首页 > 文献资料
-
雄激素受体和卵泡刺激素受体在成年大鼠睾丸中的期依赖性表达
目的确定雄激素受体(AR)和卵泡刺激素受体(FSHR)在大鼠睾丸中的细胞定位和表达变化. 方法利用地高辛标记的cRNA探针,在成年大鼠睾丸冰冻切片上进行原位杂交;同时利用透光显微切割技术将成年大鼠曲细精管分为Ⅱ~Ⅵ、Ⅶ~Ⅷ、Ⅸ~Ⅻ、ⅩⅢ~Ⅰ4个阶段,提取总RNA,用α-32P标记的cDNA探针进行斑点杂交,观察A R和FSHR mRNA表达的细胞定位和期依赖性变化.利用图像分析系统,对阳性杂交信号单位面积平均辉度进行定量分析. 结果 AR mRNA阳性杂交信号位于支持细胞和间质细胞,于Ⅶ~Ⅷ期强 ,Ⅸ~Ⅰ期弱;FSHR mRNA阳性杂交信号位于支持细胞,于ⅩⅢ~Ⅰ期强, Ⅶ~Ⅷ期弱.各阶段之间具有非常显著性差异(P<0.01). 结论 AR和FSHR期依赖性表达的不同规律提示T(睾酮)和FSH(卵泡刺激素 )作用于精子发生的不同阶段,说明睾酮和卵泡刺激素协同作用调节成年大鼠的精子发生. 这一结论将为人类生育调控和不孕症的治疗提供新思路.
-
凋亡相关基因bak在原发性肝癌中的表达及意义
目的研究细胞凋亡相关基因bak在原发性肝癌组织中的表达,探讨bk基因在原发性肝癌发生演变过程中的意义.方法采用原位分子杂交技术检测46例原发性肝癌组织中bak mRNA的分布及表达.结果在46例原发性肝癌组织中,bak mRNA的检出率为58.7%(27/46);在16例癌旁组织中,9例有bak mRNA的表达(56.3%);在4例正常肝组织标本中,仅1例有bakmRNA的弱表达.在癌组织与癌旁组织中,bak基因表达无显著差异(P>0.05);但在原发性肝癌中,bakmRNA的表达Ⅱ级组织强于Ⅲ级组织(P<0.05).结论 bak mRNA的表达可能与原发性肝癌的分化程度有关,并在其发生过程中起着某种作用.
-
PE、EV71及CoxA16基因探针的制备
目的 制备地高辛标记基因探针,利用分子杂交试验同时检测手足口病患者粪便标本中的肠道病毒(Pan-enterovirus,PE)、肠道病毒71型(Enterovirs 71 EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsachie virus,CoxA16). 方法 根据GenBank已发表的基因序列,分别在PE、EV71、CoxA16保守区设计3对特异性寡核苷酸引物,进行实时荧光定量PCR检测.从PE、EV71、Co xA 16阳性标本中分离病毒,提取RNA,以RT-PCR扩增产物作为基因探针的目的基因,采用随机引物法进行Digxigenin-11-dUTP标记,采用分子杂交试验检测3种基因探针的灵敏性和特异性. 结果 RT-PCR分别扩增出116、226、208 bp目的基因片段,经标记后作为检测PE、EV71、CoxA16的3种高纯度的基因探针,对相应病毒RNA的低检出限均为1 pg,可分别与PE(+)、EV71(+)、CoxA16(+)标本提取的RNA发生特异性杂交,与乙型脑炎病毒、诺如病毒、轮状病毒、H3N2、甲型H1N1流感病毒的核酸无杂交反应. 结论 制备的PE、EV71及CoxA16基因探针灵敏、特异,操作简单,适用于手足口病病原的实验室检测.
-
分子医学时代的外科病理学
20世纪70年代初,分子生物学、细胞和分子遗传学的发展,已将这些新知识、新理论和新技术应用到人类疾病的研究,从而诞生了病理学的一个新的分支--分子病理学.核酸分子杂交、比较基因组杂交(CGH)、荧光原位杂交(FISH)、聚合酶链反应(PCR)及其衍生技术(如RT-PCR、定量PCR等)和DNA测序等技术逐渐渗入到外科病理学,并已应用于肿瘤的诊断和分型、肿瘤治疗选择和预后评估、遗传性疾病的诊断、感染性疾病的病原体证实等方面.
-
拉米夫定--部分调节HepG2.2.15细胞干扰素诱导基因表达
为了解抗病毒核苷类似物拉米夫定(3TC)处理的Hep.2.15细胞干扰素(IFN)抗病毒基因表达谱以及3TC对IFN信号转导途径的影响而开展此项研究.具体方法:将培养的Hep2.2.15细胞用3TC处理,再以IFN-α刺激6 h,分离细胞总RNA,经逆转录、32P标记后与尼龙膜上的探针基因芯片进行分子杂交--Macroarray法,并以此来分析3TC处理的Hep2.2.15细胞IFN抗病毒基因表达谱.用ELISA、Dot b1ot、Southern blot分析3TC处理的Hep2.2.15细胞分泌HBV抗原、细胞外HBV DNA以及细胞内复制中间体HBVDNA.Northerm blot证实单个IFN抗病毒基因如MxA、2'5'-寡腺苷酸合成酶(2'5'-OAS)以及IFN信号转导途径分子STAT1等表达情况.
-
分子生物学技术新进展
分子生物技术的发展,衍生出DNA测序、DNA突变以及基因定位和克隆的各种方法.生物芯片则是当代生物技术的新发展,它对基础研究以及在医学上对疾病分子的探索,开拓了临床新的诊断和治疗手段.该文就这些技术和发展趋势进行综述.
-
原位杂交检测豚鼠巨细胞病毒mRNA方法的建立
人巨细胞病毒(HCMV)宫内感染对子代的影响越来越引起人们的重视[1],但是,HCMV宫内感染机制尚不明确.由于CMV具有严格的种属特异性,其动物模型中,豚鼠巨细胞病毒(guinea pig cytomegalovirus,GPCMV)感染的表现与HCMV感染极为接近,且可经胎盘垂直传播导致宫内感染,有研究者已经建立GPCMV宫内感染动物模型探讨HCMV的宫内感染机制[2,3].本研究采用地高辛标记的三相寡核苷酸探针进行原位杂交,从病毒基因转录水平检测豚鼠亲代和子代标本中GPCMV晚期mRNA,在基因水平上建立一种稳定、快速、敏感、特异、安全且易于操作的分子杂交试验方法,为GPCMV宫内感染模型的全面、深入研究提供有价值的试验手段.
-
微阵列技术及其在消化系疾病研究中的应用进展
微阵列技术是近年来兴起的一项前沿生物技术,他利用分子杂交的原理,将生物学中许多不连续的分析过程,移植到固相的递质芯片上,进行样品的多方位分析,首次提供了高通量或平行监测基因表达变化和功能的新方法.已广泛应用于基因表达分析、新基因发现及功能研究、基因组文库作图、基因突变及多肽性分析、疾病诊断、药物筛选、基因测序等领域.利用基因微阵列研究消化系统疾病将会有助于从整体水平上认识疾病发生中相应的分子事件,更深刻地了解消化系肿瘤与疾病的基因变化路径和机制.本文综述了微列阵技术原理及近年来在消化系疾病研究中的应用.
-
尤文肉瘤与滑膜肉瘤的基因诊断
目的检测中国人尤文肉瘤中融合基因EWS-FLI1/ERG和滑膜肉瘤中融合基因SYTSSX1/SSX2在mRNA水平的表达,在基因组DNA水平检测尤文肉瘤中EWS基因重排,为建立骨与软组织肉瘤分子诊断方法打下基础.方法对4例尤文肉瘤、1例小圆细胞肉瘤和4例滑膜肉瘤的标本,应用RT-PCR方法检测其各自的融合基因表达;对3例尤文肉瘤和1例小圆细胞肉瘤应用Southem blot方法检测EWS基因的重排.结果 4例尤文肉瘤中,3例表达EWS-FLI1基因融合,1例未检测到融合基因表达;1例小圆细胞肉瘤检测到EWS-FLI1基因融合;4例滑膜肉瘤中,1例表达SYT-SSX1基因融合,2例表达SYT-SSX2融合基因,1例未发现融合基因表达.2例尤文肉瘤和1例小圆细胞肉瘤有EWS基因重排.结论在mRNA水平,中国人尤文肉瘤有特异性融合基因EWS-FLI1表达,滑膜肉瘤有特异融合基因SYT-SSX1/SSX2表达;在基因组DNA水平,尤文肉瘤有EWS基因重排.RT-PCR是一项相对简单、快速、准确、成功率高的分子诊断方法,可应用于肿瘤的诊断与鉴别诊断.
-
脑胶质瘤中pRb表达与CDK4、MTS基因异常的相关性研究
目的 探讨脑胶质瘤中CDK4、MTS基因异常及pRb表达改变与脑胶质瘤发生发展的相关性。方法 应用PCR-SSCP、分子杂交及免疫组化技术检测68例不同病理分级脑胶质瘤。结果 p16基因表达阴性或pRb无表达或CDK4扩增多为单独发生,其中III-IV级肿瘤中pRb、p16蛋白失表达或p15基因缺失或CDK4基因扩增的综合发生率为89%(42/47)。结论 脑胶质瘤中细胞生长周期“关卡”蛋白p16、pRb、或CDK4单因素的异常比交错并发的改变更为常见,p16、pRb失活或CDK4扩增的任一改变,即可能破坏细胞增殖的正常调控,促发脑胶质瘤细胞的癌性增殖或恶性演变。
-
+Gz诱导热休克蛋白表达及其对+Gz致脑损伤保护作用的研究
目的探讨不同+Gz 重复暴露后,大鼠不同脑区HSP70表达强度和时程的变化规律,及其与正加速度致脑损伤的相关性.方法将雄性SD大鼠随机分为对照组、+2 Gz、+4 Gz、+6 Gz、和+10 Gz暴露组.分别在暴露后6 h,10 h, 1 d,2 d,4 d和6 d处死取脑,观察HSP70和HSP70 mRNA在鼠脑不同部位的表达以及脑神经元形态学的变化.结果低G值(+2 Gz)下,HSP70表达强度弱,持续时间短,但范围较广;高G值(+10 Gz)下,表达仅局限在下丘脑部位,呈中等强度反应;中等强度G值(+4 Gz和+6 Gz)下,表达范围广,持续时间长.各组表达峰值均在暴露后1 d左右,但暴露1次组2 d后强度明显减弱,而暴露3~5次组在2 d后仍然维持较高水平.不同+Gz暴露后HSP70 mRNA的表达在分布上与蛋白表达无明显变化,但其表达高峰提前(10 h),持续时间缩短.直接+10 Gz/5 min暴露后,在皮层、海马、丘脑等部位均可见到变性的神经元.而经过+4 Gz/3 min 3 次和5次预暴露再作+10 Gz/5 min暴露组,变性神经元的数目在顶叶皮层、梨状皮层、海马和丘脑下部等部位明显减少.结论 +4 Gz和+6 Gz诱导的HSP70表达比+2 Gz和+10 Gz诱导的HSP70表达强,持续时间也长.+4 Gz/3 min反复暴露3次和5次,再暴露于+10 Gz/5 min,其神经元损伤程度明显轻于+10 Gz/5 min单次暴露.
-
肺纤维化大鼠肺组织转化生长因子β1和前胶原基因的表达
急性肺泡炎是肺纤维化病变基础,在肺泡炎形成过程中涉及炎性细胞、免疫效应细胞和细胞因子。体外试验证明肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGF-β1)可上调人胚肺成纤维细胞前胶原mRNA的表达[1,2],提示急性肺泡炎时这些细胞因子与肺纤维化发生有一定的因果关系。我们用博莱霉素A5诱发大鼠肺纤维化,并制成动物模型,对大鼠肺组织中TGF-β1,前胶原Ⅰ和前胶原 Ⅲ的mRNA进行观察,以探讨它们与大鼠肺纤维化的关系。 一、材料与方法 1. 动物与动物模型: 25只 Wistar雄性大鼠,体重140~170 g,购自中国医学科学院动物中心。将大鼠随机分为5组,每组5只。以乙醚麻醉大鼠,其中1组为正常对照组经气管内一次性灌注生理盐水;其余各组经气管内一次性灌注博莱霉素A5 5 mg/kg,博莱霉素3 d组,7 d组,14 d组,30 d组。于灌注后3、7、14、30 d处死大鼠,取右侧肺液氮速冻待检,左侧肺于100 g/L的中性甲醛液中固定,HE染色。 2.分子杂交及材料来源:分子杂交按参考文献[3]介绍的方法进行。cDNA 探针片段由北京阜外心血管病医院杨方博士惠赠,此片段是由含编码人的前胶原Ⅰ和前胶原Ⅲ重组质粒菌种PH CAL1 TU,PHFS3 中提取的;TGF-β1 cDNA片段由北京市肿瘤研究所高崇峰提供,β-肌动蛋白(β-actin)cDNA 片段购自中山生物技术公司。
-
芯片实验室的研究近况
由于"人类基因组计划"的成功实施,基因及其生化指标的信息量越来越大.人们也不再满足于由几个或数十个指标来了解自己的健康状况,高通量且快速的测定方法已成迫切需要.同时,世界上大多数国家都面临着降低医疗费用的压力.临床检测方法的低耗材、低费用日益成为重要议题.八、九十年代基因芯片技术的建立,可以在1cm2的芯片上,同时检测上万个甚至更多的基因,掀开了基因检测技术新的一页.但这仅限于检测基因,所完成的仅是基因检测中大通量的分子杂交工作.
-
福建三明地区女性人乳头瘤病毒感染状况的调查
目的:了解福建三明地区女性人乳头瘤病毒(HPV)感染状况,为宫颈癌的防治提供初步依据.方法:采用基因芯片技术对2017年1-8月到我院妇科门诊就诊的2 425例女性进行HPV基因分型检测,并对检测结果进行分析.结果:2 425例女性中HPV阳性患者657例,总感染率为27.09%,在HPV阳性人群中高危型HPV感染率排在前3位的依次是HPV 52型(5.44%)、58型(4.74%)和16型(3.71%);657例感染患者中单一感染例数413例(62.86%),二重感染及以上244例(37.14%);16~25岁、26~35岁、36~ 45岁、46 ~ 55岁、≥55岁各年龄段人群中HPV感染率分别为38.21%、23.70%、27.13%、24.29%、39.74%,差异具有统计学意义(P <0.000 1).结论:三明地区HPV感染率为27.09%,常见的HPV亚型为HPV52、58和16型,以单一感染为主.HPV感染存在2个年龄高峰为≥55岁和16 ~25岁,具有明显的年龄异质性.
-
聚合酶链反应法检测宫颈分泌物中病原微生物样本采集方法研究
聚合酶链反应(PCR)技术以其基因扩增的灵敏性、分子杂交的特异性和光谱技术的精确定量等优点,在血液和体液病毒、病原微生物定量检测中发挥了重要作用.但是长期以来,由于人们对宫颈分泌物定量检测重视程度较差,文献[1,2]曾研究过用接种环和棉拭子取样进行阴道菌群的定量,但由于分泌物的黏度、密度不同,用接种环定量体积的方法本身不合理,棉拭子取样由于没有好的释放方法,结果均不理想.文献[3,4]报道常常可看到用定量试剂盒检测未经定量的分泌物,而得出的结果却冠以"定量"二字.这对于拥有现代化仪器的实验室是一种资源浪费,同时对诊断也是一种误导.为了向临床和科研提供真正定量的分析结果,我们对宫颈分泌物定量分析问题进行了研究,现报告如下.
-
幽门螺杆菌检查方法及诊断价值
目前用于检查幽门螺杆菌(HP)感染的方法很多,大体可分为侵入性和非侵入性两类.侵入性检查法是指行胃镜检查时直接检查HP或活检胃粘膜做HP培养、快速尿素酶试验,涂片、组织学检查、分子杂交或PCR等检查方法.非侵入性诊断方法包括血清抗HP抗体检测、14C或13C尿素呼吸试验等.现将HP的检查方法及诊断价值探讨如下.
-
应用CBA方法检测一例SARS患者血清Th1/Th2类细胞因子
细胞因子(Cytokine,CK)是由机体的免疫细胞和非免疫细胞合成和分泌的多肽类小分子,分子量在15 kD~80 kD之间.CK能调节多种细胞产生生理效应,在异常情况下也可导致病理反应.检测细胞因子的技术大致可分为3类:1.生物活性检测法;2.免疫学细胞因子直接定量法;3.分子杂交检测法.
-
脑膜炎患者脑脊液中基因芯片法鉴定出金色分枝杆菌1例报告
临床上不少非结核分枝杆菌病被漏诊或误诊为结核病,脑脊液中检出非结核分枝杆菌非常少见.我院分枝杆菌菌种鉴定基因芯片检测系统通过借助核酸分子杂交配对的特性对DNA样品的序列信息进行高效的解读和分析,可以对目前国内发病率较高的17种分枝杆菌进行菌种鉴定,具有较好的临床辅助意义.现报告1例经基因芯片法检测脑脊液得以确诊的病例,供参考.
-
分子诊断常用技术50年的沿革与进步
分子诊断技术即是利用分子生物学方法对人类及病原体的各类遗传物质进行检测,以帮助对疾病进行诊断。自液相杂交技术诞生以来,分子诊断已走过了50年的历程。本文将以技术原理出发对分子诊断技术进行归类与评价,以对目前临床常用技术的沿革进行回顾,并从技术层面对分子诊断的未来进行展望。
-
逆向斑点分子杂交——一种同时检测HBV DNA及HBV DNA聚合酶的新方法
自1983年以来,以直接点样的、简化的斑点分子杂交方法检测乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)DNA,已广泛在临床应用[1~6].HBVDNA检测的重要性也已被确认,成为判断乙肝病毒带毒者感染状态及垂直传播免疫阻断的重要标志之一.然而,HBV DNA聚合酶的测定,尚有待改进.理论上讲,只有同时检出HBVDNA和DNA聚合酶的共存,才是确证HBV感染病毒存在可靠的证据.作者曾报道一种同时检测ⅡBV DNA及聚合酶的方法(7),但由于需要凝胶电泳等较繁复的步骤,在临床广泛应用上尚有困难.本文报道一种新的逆向斑点分子杂交方法,不仅简化了步骤,而且适合于临床应用,将为判定HBV带毒者的感染状态及防治监测提供重要手段.