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烟草致癌物诱发人支气管上皮恶性转化细胞中p16基因的变化
采用银染PCR-SSCP方法检测NNK诱发BEP2D恶性转化细胞中p16基因变化.与对照组比较,转化细胞中p16基因的E1.β外显子带型出现变异,而第1～3外显子均未见泳动变位,提示E1.β外显子突变和/或缺失所致细胞周期失调是NNK诱发人类支气管上皮细胞癌变的可能原因之一.
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p16与Bmi-1在非小细胞肺癌中的表达及与临床病理特征的相关性
目的:分析p16与Bmi-1基因在非小细胞肺癌中的表达及与临床病理特征的相关性.方法:将60例非小细胞肺癌细胞块标本作为试验组,将60例正常癌旁组织作为对照组,选择免疫组化法对两组中的p16与Bmi-1基因表达进行检测,比较分析检测结果.结果:在p16基因总阳性率方面,试验组显著低于对照组(P＜0.05);低分化肿瘤和高、中分化肿瘤的p16阳性率比较差异有统计学意义(P＜0.05);在Bmi-1基因总阳性率方面,试验组显著高于对照组(P＜0.05),在有无淋巴结转移中,Bmi-1基因表达阳性率比较差异有统计学意义(P＜0.05);腺癌和肺鳞癌中的p16与Bmi-1基因表达表现为负相关.结论:正常肺组织中的p16基因表达为阳性,在鳞癌和肺腺癌中的表达显著下降,其表达随着肿瘤的分化变差而下降.正常组织中并无Bmi-1表达,癌组织中的表达显著,如果肿瘤存在淋巴结转移,其表达也显著上升.
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脑胶质瘤中P16与增殖细胞核抗原蛋白的表达及意义
目的:探讨P16及增值细胞核抗原(PCNA)在人脑胶质瘤中的表达.方法:用免疫组织化学方法检测114例不同级别中的P16和PCNA蛋白的表达,并与肿瘤不同级别的关系.结果:P16蛋白表达缺失在Ⅲ级(65.5%)、Ⅳ级(91.3%)脑胶质瘤中显著高于Ⅰ～Ⅱ级的表达缺失(33.3%)(P＜0.01);PCNA蛋白表达在Ⅲ级(56.3%)、Ⅳ级(84.8%)脑胶质瘤中的表达强度显著高于Ⅰ～Ⅱ级(16.7%)的表达强度(P＜0.01).结论:P16、PCNA蛋白的表达异常可用以判断人脑胶质瘤的生物学行为.
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Survivin及P16基因在非小细胞肺癌中的表达及相关性
目的:探讨Survivin基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与P16蛋白表达的相互关系.方法:应用免疫组织化学法检测120例非小细胞肺癌组织及20例肺良性病变组织中survivin、P16蛋白的表达情况.结果:Survivin蛋白在61.7%的NSCLC组织中有表达,在肺良性病变组织中不表达,且survivin的表达与肺癌患者的TNM分期有关;P16基因在肺良性病变组织中不表达,其阳性表达率在鳞癌中为17.65%,在腺癌中为53.85%,差异具有显著性(P＜0.05).结论:Survivin基因在非小细胞肺癌中表达上调,提示其对NSCLC的发生发展起重要作用,提示可作为判断病情及预后的指标.Survivin基因与抑癌基因P16的蛋白表达呈正相关,二者可能在肺癌中起协同作用.
关键词： 非小细胞肺癌 Survivin基因 p16基因 免疫组织化学 -
口腔癌与抑癌基因p16的研究进展
口腔癌是一种很常见的肿瘤,约占口腔颌面部恶性肿瘤80%以上.而p16基因是一种重要抑癌基因,到目前为止,已经在人类的许多种恶性肿瘤及头颈肿瘤内检测到p16基因的改变[1].本文主要针对与口腔癌发生、发展密切相关的p16抑癌基因的研究进展做一综述.
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青藤碱对肺癌模型大鼠抑癌基因P16和P53的影响
目的:本研究旨在探讨青藤碱对肺癌模型大鼠抑癌基因P16和P53的影响机制.方法:雄性SD大鼠40只,均采用左肺注射WALKER-256癌细胞悬液方法建立大鼠肺癌移植性模型,3周后筛选成瘤的大鼠30只,随机分为模型组、环磷酰胺组和青藤碱治疗组,另取健康SD大鼠10只设为正常对照组.青藤碱治疗组背皮下注射10％青藤碱治疗10周,环磷酰胺组注射环磷酰胺作为阳性对照,同时正常对照组和模型组注射生理盐水.治疗10周后取各组肺肿瘤测量瘤体积、瘤质量并计算抑瘤率;取肿瘤组织匀浆,流式细胞仪检测瘤体组织WALKER-256癌细胞在G1、G2、M和S四周期细胞比例;采用免疫组化法检测P16和P53蛋白阳性表达率,逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)测定P16mRNA和P53mRNA表达.结果:与模型组比较,青藤碱组抑瘤率达30.15％,P16和P53蛋白阳性表达率明显降低,P16mRNA和P53mRNA低表达,S期细胞比值、瘤体积和瘤质量明显降低、G1和G2期细胞比值提高(P＜0.05).结论:青藤碱可能通过影响抑癌基因P16和P53表达,调节G1和G2和S期细胞比值而起到抑制大鼠WALKER-256移植性肺癌肿瘤细胞的分化和增殖.
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p16基因上游序列与急性白血病细胞核基质蛋白结合的临床
目的 采用DNA-蛋白质杂交(Southwestern blot)技术研究p16基因上游序列-869bp中是否含有核基质结合元素,并分析p16基因上游序列在急性白血病细胞组与对照组内与核基质蛋白结合的情况.方法 p16基因上游序列与急性白血病细胞核基质蛋白结合的实验研究.结果 p16基因上游序列与核基质蛋白的结合在急性白血病组与对照组间存在差异.结论 p16基因外显子1α上游-869bp片段可以与核基质蛋白结合,表明该片段存在MAR序列,对p16基因表达调控具有重要意义.
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参黄冲剂对衰老患者抗氧化作用及P16基因mRNA表达的影响
目的 观察参黄冲剂对衰老患者P16基因mRNA定量表达、血清一氧化氮(NO)和超氧化物歧化酶(SOD)含量的影响,探讨其延缓衰老作用机制.方法 将60例衰老患者随机分为参黄冲剂组和对照组,每组30例.在常规疾病治疗基础上,参黄冲剂组加用参黄冲剂,对照组加用甲磺酸双氢麦角毒碱片,均连续服用8周.观察治疗前后患者临床症状及P16基因mRNA定量表达、血清NO和SOD含量变化.结果 治疗后参黄冲剂组P16基因mRNA扩增曲线起始循环数明显变大(P＜0.05),P16基因mRNA定量表达与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).参黄冲剂组治疗后血清NO含量和SOD水平明显升高(P＜0.05),且明显高于对照组(P＜0.05).参黄冲剂组总有效率为80.0％(24/30),对照组为43.3％(13/30),差异有统计学意义(P＜0.01).结论 参黄冲剂可有效改善衰老患者的临床症状,提高日常生活能力,提高血清NO含量和SOD活性,减少P16基因mRNA的表达,其机制可能是通过抑制衰老细胞的增殖而起到延缓衰老的作用.
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肾癌中P16表达的变化及其意义
目的 探讨抑癌基因P16纯合性缺失与肾癌发生发展的关系.方法 用RT-PCR等方法检测24例肾细胞癌和10例对照组(非癌症肾组织)P16基因mRNA的表达.结果 在24例肾癌中,P16基因表达缺失14例(58.3％),中等阳性表达6例(25％),弱阳性表达4例(16.7％).而对照组均呈强阳性表达(100％).P16基因与肾癌病理分级无相关性,与临床分期有显著相关(P＜0.05).结论 抑癌基因P16在肾细胞癌的生长、浸润和转移过程中可能起重要作用,对肾脏恶性肿瘤的诊断、治疗和预后的判定,可能具有潜在的临床价值.
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5-Aza-CdR对人结肠癌Caco-2细胞系P16基因甲基化状态及其生物学表型的影响
目的 观察人结肠癌Caco-2细胞系P16基因启动子区甲基化状态,并探讨去甲基化制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导高甲基化失活的P16基因重新表达的可能性及其对细胞生长的影响.方法 用不同浓度的5-Aza-CdR处理Caco-2细胞系,MSP法检测用药前后P16基因的甲基化状态,RT-PCR方法检测P16基因mRNA表达.MIT法观察细胞生长速度,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率.结果 P16基因在人结肠癌细胞系Caco-2中启动子区呈甲基化状态,经过5-Aza-CdR处理后,P16基因启动子区呈去甲基化状态,其mRNA重新表达.CpC岛去甲基化后能明显地抑制细胞的生长,诱导细胞凋亡,影响细胞周期分布,并具有良好的量效依赖关系.结论 5-Aza-CdR能够逆转P16基因甲基化状态,调控P16基因表达并有效地抑制肠癌细胞增殖.
关键词： 5-氮杂-2-脱氧胞苷 p16基因 DNA甲基化转移酶抑制剂 -
原发胃癌中p16和p15基因表达及甲基化异常
为检测胃癌组织中抑癌基因p16、p15及其启动子区甲基化状态和P16、P15蛋白表达情况.选择p16、p15基因及启动子区域,用PCR-SSCP、MSP(甲基化特异的PCR)和测序法对100例胃癌患者的癌组织、癌旁正常组织和5例正常组织进行检测, 同时用免疫组化法检测了癌组织和正常对照组织的P16和P15的表达.结果发现癌组织p16和p15基因启动子区甲基化率显著高于癌旁正常组织和正常对照;胃癌组织中,71%的病例P16表达阴性,54%的病例具有p16基因启动子区的高甲基化,无突变和纯合缺失检出;11%的病例P15表达阴性,9%的病例具有p15基因启动子区的高甲基化,p15异常与低分化胃癌有关,p15基因内含子1和外显子1内各发现1例DNA序列改变;癌组织中 p16和p15基因启动子区甲基化与其蛋白表达密切相关.结果显示 p16基因启动子区域高甲基化是胃癌中p16基因失活的关键因素之一,并在胃癌的发生发展中发挥重要作用;p15基因启动子区域高甲基化在胃癌中起一定作用.
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幽门螺杆菌感染、P16基因甲基化与胃癌
P16基因是细胞周期负调控基因,其甲基化与胃癌的发生有关.幽门螺杆菌感染是胃癌主要危险因素之一.幽门螺杆菌感染与P16基因的甲基化有关,使P16表达缺失,从而促使胃癌发生发展.
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结直肠锯齿状病变中p16基因甲基化状态和蛋白表达的研究
目的 检测锯齿状病变组织中p16基因启动子区异常甲基化改变和p16蛋白的表达情况,探讨其在锯齿状癌变通路中的作用和临床病理意义,同时探讨p16基因在不同年龄层段甲基化程度.方法 采用Taqman探针实时定量PCR (Methylight)方法检测225例锯齿状病变(包括96例HP、61例SSA/P和68例TSA)、54例TA、69例CRC和42例正常结直肠黏膜组织中的p16基因甲基化状态,并通过测序法验证扩增的目的片段;同时应用免疫组化方法检测其中随机抽取的116例锯齿状病变(包括52例HP、41例SSA/P、23例TSA)、20例TA、24例CRC和24例正常结直肠黏膜组织中p16蛋白的表达.结果 p16基因启动子甲基化状态和p16蛋白异常阳性程度在锯齿状病变和对照组中均有显著差异(P＜0.05),两者比较呈负相关(P ＜0.05);p16基因启动子甲基化频率与不同年龄层段的相关性比较有显著差异(P＜0.05),两者呈正相关.结论 结直肠锯齿状病变组织中p16基因甲基化可能是诱导其蛋白表达下调的主要原因,且在结直肠“增生性息肉-锯齿状腺瘤-癌”的锯齿状癌变通路中起重要作用;同时p16基因甲基化又可能与年龄相关,随年龄增长甲基化程度越高.
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p16基因甲基化与结直肠锯齿腺瘤的Meta分析
在世界范围内,结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的发病率处于恶性肿瘤的第三位,仅次于胃癌和食管癌;西方发达国家CRC仅次于肺癌,居第二位;我国近20年来CRC的发病率在逐渐增加,发达地区如广东和香港发病率已接近西方发达国家[1].其中DNA甲基化与肿瘤的相关性成为了一个研究热点.研究表明,在CRC发生、发展过程中存在许多特异性的DNA异常甲基化.2011年美国Minnesota大学Snover教授[2]提出,35％CRC来自结直肠锯齿状病变,尤其是来自CpG岛甲基化表型(CIMP)的结直肠锯齿状病变,与DNA甲基化密切相关.
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P16基因甲基化与淋巴细胞-浆细胞肿瘤的发生发展
基因启动子区CpG岛甲基化常导致基因沉默.P16基因是一定位于9p21的多种肿瘤抑制基因,通过p16INK4A-cvclin D1-PRb通路维持机体细胞的有序增殖.P16基因甲基化在淋巴瘤、急性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤等多种淋巴细胞-浆细胞肿瘤中被检测到,并与疾病的发生、发展存在一定关系,应用甲基化抑制因子或砷剂去甲基化治疗,恢复基因功能可望成为血液恶性肿瘤治疗的一种新手段.本文就P16基因甲基化机制及P16基因甲基化与淋巴细胞-浆细胞肿瘤(淋巴瘤、急性和慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓病)的关系作一综述.
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巢式MSP法检测急性白血病患者P16基因甲基化状态
为了研究p16基因甲基化和缺失与急性白血病发病的关系,探讨其在成人急性白血病发生发展中的生物学意义,应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nested methylation specific polymerase chain reaction,n-MSP)分析了82例各种亚型的急性白血病患者在初诊或复发不同阶段p16基因的甲基化和缺失状态,并且在基因组硫化修饰PCR后克隆测序验证结果的准确性.结果表明:82例急性白血病(AL)患者p16基因甲基化的出现率为39.0%,其中急性髓系白血病(AML)患者为41.4%,24例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者为33.3%;初治AL患者为36.6%,而复发患者则为54.5%.82例AL患者中有6例p16基因缺失,缺失率为7.3%,在AML、ALL患者中分别为1.7%和20.8%.16例健康自愿者或非恶性血液病患者p16基因则未发生甲基化或缺失.结论:在成人急性白血病的发生发展中,p16基因甲基化比p16基因纯合缺失更具有意义;p16基因表达异常与成人急性白血病的发生发展密切相关.
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野生型p16和p53抑癌基因共转染对 K562细胞增殖的抑制作用
抑癌基因p16和p53在抑制肿瘤的发生中起重要作用,在髓细胞白血病细胞系K562中检测出这两种基因有纯合缺失.为探讨野生型p16和p53基因的转染与表达对K562细胞的生长影响,采用了脂质体介导外源野生型p16和p53共转染K562细胞,用免疫细胞化学染色检测p16和p53基因的表达,检测细胞生长曲线,采用流式细胞术进行细胞周期分析.结果显示,共转染后p53和p16在K562细胞中表达阳性率分别为23%和28%;细胞生长受到一定程度的抑制,G1期细胞的比例增加,S期细胞减少,与单独转染p53或p16基因的抑制作用有明显差别(P＜0.05).结论:外源野生型p16和p53基因的共转染比转染单基因对K562细胞生长有更明显的抑制作用,有可能成为白血病基因治疗的一种方法.
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表没食子儿茶素没食子酸酯对人急性单核细胞白血病细胞株U937的作用及机制研究
本研究探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人急性单核细胞白血病细胞株U937的作用.采用磺酰罗丹明B(SRB)法检测EGCG对U937细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测EGCG对U937细胞周期的影响;采用RT-PCR、Westren blot法分别检测p16 mRNA、蛋白的表达;采用nMSP法检测U937细胞p16甲基化状态变化;采用RT-PCR法检测DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNMT3A、DNMT3B基因mRNA的表达.结果表明:EGCG可以剂量依赖性和时间依赖性地抑制U937细胞增殖(r=0.71),且呈剂量依赖性诱导G0/G1期细胞阻滞;EGCG可以呈剂量依赖性上调U937细胞p16 mRNA、蛋白的表达;EGCG可以呈剂量依赖性减弱U937细胞p16甲基化程度;EGCG可以剂量依赖性地下调U937细胞DNMq3A、DNMT3B mRNA表达,而对DNMT1 mRNA的表达无影响.结论:EGCG在体外通过抑制DNMT3A、DNMT3B和(或)直接使异常高甲基化的p16启动子CpG岛DNA去甲基化,恢复p16 mRNA水平和蛋白水平的表达,调控U937细胞阻滞于G0/G1期,抑制U937细胞的增长.
关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酯 急性单核细胞白血病 U937细胞 p16基因 -
巢式MSP法检测恶性血液病细胞株p16基因启动子甲基化状态的研究
本研究应用改进的甲基化特异性PCR(MSP)法,即巢式甲基化特异性PCR法检测6种肿瘤细胞株p16基因启动子的甲基化状态效率,探讨其在筛选p16基因启动子高甲基化的肿瘤细胞株,及将其作为研究基因甲基化与表达关系的理想细胞模型中的应用.6种肿瘤细胞株基因组DNA经碱变性后以亚硫酸盐修饰,再用巢式甲基化特异性聚合酶链反应扩增,分析检测其p16启动子区CpG岛的甲基化状态.结果表明:CA46、U266都有不同程度的p16基因启动子区甲基化,而Molt4、K562、HL-60、Jurkat的p16基因启动子区均未甲基化.结论:用巢式甲基化特异性PCR可以准确的检测出恶性血液病细胞株p16基因的甲基化状态,方法简单,灵敏且重复性强,可以广泛用于筛选各种p16基因启动子区甲基化的恶性血液病细胞株以及恶性血液病诊断.
关键词： 巢式甲基化特异性聚合酶链反应 恶性血液病细胞株 p16基因 基因甲基化 -
银屑病患者骨髓CFU-HPP集落形成及集落细胞p16基因启动子甲基化的研究
本研究检测银屑病患者骨髓高增殖潜能集落形成单位(CFU-HPP)的集落形成能力及集落细胞p16基因启动子甲基化状态,并探讨两者之间的关系.收集了24例银屑病患者及正常时照者骨髓,采用密度梯度离心法分离单个核细胞,并于含SCF/GM-CSF/IL-3/IL-6细胞因子组合的甲基纤维素半固体培养液中,培养14天计数CFU-HPP集落,然后收集集落.提取纯化集落细胞的DNA,经亚硫酸盐修饰后,采用甲基化特异PCR(MSP)检测CFU-HPP集落细胞的p16基因启动子甲基化状态.结果发现:在甲基纤维素半固体培养基中,银屑病患者骨髓CFU-HPP集落数显著低于正常对照(t=5.91,p＜0.01),且集落形态较小;正常对照骨髓CFU-HPP集落细胞的p16基因启动子甲基化阳性率较高(66.7%),而银屑病患者骨髓CFU-HPP集落细胞p16基因启动子甲基化阳性率(37.5%)低于正常人.结论:银屑病患者骨髓CFU-HPP细胞集落形成能力降低;银屑病患者骨髓CFU-HPP集落细胞的p16基因甲基化降低可能与其相对较低的CFU-HPP集落形成能力密切相关.
关键词： 银屑病 高增殖潜能集落形成单位 p16基因 基因甲基化
