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补气通络解毒方对胰腺癌模型小鼠HIC1甲基化程度的影响
目的 观察补气通络解毒方对胰腺癌小鼠模型HIC1基因甲基化的影响.方法 将30只裸鼠随机分为正常组、模型组及治疗组,每组10只,采用癌细胞皮下种植法造模,治疗组给予补气通络解毒方(60 g生药/kg,3 mL/100 g)灌胃,正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续干预14天后,处死裸鼠,取瘤组织,以巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nested methylation-specific polymerase chain reaction,N-MSP)法检测各组标本的HIC1基因甲基化程度.结果 模型组HIC1基因甲基化比率明显高于正常组(P <0.01),而治疗组与模型组比较,HIC1基因甲基化程度降低(P <0.01).结论 补气通络解毒方能降低模型小鼠HIC1基因甲基化程度,从而发挥治疗胰腺癌的分子生物学效应.
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巢式MS-PCR法检测恶性血液病细胞株APC基因启动子甲基化状态
本研究旨在应用巢式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)法检测10种恶性血液系统肿瘤细胞株APC基因启动子的甲基化状态,并探究其在肿瘤发生发展中的作用,同时筛选出APC基因启动子高甲基化的肿瘤细胞株,将其作为研究基因甲基化与表达关系的细胞模型.采用nMS-PCR扩增亚硫酸盐修饰后的10种肿瘤细胞株基因组DNA,检测其APC基因启动子区CpG岛的甲基化状态.结果表明,CA46、U266、Molt4、K562、HL-60、CEM、AKR、U937、Raji细胞的APC基因启动子区均未甲基化,而Jurkat细胞的APC基因启动子区出现甲基化.结论:用nMS-PCR可以准确地检测出恶性血液病细胞株APC基因的甲基化状态,该方法操作简便,可用于检测各种肿瘤细胞基因的甲基化状态.
关键词： 巢式甲基化特异性聚合酶链反应 恶性血液病细胞株 APC基因 基因甲基化 -
巢式MSP法检测恶性血液病细胞株p16基因启动子甲基化状态的研究
本研究应用改进的甲基化特异性PCR(MSP)法,即巢式甲基化特异性PCR法检测6种肿瘤细胞株p16基因启动子的甲基化状态效率,探讨其在筛选p16基因启动子高甲基化的肿瘤细胞株,及将其作为研究基因甲基化与表达关系的理想细胞模型中的应用.6种肿瘤细胞株基因组DNA经碱变性后以亚硫酸盐修饰,再用巢式甲基化特异性聚合酶链反应扩增,分析检测其p16启动子区CpG岛的甲基化状态.结果表明:CA46、U266都有不同程度的p16基因启动子区甲基化,而Molt4、K562、HL-60、Jurkat的p16基因启动子区均未甲基化.结论:用巢式甲基化特异性PCR可以准确的检测出恶性血液病细胞株p16基因的甲基化状态,方法简单,灵敏且重复性强,可以广泛用于筛选各种p16基因启动子区甲基化的恶性血液病细胞株以及恶性血液病诊断.
关键词： 巢式甲基化特异性聚合酶链反应 恶性血液病细胞株 p16基因 基因甲基化 -
血浆WIF-1基因启动子甲基化检测在肺癌早期诊断中的临床意义
目的 检测肺癌患者血浆Wnt抑制因子-1(WIF-1)基因启动子的甲基化情况并分析其在肺癌早期诊断中的意义.方法 应用巢式甲基化特异性PCR(nMSP)法,首先检测肺癌患者血清癌胚抗原(CEA)水平,再分别检测78例肺癌患者、40例肺良性病变患者和40例健康志愿者血浆中WIF-1基因启动子区甲基化状态.结果 肺癌患者血清癌胚抗原阳性率为35.90%(28/78),大致接近血浆标本中WIF-1基因启动子区甲基化率34.62% (27/78).肺良性病变患者血浆中WIF-1基因启动子区甲基化率为2.50%(1/40),健康志愿者血浆中WIF-1基因启动子区未检测出甲基化.肺癌患者血浆WIF-1基因启动子甲基化和血清癌胚抗原二项联合检测的灵敏度为(62.82%),特异度为(90.00%).不吸烟者WIF-1基因启动子甲基化率低于吸烟者.结论 外周血浆中WIF-1基因启动子甲基化有成为肺癌的新的检测手段的可能性,并且对肺癌的初步筛查具有一定的临床意义.
关键词： 甲基化 肺癌 WIF-1基因 巢式甲基化特异性聚合酶链反应
