递的研究
目的:探讨钙离子能否跨缝隙连接在内皮细胞与平滑肌细胞间进行传递。
方法:本实验采用植块法分别培养大鼠主动脉内皮及平滑肌细胞,将内皮细胞与平滑肌细胞分别接种至transwell insert膜的两侧以建立内皮细胞与平滑肌细胞双层共培养模型,并用透射电镜观察两种细胞在transwell insert膜两侧生长情况,将细胞负载Fluo-3后,在用ETA (10-5M)和/或ETB(10-5M)受体阻断剂处理一种细胞后用ET-1(10-7M)刺激另一种细胞在激光共聚焦显微镜测定未刺激细胞内荧光强度变化,并观察18α-GA及肝素对上述变化的影响。 -
3株发光致病杆菌的分离培养与鉴定
我们从肺感染病人(病例A)痰液和疑似肺癌病人(病例B)痰液及气管灌洗液中,分别培养检出3株发光致病杆菌(Xenorhabdus luminescens).该菌在Bergey氏细菌分类系统虽然隶属于肠杆菌科,但硝酸盐还原试验阴性,迟缓发酵分解葡萄糖,生化反应独特,培养物在暗处生长时可出现微弱的生物发光现象.现将细菌学鉴定方法及相关问题报告如下.
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多细胞相互作用培养的简易方法
在基因治疗研究中为研究转染外源基因的细胞对机体其他细胞的影响,目前生物学研究中常将不同种类的细胞在一起联合培养(co-culture),以模拟基因治疗在体内的作用环境[1],传统的方法是使用TRANSWELL培养瓶,利用生物半透膜将不同细胞隔开分别培养[2],该方法具有培养瓶价格过于昂贵、半透膜之间存在一定浓度差不利于细胞间相互作用[3]、TRANSWELL培养瓶结构复杂、瓶口相对较小,细胞收集困难等缺点.笔者在实验中利用一些细胞贴壁的特性将其中一种细胞先爬在载玻片上,再与培养在培养皿中的另一种细胞混合培养,有效地克服了以上缺点.现以NIH3T3细胞与转入pEGFP-C3-PENK真核载体的COS-7细胞为例共同培养加以说明.
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体外成骨细胞和破骨细胞联合培养方式的研究进展
国内外对成骨细胞、破骨细胞的来源、功能和分泌进行了大量的实验和研究,但随着研究的深入,诸多的学者发现成骨细胞和破骨细胞之间存在着复杂的联系,对成骨细胞和破骨细胞共育的研究,有助于探索骨改建的过程,特别是对骨代谢性疾病有较全面的认识.国内外对于成骨细胞、破骨细胞分别培养的方式,特别是联合培养所采用的方式有着不同的观点.
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新郑市急性感染性腹泻病原调查及流行病学分析
为了解我市腹泻的主要病原及流行病学特征,我们采集了城镇几个医疗单位肠道门诊病人大便进行了分别培养,方法按常规方法进行操作,结果如下.1 病原分布
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大鼠山仙颗粒含药血清对S-180细胞fasl影响的实验研究
目的:观察大鼠山仙颗粒(SXG)含药血清对S-180细胞的凋亡相关基因fasl表达的影响,探讨其抗肿瘤发生和发展的机理。方法:将制备S-180细胞细胞悬液置入不同浓度的大鼠含药血清及正常大鼠血清中,分成对照组、空白血清1组、空白血清2组、含药血清1组(含药血清小剂量组)和含药血清2组(含药血清大剂量组),分别培养24h、48h、72h后收集细胞计数并制成涂片,免疫细胞化学(二步法)检测瘤组织中fasl基因的表达情况。结果:各时间段的对照组及空白1、2组比较、含药血清1组与空白血清1组比较fasl基因表达水平无显著差异(P>0.05);含药血清2组与空白血清2组比较fasl基因表达水平下降(P<0.05)。含药血清2组各时间段比较,fasl基因表达水平无显著差异( P>0.05)。结论:大鼠SXG含药血清能显著下调体外培养的S-180细胞fasl基因的表达。
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人精子活力试验敏感性及组织培养管细胞毒性的研究
摘要:目的:观察不同浓度福尔马林培养环境中人精子活力的变化,评价人精子活力测试的敏感性;并且利用人精子活力测试检测3种组织培养管的细胞毒性,了解牛血清白蛋白和矿物油对精子的作用,从而探讨人精子活力测试在IVF-ET实验室质量控制中的应用价值.方法:选择符合纳入标准的精液进行常规精液分析,精液处理后分别按实验组和对照组进行培养.实验第一部分:实验组HTF培养液中分别加入0.25%、0.75%的福尔马林溶液,对照组为单纯的HTF培养液,实验组和对照组的培养管、培养皿均部分加入0.3%牛血清白蛋白或矿物油,分别培养24、48 h,在光学显微镜或倒置显微镜下计数有活力的精子数,与初始精子比较,计算平均精子活力指数;实验第二部分:将IVF实验室常用的15 ml Corning、14 ml Falcon和7 ml Nunclon组织培养管均分为实验组和对照组,实验组的HTF培养液中加入0.3%牛血清白蛋白或矿物油,对照组为单纯的HTF培养液,分别培养24、48 h,计数平均精子活力指数.