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巢式MS-PCR法检测恶性血液病细胞株APC基因启动子甲基化状态
本研究旨在应用巢式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)法检测10种恶性血液系统肿瘤细胞株APC基因启动子的甲基化状态,并探究其在肿瘤发生发展中的作用,同时筛选出APC基因启动子高甲基化的肿瘤细胞株,将其作为研究基因甲基化与表达关系的细胞模型.采用nMS-PCR扩增亚硫酸盐修饰后的10种肿瘤细胞株基因组DNA,检测其APC基因启动子区CpG岛的甲基化状态.结果表明,CA46、U266、Molt4、K562、HL-60、CEM、AKR、U937、Raji细胞的APC基因启动子区均未甲基化,而Jurkat细胞的APC基因启动子区出现甲基化.结论:用nMS-PCR可以准确地检测出恶性血液病细胞株APC基因的甲基化状态,该方法操作简便,可用于检测各种肿瘤细胞基因的甲基化状态.
关键词: 巢式甲基化特异性聚合酶链反应 恶性血液病细胞株 APC基因 基因甲基化 -
巢式MSP法检测恶性血液病细胞株p16基因启动子甲基化状态的研究
本研究应用改进的甲基化特异性PCR(MSP)法,即巢式甲基化特异性PCR法检测6种肿瘤细胞株p16基因启动子的甲基化状态效率,探讨其在筛选p16基因启动子高甲基化的肿瘤细胞株,及将其作为研究基因甲基化与表达关系的理想细胞模型中的应用.6种肿瘤细胞株基因组DNA经碱变性后以亚硫酸盐修饰,再用巢式甲基化特异性聚合酶链反应扩增,分析检测其p16启动子区CpG岛的甲基化状态.结果表明:CA46、U266都有不同程度的p16基因启动子区甲基化,而Molt4、K562、HL-60、Jurkat的p16基因启动子区均未甲基化.结论:用巢式甲基化特异性PCR可以准确的检测出恶性血液病细胞株p16基因的甲基化状态,方法简单,灵敏且重复性强,可以广泛用于筛选各种p16基因启动子区甲基化的恶性血液病细胞株以及恶性血液病诊断.
关键词: 巢式甲基化特异性聚合酶链反应 恶性血液病细胞株 p16基因 基因甲基化 -
IFN-γ激活的脐血树突状细胞对肿瘤细胞的杀伤作用及其机制研究
树突状细胞(dendritic cell, DC)不仅具有抗原提呈功能,本身也具有一定程度的肿瘤杀伤活性.目前,有关DC直接抗肿瘤活性的研究主要集中于外周血及骨髓来源的DC,而脐带血DC尚未见相关报道.因此,本文以脐血单核细胞诱导的DC为研究对象,检测其在成熟刺激因子γ-干扰素(interferon-γ, IFN-γ)激活后对恶性血液病细胞株的杀伤活性,并通过细胞膜及细胞内TNF家族配体的改变初步探讨其杀伤机制.
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Mer基因在急性髓系白血病中的异常表达
Mer基因是Axl受体酪氨酸激酶家族中的一员,定位于2q14.1,全长为130 755 bp,包括19个外显子,Mer mRNA共3632 bp,编码由999个氨基酸组成的相对分子质量为(18~20)×103的蛋白.Mer在正常的外周血和骨髓中表达于单核细胞,而在正常的粒细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞均不表达,但在部分恶性血液病细胞株中发现有Mer的异常表达[1],提示可能与部分血液肿瘤发生发展有关.我们利用流式细胞术和RT-PCR方法分别在蛋白和mRNA水平检测32例急性髓系白血病(AML)患者骨髓中Mer的表达,并初步探讨其与疾病发生发展的关系.
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血管内皮生长因子及其受体在白血病中的研究进展
新生血管的形成和恶性肿瘤的发生、发展、浸润和转移密切相关,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和自身特异性受体结合刺激内皮细胞增殖和移行,其他促血管生成因子完全或部分通过VEGF发挥作用,VEGF水平的高低已成为一些实体瘤的独立预后因素.近年有关文献表明,VEGF在恶性血液病细胞株有异常高表达,通过自分泌和旁分泌途径,参与恶性血液病的发病过程.它与恶性血液病的关系日受人们关注和重视.