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脑胶质瘤中pRb表达与CDK4、MTS基因异常的相关性研究
目的 探讨脑胶质瘤中CDK4、MTS基因异常及pRb表达改变与脑胶质瘤发生发展的相关性。方法 应用PCR-SSCP、分子杂交及免疫组化技术检测68例不同病理分级脑胶质瘤。结果 p16基因表达阴性或pRb无表达或CDK4扩增多为单独发生，其中III-IV级肿瘤中pRb、p16蛋白失表达或p15基因缺失或CDK4基因扩增的综合发生率为89%(42/47)。结论 脑胶质瘤中细胞生长周期“关卡”蛋白p16、pRb、或CDK4单因素的异常比交错并发的改变更为常见，p16、pRb失活或CDK4扩增的任一改变，即可能破坏细胞增殖的正常调控，促发脑胶质瘤细胞的癌性增殖或恶性演变。
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氟化钠对人成骨细胞细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白依赖性激酶4基因组蛋白乙酰化水平的影响
目的 构建人原代成骨细胞体外氟中毒模型,观察不同剂量氟化钠(NaF)对入成骨细胞细胞周期蛋白D1 (CyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)基因组蛋白乙酰化水平的影响,探讨氟骨症发生发展的分子机制.方法 收集骨科外伤手术健康人(车祸)骨组织,通过酶消化法分离人原代成骨细胞,经鉴定后作为实验对象.以0、125、250、500及1 000 μmol/L NaF处理细胞72 h.定量染色质免疫共沉淀技术检测CyclinD1、CDK4基因转录调控区ChIP1区域及编码区ChIP2区域(对照区)组蛋白H3K9、H3K14、H4K12、H4K16乙酰化水平.结果 ①分别以0、125、250、500及1 000 μmol/L NaF处理细胞72 h后,CyclinD1基因转录调控区ChIP1区域组蛋白H3K9乙酰化水平分别为1.152±0.104、1.174±0.187、1.090±0.176、1.170±0.197、1.147±0.097,组间比较差异无统计学意义(F=0.524,P＞0.05);H3K14乙酰化水平分别为1.495±0.117、1.465±0.069、1.470±0.187、1.760±1.089、1.341±0.443,组间比较差异无统计学意义(F=0.841,P＞0.05);H4K12乙酰化水平分别为1.239±0.286、0.702±0.063、0.765±0.370、1.011±0.321、1.319±0.026,组间比较差异无统计学意义(F=2.329,P＞0.05);H4K16乙酰化水平分别为1.452±0.217、1.621±0.165、1.462±0.090、1.510±0.146、1.564±0.154,组间比较差异无统计学意义(F=0.123,P＞ 0.05).②CDK4基因转录调控区ChIP1区域组蛋白H3K9乙酰化水平分别为1.472±0.163、1.580±0.161、1.585±0.132、1.451±0.136、1.560±0.039,组间比较差异无统计学意义(F=0.461,P＞0.05);H3K14乙酰化水平分别为0.919±0.149、0.900±0.059、0.911±0.162、0.663±0.049、0.841±0.122,组间比较差异无统计学意义(F=0.974,P＞0.05);H4K12乙酰化水平分别为0.456±0.142、0.911±0.126、0.969±0.185,1.110±0.146、0.931±0.141,组间比较差异无统计学意义(F=5.459,P＞0.05);H4K16乙酰化水平分别为1.315±0.083、1.374±0.153、1.423±0.055、1.300±0.132、1.385±0.696,组间比较差异无统计学意义(F=1.663,P＞ 0.05).③CyclinD1、CDK4基因编码区ChIP2区域组蛋白H3K9、H3K14、H4K12、H4K16乙酰化水平,各NaF处理组间比较差异均无统计学意义(F=0.392、0.823、0.999、0.397,0.705、0.049、1.065、0.196,P均＞0.05).结论 在氟处理的人原代成骨细胞中,未观察到细胞周期调控基因CyclinD1、CDK4转录调控区组蛋白乙酰化参与其表达调控.
关键词： 氟 成骨细胞 CyclinD1基因 CDK4基因 组蛋白乙酰化 -
干扰基因BMI-1表达对食管癌细胞放射敏感性的影响
背景与目的：B细胞特异性的莫洛尼白血病毒插入位点1(B-cell-specific Moloney leukemia virus insertion site 1，BMI-1)期在放疗后DNA损伤中发挥重要作用。该研究采用siRNA干扰技术降低食管癌TE13细胞中BMI-1基因表达，探讨BMI-1的表达对X射线照射后食管癌细胞放射敏感性的影响。方法：针对BMI-1 mRNA序列，3对有效的干扰序列(siRNA1、siRNA2和siRNA3)和阴性对照序列由公司设计合成，瞬时转染食管癌TE13细胞，命名为BMI-1 siRNA1、BMI-1 siRNA2和BMI-1 siRNA3共3组，转染阴性对照序列组命名为NC组，未转染组命名为对照组。采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测TE13各组中BMI-1在mRNA和蛋白水平的表达。采用MTT法检测BMI-1基因转染对TE13细胞增殖能力的影响。克隆形成实验检测BMI-1对TE13放射敏感性的作用。流式细胞术测定siRNA干扰BMI-1基因对细胞周期和凋亡分布的影响。RT-PCR和Western blot检测细胞内p16、CDK4基因和蛋白表达水平。结果：3对干扰序列使人BMI-1基因在mRNA和蛋白表达水平低于对照组和NC组，尤以siRNA3组效果明显。选择siRNA3作为干扰组进行MTT和流式细胞术。MTT结果表明，BMI-1 siRNA3转染后BMI-1的低表达对细胞的增殖能力无明显影响；克隆形成实验的结果显示，空白对照组、NC组、干扰组的D0分别为2.514、2.506和1.761 Gy；Dq值分别为2.694、2.664和2.122 Gy；外推数N值分别为2.920、2.895和3.336；SF2值分别为0.8268、0.8231和0.6255，可见对照组和空载组间放射敏感性差异无统计学意义(P>0.05)，而干扰组细胞的放射敏感性高于对照组和NC组；流式细胞术分析显示，6 Gy照射后，BMI-1 siRNA组G0/G1期比例明显高于对照组和空载组，G2/M期显著低于对照组和NC组，而未照射时BMI-1的低表达对细胞周期无明显影响。干扰BMI-1基因后TE13细胞p16基因和蛋白水平升高(P<0.01)，CDK4基因和蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论：siRNA干扰技术有效地抑制了食管癌细胞TE13中BMI-1基因的表达，联合X线照射后显著消除了细胞周期在G2/M期的阻滞，增加了食管癌的放射敏感性，其诱导作用与p16和CDK4基因和蛋白表达有关。
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细胞外信号调节激酶信号通路对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞周期的影响
目的观察特异性丝裂原细胞外信号反应激酶1(MEK1)阻断剂(PD98059)对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(HSC)增殖及细胞周期的影响,并探讨其作用机制.方法用不同浓度的PD9 8059对乙醛刺激的HSC进行处理;以四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,逆转录聚合酶链反应方法检测HSC内细胞周期蛋白-D1(Cyclin D1)mRNA和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK4)mRNA的表达.结果20、50、100 μmol/L的PD98059均能显著且剂量依赖性地抑制乙醛刺激的HSC增殖,3组A值分别为0.109±0.020、0.081±0.010、0.056±0.020,与乙醛组A值0.146±0.030相比较,F=31.385,P＜0.05; 20、50、100 μmol/L的PD98059可显著抑制乙醛刺激的HSC由G1期进入S期,Go/G1期细胞百分比逐渐升高,3组G0/G1期细胞百分比分别为(61.9±6.3)%、(64.1±3.3)%、(70.9±4.8)%,与乙醛组(55.2±4.4)%相比较,F=16.402,P＜0.05; 50、100 μmol/L的PD98059能显著抑制乙醛刺激的HSC内Cylin D1 mRNA表达,2组平均光强度比值分别为0.56±0.04,0.46±0.03,与乙醛组0.65±0.07相比较,F=68.758,P＜0.05; 50、100μmo1/L的PD98059能显著抑制乙醛刺激的HSC内CDK4mRNA表达,2组平均光强度比值分别为0.39±0.07,0.33±0.05,与乙醛组0.50±0.06相比较,F=29.406,P＜0.05.结论细胞外信号调节激酶信号通路是调控乙醛刺激的大鼠HSC增殖及其细胞周期的重要通道,可能与调控Cyclin D1mRNA和CDK4mRNA表达有关.
关键词： 肝纤维化 有丝分裂素激活蛋白激酶类 大鼠 乙醛 肝星状细胞 cyclin D1基因 CDK4基因
