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骨肉瘤干细胞的研究进展
肿瘤干细胞( tumor/cancer stem cells )理论认为是肿瘤组织中存在数量极少、具有干细胞特征的细胞亚群,该细胞亚群具有自我更新和分化潜能,可能是肿瘤启动、生长、转移和复发的根源。肿瘤干细胞可以自我克隆形成子代致瘤性干细胞,同时分化出具有不同表型、非致瘤性的肿瘤细胞,后者经过短暂分化终死亡[1]。40多年前,有学者提出组织特异性干细胞是肿瘤发生的起源细胞[2]。20世纪60年代,人们从体外克隆培养获得的具有不同筛选标志的骨髓瘤细胞中发现仅0.01%~1.00%的肿瘤细胞可以形成克隆集落[3]。1971年,Park 等[4]在体内利用脾脏进行骨髓瘤细胞培养时,其克隆集落形成概率也与之相当。20世纪70年代后期,Humburger等[5]发现只有0.02%~0.10%的肺肿瘤、卵巢肿瘤与神经母细胞瘤细胞具有在体外软琼脂培养基上形成克隆集落的能力,由此提出了“肿瘤干细胞”的概念。
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人脑胶质瘤干细胞的分离培养及初步鉴定的实验研究
一、材料与方法取10例胶质瘤患者术中切除的肿瘤组织,分离成单细胞悬液,接种于添加生长因子(EGF、bFGF、LIF等)的DMEM/F12无血清培养基中,观察各种细胞的生长增殖情况,对照组取3例同期癫痫患者(非脑肿瘤)手术切除病灶,做相同处理,对增殖形成的克隆球连续传代培养,部分克隆球细胞分散后做单克隆培养;
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用甲基纤维素半固体培养基筛选杂交瘤细胞
制备单克隆抗体一个必不可少的步骤就是使融合后的细胞进行单克隆培养.融合细胞的克隆化方法主要采用有限稀释法[见:徐新来.细胞培养在杂交瘤技术中的应用.见:鄂征主编.组织培养和分子细胞学技术.北京:北京出版社,1995:207~214].由于需要反复克隆再克隆,细胞培养的工作量大,操作繁琐,克隆效率低.我们采用甲基纤维素制成半固体培养基可以克服以往方法上的局限性,直接进行克隆化的培养,提高了工作效率.
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人骨髓基质干细胞克隆对脐血造血干细胞体外扩增作用的研究
目的:探讨人骨髓基质干细胞的克隆化培养及其对体外造血干细胞扩增的影响.方法:取正常肋骨分离骨髓,制备单个核细胞贴壁培养,约5d后取集落样生长的梭形细胞扩增培养、传代.将分选的脐血造血干/祖细胞接种到克隆培养的人骨髓基质干细胞及其他培养条件液上,比较不同培养条件及不同代次骨髓基质干细胞对造血干/祖细胞扩增能力及集落形成能力的影响.结果:人骨髓基质干细胞能扩增达20代以上,经流式细胞仪检测证实为基质干细胞,单纯细胞因子组和细胞因子加基质干细胞组能有效扩增造血细胞,而后者有维持长期造血的作用.结论:该克隆培养方法能有效扩增骨髓基质干细胞,培养的细胞有体外支持长期造血的作用.
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全克隆在肿瘤干细胞研究中的应用和局限性
全克隆指细胞在体外通过克隆培养法形成的一种紧密规则的克隆.具体方法是使单细胞悬液重新繁衍成新的细胞群体,其中紧密、规则、具备连续传代能力的是全克隆.研究已证实全克隆来源于干细胞,而近年来的肿瘤干细胞(TSC)研究发现肿瘤组织中存在小部分细胞在克隆培养中形成全克隆,其具有自我增殖、分化的能力,并具有很强的成瘤性,故全克隆有望成为一种有效的富集和鉴定肿瘤干细胞的方法.
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志贺氏菌PCR检测技术进展
志贺菌又称痢疾杆菌,能侵袭结肠膜上皮细胞,引起人类细菌性痢疾.按抗原结构和生化反应的不同可分为痢疾、福氏、鲍氏和宋内氏志贺菌.传统的检测方法必须经过增菌培养、分离培养和初步生化实验等步骤,操作烦琐费时.分子杂交不但技术复杂,而且克隆培养时其大质粒极易丢失和基因突变,阳性率不高.