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一株与志贺菌有共同抗原的无丙二酸柠檬酸杆菌的检出
目的 为肠道细菌鉴定工作提供参考.方法 形态学观察、生化反应、血清凝集等检测程序与试验方法,均按照《食品卫生微生物学检验 大肠菌群计数》(GB/T 4789.5-2012)执行.结果 检出一株与志贺菌在SS和HE平板上菌落形态相似、与志贺菌属种多价血清及痢疾志贺菌、鲍氏志贺菌分型血清产生强凝集的无丙二酸柠檬酸杆菌.结论 无丙二酸柠檬酸杆菌与志贺菌存在共同抗原.
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2003-2007年西安市感染性腹泻细菌病原学监测结果分析
目的 了解并掌握西安市腹泻病的发生、流行特征、变化趋势及细菌性病原分布特点,为制定预防措施和临床治疗提供参考依据.方法 2003-2007年对西安市腹泻病哨点监测医院中就诊的急性腹泻病患者,用肛拭子采集粪便标本进行增菌后,分别接种4种培养基(碱性蛋白胨水、SS、EMB、中国蓝平板)作霍乱弧菌、沙门菌、志贺菌以及致泻性大肠埃希菌的检验.结果 从1310份粪便标本中,检出各种病原菌90株,检出率6.87%.其中志贺菌占85.56%,还有沙门菌、大肠埃希菌等.结论 2003-2007年检出的阳性菌群中未发现霍乱弧菌,主要以志贺菌为主,初步揭示了西安市细菌性腹泻病原谱.
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江苏省福氏4c志贺菌病原特性及毒力基因检测
目的 了解江苏省福氏4c志贺菌生化特征、对抗生素耐药性及毒力基因携带情况.方法 采用国际金标准细菌鉴定(API)试剂条进行生化鉴定,用玻片凝集法进行血清分型,细菌药物敏感试验纸片扩散(K-B)法检测对抗生素的耐药性,聚合酶链反应(PCR)扩增ipaH、setl、sen和ial 4种毒力基因.结果 福氏4c志贺菌发酵葡萄糖、甘露醇,41.0%菌株发酵阿拉伯糖.对阿莫西林/棒酸和萘啶酸耐药率高达100.0%,氨苄西林、四环素和复方新诺明耐药率为89.7%;79.5%菌株耐受一半以上抗生素.ipaH、setl、sen、ial 毒力基因携带率分别为100.0%、100.0%、92.3%和92.3%,92.3%(36/39)菌株携带全部4种毒力基因.结论 福氏4c志贺菌多重耐药情况较为严重,敏感药物有庆大霉素、头孢类药物和诺氟沙星.菌株毒力基因携带率高,具有较强的致病性.
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太原市2006年分离志贺菌菌株的血清分型及耐药性分析
目的 调查太原市分离的志贺菌菌株的主要血清型和对常用抗菌药物的耐药性.方法 对从腹泻患者分离的志贺菌菌株进行血清分型、生化鉴定和药物敏感试验.结果 129份腹泻样本分离出阳性菌株40株,其中福氏志贺菌33株,占分离菌株的82.5%,宋内志贺菌7株,占分离总数的17.5%;福氏志贺菌中,4c 型21株,占63.6%.福氏志贺菌对萘啶酸100%耐药,对氨苄西林、四环素耐药性均为97%,对头孢噻肟、庆大霉素的药物敏感性均为97%.宋内志贺菌对萘啶酸、四环素、复方新诺明均100%耐药;对阿莫西林、头孢噻肟、环丙沙星的敏感性均为100%.结论 2006年太原市志贺菌优势菌型为福氏志贺菌4c型,志贺菌不同血清型对几种常用抗菌药物出现不同程度的耐药性.
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应用脉冲场凝胶电泳技术对浙江省福氏4c型痢疾志贺菌的分型研究
目的 通过应用脉冲场凝胶电泳技术对浙江省痢疾志贺菌福氏4c(F4c)型菌株进行分子流行病学研究,耐药谱分析,为了解本地区菌型的变化提供资料.方法 60株F4c型志贺菌均按GB16002-1995标准鉴定分型并采用kirby-Bauer法检测其对13种抗生素的敏感性.参照美国疾病预防控制中心PulseNet USA的统一方法进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型并做同源性分析.结果 60株F4c型菌株都存在多重耐药,其中红霉素、利福平的耐药率高,达100.0%,其次是奈定酸、氨苄西林、多西环素,耐药率均在96.2%以上;丁胺卡那、庆大霉素敏感,其敏感率均在86.5%以上.脉冲场凝胶电泳分型60株试验菌株共分为24个型,1型36株占60.0%,且所有的暴发型菌株都为1型,2型2株占3.3%,其余22个型各为1株,各占1.7%.结论 F4c型志贺菌是2004年在浙江首次分离到,PFGE分型1型菌株占60.0%,有明显的优势,并且容易引起暴发,其余各型均为少见菌型.此次检测发现其多重耐药现象严重,这可能与浙江省F4c型菌痢病人迅速增多和高度散发有关,应引起临床和疾病控制部门的高度重视.
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194株志贺菌的流行病学分析及药物敏感调查
目的了解闵行区引发痢疾的志贺菌优势菌型及其药物敏感状况,为痢疾临床治疗和预防控制提供依据.方法采用血清凝集试验、菌种ATB鉴定仪系统生化鉴定和K-B法对从腹泻病人分离的志贺菌进行流行病学分析和药物敏感试验.结果 194株志贺菌中福氏志贺菌161株,宋内志贺菌33株.共分为8个血清型,其中福氏1a 46株,福氏2b 42株,福氏2a 19株,福氏x变种19株,福氏4c 30株,还有福氏4a、福氏5a、福氏5b共5株.复方新诺明耐药率89.69%、氨苄西林耐药率88.14%、氯霉素耐药率60.31%,头孢噻肟、丁胺卡那、头孢噻吩、头孢唑啉、庆大霉素、氟哌酸均敏感,耐药率均在10%以下.结论本地区志贺菌感染的优势菌型为福氏1a型和福氏2b型,而新型的志贺菌福氏4c型和宋内志贺菌今后应引起足够重视.药物头孢噻肟、丁胺卡那霉素、头孢噻吩、头孢唑啉可作为目前临床治疗痢疾的常用药物.
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2007年北京市昌平区细菌性痢疾菌群分布和耐药谱变化分析
目的 了解2007年北京市昌平区细菌性痢疾(菌痢)的病原体菌群分布及耐药特点,为制定预防控制措施、指导临床合理用药提供科学依据.方法 用SS和麦康凯琼脂培养基分离病原体筛选志贺菌,用生化试验和血清学方法 鉴定菌群和血清型分型.药敏试验采用临床实验室标准化协会(CISI,以前称NCCLS)推荐的Kirby-Bauer法.结果 2007年昌平区志贺菌菌型分布以D群宋内志贺菌为主,占62.75%;其次为B群福氏志贺菌,占35.29%,B群福氏志贺菌以F4亚型和F1亚型血清型为主;X亚型4株,占22.22%;C群鲍氏痢疾杆菌1株,占1.96%.药敏试验结果 :菌株对环丙沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星等7药物敏感;对氨苄西林、萘啶酸、庆大霉素、四环素、复方新诺明5种药物耐药.结论 D 群宋内志贺菌取代了既往的B群福氏志贺菌,成为2007年昌平区菌痢的主要流行菌群;B群福氏志贺菌F4亚型和F1亚型取代了既往的福氏2a亚型,成为新的流行血清型;昌平地区的志贺菌耐药谱与北京其他地区既有相似性,也有地区特点,临床上应根据本地区药敏结果 合理选择药物.
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2007-2011年江苏省南京市细菌性痢疾病原学监测结果分析
目的 对江苏省南京市2007-2011年细菌性痢疾的血清群(型)分布、耐药谱、毒力基因携带情况及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,为江苏省南京市细菌性痢疾的防控提供依据.方法 对从江苏省南京市2007-2011年各医院腹泻病患者中分离的75株志贺菌进行血清群(型)、耐药性和毒力基因检测,并进行PFGE分子分型.结果 75株志贺菌包括宋内志贺菌54株(72.0％),福氏志贺菌21株(28.0％),除2010年福氏X型为优势血清型外,其余年份宋内志贺菌为优势血清群；75株菌普遍对氨苄西林、四环素和磺胺甲恶唑耐药,耐药率在61.1％～95.2％之间；三重及以上耐药菌株占所有测试菌株的88.0％；毒力基因ipaH、Sen、setl、ial阳性率分别为100％、46.7％、24.0％、48.0％；福氏志贺菌优势毒力基因模式为Ⅰ型(66.7％),宋内志贺菌优势基因模式为Ⅶ型(61.1％)和Ⅳ型(25.9％)；宋内志贺菌分为20个PFGE基因型,其中以S7、S8、S1O三个带型为主,占宋内志贺菌的53.7％；相似度＞95％,可能来自于同一克隆系；福氏志贺菌分为17种带型,各带型较散在分布.结论 江苏省南京市志贺菌流行菌群不断变迁,宋内志贺菌有取代福氏志贺菌成为流行菌群的趋势；多重耐药现象严重；福氏志贺菌优势毒力基因模式为Ⅰ型、宋内志贺菌为Ⅶ型和Ⅳ型；PFGE型别呈现多元化流行特点.
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2009-2014年浙江省余姚市志贺菌菌型分布及毒力基因分析
目的 了解近年来浙江省余姚市志贺菌菌型变化及毒力基因分布特征.方法 对2009-2014年监测到的82株志贺菌进行血清分型,采用6对引物IpaH、ial、set1A、set1B、sen、virA分别对志贺菌中毒力相关基因进行检测.结果 2009-2014年共检出收集到志贺菌株82株,以宋内志贺菌(42.5％)和福氏志贺菌(57.5％)为主.ipaH、ial基因的携带率为100％,set1A、set1B、sen、virA基因的携带率分别为79.3％、76.8％、96.3％和91.4％,set1基因在福氏志贺菌的携带率明显高于宋内志贺菌.结论 余姚市流行的志贺菌优势血清型每年都有变化,毒力相关基因不同菌型之间存在差异.
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2012年中国大陆地区细菌性痢疾疫情特点与监测结果分析
目的 对2012年我国(未包括香港、澳门和台湾地区,以下同)细菌性痢疾(菌痢)疫情及监测结果进行分析,掌握疫情态势,了解不同地区菌型及菌株耐药情况,为菌痢的预防控制提供依据.方法 采用描述流行病学方法对2012年细菌性痢疾疫情及国家监测点上报的数据进行统计分析.结果 2012年发病率(15.29/10万)较201 1年下降13.22％.＜6岁及＞65岁人群发病率高于全国平均水平,其中0岁组婴幼儿发病率高(215.02/10万),其次为1岁组婴幼儿(99.83/10万).菌痢发病呈明显的季节性,4月病例数开始上升,6-9月达高峰.2012年报告的12起菌痢暴发疫情11起发生在学校;5起为食源性传播,4起为水源性传播;10起疫情经实验室确诊,其中8起由宋内志贺菌引起.2012年国家级监测点病原监测结果显示:以福氏志贺菌为主(69.93％),未分离到痢疾志贺菌和鲍氏志贺菌.福氏志贺菌以福氏2a为主(53.33％).菌型分布存在地区差异.分离到的志贺菌株耐药较为普遍,不同地区菌株耐药性存在差异.结论 2012年全国菌痢发病率延续1999-2011年的下降趋势,5岁以下儿童尤其是0岁组儿童发病率高,需要引起关注.随着耐药菌株增多及流行菌株的变迁,细菌性痢疾的防控形势依然严峻.
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北京市西城区引起感染性腹泻主要肠道病原对头孢菌素耐药状况分析
目的 结合流行病学资料了解和分析北京市西城区主要肠道病原对头孢类抗生素的耐药状况.方法 收集2008-2011年本地区引起感染性腹泻主要肠道病原187株,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测超广谱β-内酰胺酶类(extended spectrumβ-lactamaseas,ESBLs)耐药基因,明确基因型,阳性产物在GenBank上进行比对确定亚型;按照Kirby-Bauer法进行药物敏感性试验,测定对8种头孢类抗生素耐药情况.结果 187株肠道病原中,34株检出携带ESBLs耐药基因,其中志贺菌中检出33株,沙门菌中检出1株.18株病原携带OXA-1亚型耐药基因,11株病原携带CTX-M-14亚型,另有5株病原携带有2种ESBLs耐药基因;药敏结果显示,肠道病原对头孢噻吩耐药率高,为40％.对1种以上头孢类抗生素耐药的肠道病原中,志贺菌耐药率为81％,副溶血性弧菌耐药率为46％,沙门菌耐药率为33％;结合流行病学资料发现,20～29岁年龄组耐药菌株检出率高,为27％,其次为≥40岁组和＜10岁组,检出率分别为23％和21％.结论 本地区主要肠道病原中志贺菌耐头孢类抗生素水平高,检出携带ESBLs耐药基因菌株多;ESBLs耐药基因以OXA-1亚型和CTX-M-14亚型为主;耐药菌株以20～29岁年龄组检出率高.
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2006-2011年济南市志贺菌菌型分布及变迁分析
目的 了解济南市2006-2011年志贺菌菌型分布及变迁规律,为细菌性痢疾的预防控制提供依据.方法 按照《全国细菌性痢疾监测方案》的要求进行采样及系统检测.结果 福氏志贺菌占72.4％,为优势菌群；各年份中福氏菌所占比重逐步下降,B:D值呈下降趋势；F2a血清型所占比重大(占27.2％),X、Y变种近年有所增加.结论 2006 -2011年济南市志贺菌以B群和F2a型为主,宋内菌逐渐增加,提示近年来济南地区环境卫生和个人卫生有所改善,同时菌型日渐复杂,应当继续加强细菌性痢疾的监测.
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2007-2011年浙江省余姚市感染性腹泻志贺菌监测结果分析
目的 了解浙江省余姚市感染性腹泻患者中志贺菌感染状况.方法 采集感染性腹泻患者的粪便或肛拭标本,进行增菌、分离、生化鉴定、血清分型、药敏试验和PCR毒力基因检测.结果 2007-2011年共检验标本1360份,检出志贺菌36株,检出率为2.65％,其中福氏2a志贺菌4株,占11.11％；福氏2b志贺菌3株,占8.33％；福氏1d志贺菌11株,占30.56％；福氏Xv志贺菌12株,占33.33％；宋内志贺菌6株,占16.67％；检出的志贺菌对多种抗生素耐药.结论 2007-2011年引起余姚市细菌性痢疾主要病原菌是福氏志贺菌,其次为宋内志贺菌；福氏志贺菌有多种血清型,其中Xv血清型分离率高；药敏试验以氨基糖苷类、喹诺酮类及部分头孢类抗生素敏感性较好；毒力基因呈现多样性.
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浙江省温州地区志贺菌流行菌株的血清分型及耐药性分析
目的 调查志贺菌在浙江省温州地区流行的主要血清型和耐药性.方法 收集临床分离的志贺菌株进行生化鉴定、血清学分型和抗生素敏感性试验.结果 116株志贺菌中28株为宋内志贺菌,占24.1%;80株为福氏志贺菌,占68.9%(包括4株福氏变异株,占总数的3.5%),痢疾志贺菌7株占6.0%,鲍氏志贺菌1株占0.9%.宋内志贺菌对抗菌药物的敏感率依次为氟喹诺酮类(萘啶酸为14.4%)100%、第三、四代头孢为92.9%,对复方新诺明、萘啶酸、氨苄西林呈高耐药性.福氏志贺菌对诺氟沙星、环丙沙星、莫西沙星、洛美沙星、左氟沙星的敏感率为80%左右;对三、四代头孢的敏感率为97%,但头孢噻肟的敏感率仅为22.3%.鲍氏志贺菌出现严重耐药,只有亚胺培南和美洛匹宁敏感,其他均耐药.结论 温州地区志贺菌感染以福氏志贺菌和宋内志贺菌为主,福氏志贺菌中以福氏4c型为主,其次为血清2a型和2b型.福氏志贺菌对各种抗生素耐药性有增高趋势;并出现严重耐药菌株,必须引起临床重视.
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志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光聚合酶链反应快速检测方法的应用研究
目的 建立志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测技术,为从患者、食品和环境中快速分离和鉴定志贺菌提供技术支撑.方法 根据志贺菌ipaH基因序列设计一对特异性引物和TaqMan-MGB探针;通过对PCR扩增体系和反应条件的优化,建立志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测方法;用添加已知志贺菌浓度的样本验证方法敏感性;用志贺菌标准菌株、分离株以及大肠埃希菌、沙门菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌等致病菌验证方法特异性.结果 用本研究建立的志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PER检测方法检测志贺菌,其Ct值与模板浓度的对数值具有很好的对应关系(Y=-3.93×log(X)+37.34,R=0.999),低检测浓度为30 cfu/ml,3株志贺菌标准株,30株志贺菌分离株检测结果均为阳性;而沙门菌、副溶血性弧菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等91株其他细菌的Ct值均>35或扩增曲线成一平滑直线.与常规分离鉴定方法比较差异无统计学意义(P>0.05,χ2=0.27).对于纯菌和食品样晶整个检测过程仅需2 h和10 h.结论 志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测技术具有特异性强,敏感性高,易操作等优点,有很好的应用前景和研究价值.
关键词： 志贺菌 实时荧光PCR TaqMan-MGB探针 -
志贺菌的分子分型方法
细菌性痢疾是由志贺菌引起的一种急性胃肠炎,同时也是旅行性腹泻病的主要病种之一.根据WHO报道,在每年约1500万的发病病例中,99%出现在发展中国家,特别是在那些个人及公共卫生设施缺乏的地区.几乎所有的病死病例都出现在发展中国家[1].志贺菌分为四群:A群:痢疾志贺菌,B群:福氏志贺菌,C群:鲍氏志贺菌,D群:宋内氏志贺菌.
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临床分离志贺菌中产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因型及耐药性分析
目的 了解北京地区临床分离志贺菌携带CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因型及耐药特征.方法 收集2008-2011年本地区分离出的志贺菌83株,聚合酶链反应(PCR)检测CTX-M型ESBLs耐药基因,明确基因型,阳性产物序列在GenBank上进行比对确定基因亚型,并通过DNAman软件对核酸序列进行分析；对携带CTX-M型ESBLs耐药基因菌株按照Kirby-Bauer法进行药物敏感性试验,测定志贺菌对8种头孢类抗生素耐药情况.结果 83株志贺菌中,13株携带CTX-M型ESBLs基因,阳性率为15.66％.对DNA序列进行比对、分析均为CTX-M-9型中的CTX-M-14亚型,未发现单核苷酸多态性(SNPs)位点.药敏结果显示,13株携带CTX-M型ESBLs基因菌株对头孢噻吩、头孢唑林、头孢噻肟等头孢类抗生素耐药,对头孢西丁、头孢他啶、头孢吡肟和头孢哌酮等头孢类抗生素均敏感,部分菌株对氨曲南耐药.结论 本地区志贺菌中CTX-M型ESBLs以CTX-M-14亚型为主,基因结构稳定,携带CTX-M-14型ESBLs菌株呈多重耐药.
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2006-2011年杭州市萧山区腹泻儿童分离志贺菌血清型分布及耐药性变迁
目的 调查志贺菌在杭州市萧山区儿童腹泻患者中流行的主要血清型分布和耐药变迁,为临床治疗和预防提供参考依据.方法 对2006年1月至2011年12月浙江萧山医院临床分离自腹泻儿童志贺菌菌株,进行生化鉴定、血清学分型和抗生素敏感性试验,所有数据用WHONET 5.6软件进行回顾性分析.结果 318株志贺菌中221株(69.5％)为宋内志贺菌,96株(30.2％)为福氏志贺菌,鲍氏志贺菌1株(0.3％)；200株(62.9％)分离自年龄组为＜5岁的婴幼儿；志贺菌对氨苄西林的耐药率高达97.1％,对复方新诺明耐药率达88.8％,头孢噻肟耐药率为44.7％,未检出头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南和美罗培南耐药株,福氏志贺菌对环丙沙星和左旋氧氟沙星耐药率为44.8％和33.3％,而宋内志贺菌未检出氟喹诺酮类耐药株；福氏志贺菌和宋内志贺菌耐药率在哌拉西林、头孢他啶、头孢吡肟、复方新诺明和氟喹诺酮间差异有统计学意义(P＜0.01).结论 杭州市萧山区腹泻儿童志贺菌感染以宋内志贺菌为主,青霉素类和复方新诺明耐药率很高已不适合临床使用,含酶抑制剂抗生素是治疗志贺菌感染的首选药物,哌拉西林、头孢噻肟、环丙沙星和左旋氧氟沙星表现出耐药率上升趋势.
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食品中志贺活菌叠氮溴乙锭实时荧光聚合酶链反应技术研究
目的 利用叠氮溴乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)实时荧光聚合酶链反应(PCR)技术,建立一种简便、快速、特异、灵敏的在食品中检测志贺活菌的方法.方法 根据志贺菌ipaH基因保守序列设计特异性引物和探针.用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品EMA前处理条件.用已知菌验证志贺活菌检测的敏感性和志贺死菌检测的抑制性.用31株志贺菌、26株单增李斯特菌、24株沙门菌、25株副溶血弧菌、11株阪崎肠杆菌、10株致病性大肠埃希菌和1株大肠埃希菌验证方法的特异性和稳定性.同时用本研究方法和常规分离培养法,对30件模拟样品进行实样验证.结果 志贺活菌EMA实时荧光PCR方法的循环阈值(Ct) =32.10 ～3.19 xlog(菌量)(R2=0.994).低检测浓度为2.20 CFU/反应.对死菌DNA抑制效率≥99.97％.31株志贺菌Ct值低为15.04,高为26.54,而97株非志贺菌的Ct值均＞35或无Ct值(呈一条直线).重复试验Ct值变异系数＜3.30件模拟样品采用本研究方法和常规分离培养法的检测结果一致,但采用EMA实时荧光PCR方法耗时不超过7.5h,而常规分离培养方法则需要3～5d.结论 EMA实时荧光PCR技术是一种快速简便、特异性强、灵敏度高、仅检测志贺活菌的方法,建议在食品检测中推广应用.
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志贺菌属的编码赖氨酸利用基因簇缺失情况分析
志贺氏菌属和肠侵袭性大肠杆菌(Enteroinvasive Escherichia coli, EIEC)的一个典型的生化特征是不能够利用赖氨酸,编码赖氨酸代谢的基因簇位于细菌染色体上,由cadABC三个基因组成.
关键词： 志贺菌 cad ABC基因簇 基因缺失
