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原发胃癌中p16和p15基因表达及甲基化异常
为检测胃癌组织中抑癌基因p16、p15及其启动子区甲基化状态和P16、P15蛋白表达情况.选择p16、p15基因及启动子区域,用PCR-SSCP、MSP(甲基化特异的PCR)和测序法对100例胃癌患者的癌组织、癌旁正常组织和5例正常组织进行检测, 同时用免疫组化法检测了癌组织和正常对照组织的P16和P15的表达.结果发现癌组织p16和p15基因启动子区甲基化率显著高于癌旁正常组织和正常对照;胃癌组织中,71%的病例P16表达阴性,54%的病例具有p16基因启动子区的高甲基化,无突变和纯合缺失检出;11%的病例P15表达阴性,9%的病例具有p15基因启动子区的高甲基化,p15异常与低分化胃癌有关,p15基因内含子1和外显子1内各发现1例DNA序列改变;癌组织中 p16和p15基因启动子区甲基化与其蛋白表达密切相关.结果显示 p16基因启动子区域高甲基化是胃癌中p16基因失活的关键因素之一,并在胃癌的发生发展中发挥重要作用;p15基因启动子区域高甲基化在胃癌中起一定作用.
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酪氨酸激酶抑制剂对转染p15基因的K562细胞的作用
本研究探讨酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼(imatinib)和p15基因克隆联合作用对K562细胞的增殖、细胞周期及凋亡等的调控作用.用RT-PCR扩增p15基因,胶纯化回收后连接到T载体测序,确认序列正确后构建p15-pcDNA3.1载体,将p15-pcDNA3.1与空载体分别以脂质体转染入p15基因突变的K562细胞,经筛选得到G418抗性的K562细胞株;用Western blot检测转染后P15蛋白的表达;用MTT法测定细胞存活率;流式细胞术检测细胞周期和凋亡.结果表明:从对照K562细胞中扩增的DNA片段,在第174-180位点有7个碱基缺失,这证实对照K562细胞中p15基因部位基因缺失.表达外源性P15蛋白的p15-pcDNA3.1-K562细胞株生长速度明显慢于对照K562细胞株;流式细胞术显示G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少;p15-pcDNA3.1-K562细胞与伊马替尼联合应用后凋亡细胞比例明显上升,MTT法显示细胞存活率较对照细胞明显下降.结论:表达外源P15蛋白联合应用伊马替尼对抑制K562细胞增殖及促凋亡方面具有协同作用.
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肝癌细胞p15基因CpG岛甲基化研究
目的 通过检测肝癌细胞株HepG2的抑癌基因p15基因启动子区CpG岛的甲基化状态,探讨其与肿瘤发生的可能相关性.方法 应用甲基化特异性PCR(MSP)技术,对人肝癌细胞株HepG2的p15基因启动子区域CpG岛的甲基化状态进行检测,以人淋巴瘤细株Raji为阳性对照,以正常人外周血单核细胞(PBMC)和肝细胞为阴性对照.结果 肝癌细胞HepG2中p15基因启动子区域CpG岛甲基化和非甲基化检测均呈阳性,正常人外周血单核细胞和肝细胞甲基化检测阴性.结论 肝癌细胞株HepG2抑癌基因p15基因CDG岛存在高度甲基化,可能与肝癌的发生相关.
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原发性非小细胞肺癌中MTS2/p15的表达及临床意义
目的探讨p15基因在人非小细胞肺癌中的表达及其转移和预后之间的关系.方法应用免疫组化法对138例人非小细胞肺癌中p15基因表达进行研究,同时以23例正常肺组织作对照.结果肺癌p15表达水平(65.66%)明显低于正常肺组织(89.43%)(P＜0.05).p15表达水平降低的程度与肺癌的转移有密切关系(P＜0.05),而与肺癌的原发肿瘤大小(T),肿瘤部位,患者年龄及吸烟与否均无明显关系(P＞0.05).p15高表达组(＞65%)术后5年生存率明显高于低表达组(≤65%)(P＜0.05).Cox比例风险模型的多因素分析表明p15,淋巴结转移状态,TNM分期是独立的判断预后的指标.结论MTS2/p15基因可能参与人体非小细胞肺癌的发生、发展和转移过程,它也是一个较有价值的预后判断指标.
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p15基因甲基化与肿瘤的关系
DNA甲基化作为转录水平的DNA修饰方式之一,在调节基因表达和维持细胞正常分化起重要作用.DNA甲基化在胚胎发育的初期是必须的,但在人类的恶性肿瘤中,DNA甲基化的改变是普遍的异常现象,DNA甲基化的修饰参与肿瘤形成.造血系统恶性肿瘤中,控制和调节造血细胞生长和分化的基因的甲基化,导致基因失活,使转录抑制的现象十分普遍.正常细胞非甲基化的CpG岛如果发生随机甲基化,错误的形成从头至尾的甲基化,使肿瘤抑制基因失活[1,2],所以研究细胞异常的甲基化,尤其是因异常甲基化导所致基因失活与肿瘤形成有密切关系,通过用甲基化抑制因子使受抑制的基因重新表达,恢复细胞正常生长和调控,对临床治疗十分有意义,可能是治疗实体瘤和恶性血液病有希望的新途径之一.
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P16和P15蛋白表达与胃癌的关系
目的:研究P16、P15蛋白在胃癌中的表达,探讨两者在胃癌发展中的作用.方法:采用链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶连接法(SP法),检测46件胃癌组织及69件转移淋巴结标本中P16、P15蛋白的表达.结果:P16表达与胃癌临床分期呈负相关.在胃癌及其转移淋巴结中P16和P15的表达呈正相关.结论:P16和P15蛋白的联合检测可作为临床上胃癌发生和转移预测的一个参考指标.
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P15蛋白表达与胃癌临床病理学特征的关系
目的:研究P15蛋白在胃癌中的表达,探讨P15基因在胃癌发展中的作用.方法:采用链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶连接法(SP法),检测46例胃癌组织中P15蛋白的表达.结果:P15基因表达与性别、年龄、浸润深度、Borrmann分型和PTNM分期均无显著意义(P＞0.05).结论:P15基因单独表达在胃癌发展中作用不显著.
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硫化镍对16HBE细胞中基因的影响
目的检测结晶型硫化镍(NiS)对K-ras基因和P15基因的改变及基因组不稳定性的影响,从而进一步探讨镍化合物致癌的分子机制.方法采用限制性片段长度多态性分析和聚合酶链反应-单链构象多态性分析方法探查结晶型NiS在诱导16人气管上皮细胞(HBE)恶变过程中的K-ras基因Exonl第12密码子及第12密码子以外的密码子改变情况.采用PCR-SSCP分析方法探查结晶型NiS在诱导16HBE细胞恶变过程中的P15基因Exon2存在状况.采用随机扩增多态性技术来对结晶型NiS在诱导16HBE细胞恶变过程中的基因组不稳定性进行分析.结果K-ras基因Exonl和P15基因Exon2未发生改变.本实验所选用的7条随机引物均能扩增出清晰、明显的条带.其中P4、P5、P7两条引物扩增的片段在实验组和对照组之间无差异,其余4条引物均有差异.对于同一随机引物他们都具有特异的带型.结论P15基因第2外显子和K-ras基因第1外显子(包括第12、13密码子)可能不是结晶型NiS作用的靶部位.在结晶型NiS诱发细胞恶性转化过程中,基因组变得逐渐不稳定.
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地西他滨治疗骨髓增生异常综合征的临床疗效及P15甲基化变化研究
目的 分析地西他滨治疗骨髓增生异常综合征(MDS)患者的临床疗效与不良反应,并探讨治疗后P15基因的甲基化水平变化.方法 对广东省人民医院血液科2009年11月至2012年3月接受地西他滨治疗的31例MDS患者[难治性血细胞减少伴多系病态造血(RCMD)9例,难治性贫血伴有原始细胞增多Ⅰ(RAEB-Ⅰ)11例,RAEB-Ⅱ7例,慢性粒单核细胞白血病(CMML)4例]进行回顾性分析,其中28例接受5d方案,3例接受3d方案.从中抽取7例RAEB-Ⅰ及RAEB-Ⅱ患者,使用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)连续监测其P15基因甲基化水平的变化.结果 在可评估的28例患者中,完全缓解(CR)3例,骨髓完全缓解伴血液学改善(mCR+HI)5例,骨髓完全缓解(mCR)7例,单纯血液学改善(HI)3例,疾病稳定(SD)9例,疾病进展1例,CR率10.7％,总有效率(CR+mCR+HI)64.3％,2年生存率为46.4％.经地西他滨治疗后,患者P15基因明显降低,且用药后第1周下降幅度大,达20％～60％.结论 地西他滨治疗MDS患者具有一定疗效,不良事件具有可控性,且治疗后P15基因明显下降.
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p15基因启动子区甲基化与新疆维吾尔族寻常性银屑病的相关性研究
银屑病(psoriasis,PS)是一种常见并易复发的慢性炎症性皮肤病.根据PS临床特征,一般可分为4种类型:寻常性、脓疱性、关节病性及红皮病性银屑病.国内外研究表明,PS是多基因疾病,遗传和环境因素对其发病有至关重要的影响,但发病机制目前仍然不清楚.表观遗传学中DNA甲基化修饰影响和调控基因的活性,近年来的研究也证明PS的发生与其DNACpG岛的甲基化状态有关[1-2],但目前关于p15基因甲基化的研究常见于其他疾病.本文运用焦磷酸测序技术首次对新疆维吾尔族寻常性银屑病(PV)患者皮损p15基因启动子区甲基化进行检测,以探讨p15基因启动子区甲基化与PV发病机制的关系.
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p15、p16与p53在人脑胶质瘤中的表达及相关性的研究
目的研究p15、p16与p53基因在人脑胶质瘤中的表达及与胶质瘤恶性表型的关系.方法应用免疫组织化学技术检测73例脑胶质瘤中p15、p16与p53基因的表达.结果随着胶质瘤恶性程度的增高,p15、p16基因的表达阳性例数减少,p53基因则相反.结论提示p15、p16与p53抑癌基因在胶质瘤的发生、发展过程中起重要作用.
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TGF-β1、p15在食管鳞癌中的表达及其生物学意义
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)、p15基因及其蛋白在食管鳞癌中的表达与食管鳞癌发生的关系.方法 采用免疫组化SP法和原位杂交技术检测48例食管鳞癌组织,18例癌旁不典型增生组织和10例切缘正常组织中TGF-β1与p15 mRNA及其蛋白的表达.结果 食管鳞癌组织中TGF-β1的阳性表达率(62.5%)低于正常组织(100%),P＜0.05;食管鳞癌组织中p15 mRNA和p15蛋白的阳性表达率分别为56.3%和47.9%,二者表达明显相关(x2=22,P＜0.05),均低于在正常组织和不典型增生组织中的表达(P＜0.05);食管鳞癌组织中TGF-β1的表达与p15 mRNA的表达明显相关(x2=23.84,P＜0.05).结论 食管鳞癌组织中TGF-β1对p15基因及其蛋白的转录可能有正向调节作用;TGF-β1、p15基因及其蛋白的低表达可能与食管鳞癌的发生有关.
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膀胱移行上皮细胞癌p15基因启动子区甲基化检测及其临床意义
目的 探讨膀胱移行细胞癌p15基因5'CpG岛甲基化状态及其临床意义.方法 应用甲基化特异性PCR方法检测45例膀胱移行细胞癌和10例正常膀胱组织中p15基因5'CpG岛甲基化程度,分析其甲基化程度与膀胱癌病理分级、分期间关系.结果 膀胱移行细胞癌p15基因5'CpG岛甲基化阳性率为37.8%,而正常膀胱组织中未检测到p15基因5'CpG岛甲基化;p15基因甲基化与膀胱癌病理分级、分期差异有统计学意义(P<0.05).结论 p15基因在膀胱移行细胞癌组织中的甲基化率较高,其异常高甲基化在膀胱癌的发生、发展中具有重要作用.
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成人急性髓性白血病骨髓中p16/p15第二外显子的甲基化
目的:探讨p15/p16基因编码区位点在成人急性髓性白血病(AML)骨髓中甲基化的发生.方法:用酶切-PCR-琼脂糖凝胶电泳技术研究31例成人AML患者骨髓中p16第二外显子HapⅡ、SacⅡ和 NruI位点及p15基因第二外显子HapⅡ位点甲基化情况.结果:在31例成人AML骨髓样本中,p16E2的 4个HapⅡ位点同时甲基化的有11例;1个SacⅡ位点甲基化的有19例;1个NruI位点甲基化的有22例;p15E2 的6个HapⅡ位点同时甲基化的有16例.成人AML患者骨髓中p16E2中的SacⅡ和NruI位点和p15E2中的HapⅡ位点在CpG的C甲基化与成人AML相关.结论:甲基化在AML的发生发展中可能起一定作用.
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成人急性髓性白血病中p16/p15缺失与甲基化
目的探讨p16/p15基因第二外显子在成人急性髓性白血病(AML)中的缺失与甲基化.方法用常规PCR及酶切技术研究33例成人AML中p16/p15基因第二外显子的缺失与甲基化情况.结果统计学分析p16 E2的HapII、SacII和NruI各位点之间以及p16 E2和p15 E2的HapII位点之间的甲基化状况无相关性(均为P＞0.005),成人AML患者组与正常对照组p16 E2甲基化状况在HapII位点无显著差异(P=0.078),在SacII和NruI位点有显著差异(P=0.037).结论成人AML中p16/p15基因第二外显子的缺失不是主要失活方式, 基因编码区位点甲基化的发生可能是随机的,p16E2的甲基化在成人AML基因诊断中有一定作用.
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地西他滨对骨髓增生异常综合征患者血浆中P15基因启动子区域甲基化的影响
目的:检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者血浆中P15基因启动子区域甲基化状况及地西他滨对其甲基化的影响.方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)法检测1例初治的MDS患者、3例MDS转化而来的AML患者使用地西他滨序贯半量CA(方案治疗前后血浆中P15基因启动子区域CPG岛甲基化情况,并分析其临床疗效.结果:4例患者治疗前均有P15基因甲基化,治疗1疗程后有3例患者P15基因甲基化得到逆转,4例患者中有2例获得临床缓解,2例无效.结论:MDS的发生与P15基因甲基化相关,地西他滨对MDS患者血浆P15基因高甲基化具有明显的去甲基化作用.P15基因甲基化检测可能成为MDS辅助诊断和预后判断的分子标记.
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初诊和复发的急性淋巴细胞白血病P15、P16基因失活的研究
目的:探讨多肿瘤抑制基因(MTS)P15和(或)P16的改变是否可影响急性淋巴细胞白血病(ALL)的病程及其预后.方法:跟踪30例复发的ALL患者在初诊和第1次骨髓复发时的骨髓标本,用PCR法监测P16 exon 1、P16 exon 2、P15 exon 1的缺失;用REP法检测P16 exon 1、P15 exon 1高度甲基化情况.结果:在初诊患者中共有50%(12/30)的患者有P15和(或)P16基因失活,P16缺失的患者有8例, 其中7例伴有P15缺失,7例P15甲基化的患者有2例伴P16甲基化.在初诊时,15例无该基因异常的患者,复发期间有11例出现 P15和(或)P16异常,占86.7%(26/30),与初诊时48%(12/25)比较,差异有极显著性意义(P<0.01).结论:我们认为P15和(或)P16的失活可加快疾病的复发,监测ALL患者的P15和(或)P16失活,可用于预测疾病的病程和预后,初诊和复诊均有异常者为难治性疾病.
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宫颈癌组织中p15基因表达及其生物学意义
目的 探索p15基因与宫颈癌的关系.方法 应用免疫组化ABC方法对36例宫颈癌组织中p15基因表达产物进行检测.结果 p15基因产物的阳性表达率为55.6%(20/36),其表达率与宫颈癌病理类型无显著关系,但与宫颈癌的浸润、转移及病人的生存期显著相关(P＜0.05).结论 p15基因表达产物可以作为判断宫颈癌预后的指标.
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硫酸镍诱导16HBE细胞恶变过程中的K-ras、P15基因的改变及基因组不稳定性分析
目的 检测硫酸镍对K-ras基因和P15基因的改变及基因组不稳定性的影响,从而进一步探讨镍化合物致癌的分子机制.方法 采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析方法探查硫酸镍在诱导16HBE细胞恶变过程中的K-fas基因Exon1和P15基因Exon2存在状况.采用随机扩增多态性技术对硫酸镍在诱导16HBE细胞恶变过程中的基因组不稳定性进行分析.结果 K-ras基因Exon1和P15基因Exon2未发生改变.本实验所选用的7条随机引物均能扩增出清晰、明显的条带,条带数在1～6条之间.7条引物中P1、P4、P7三条引物扩增的片段在实验组和对照组之间无差异.其余四条引物均有差异,对于同一随机引物他们都具有特异的带型. 结论 P15基因第2外显子和K-ras基因第一外显子可能不是硫酸镍作用的靶部位.在硫酸镍诱发细胞恶变转化过程中,基因组变得逐渐不稳定.
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巢式PCR法检测肝母细胞瘤中p15和p16基因启动子异常甲基化
目的DNA甲基化被认为是反映细胞内DNA转录状态的重要遗传学标记.该研究旨在对小儿肝母细胞瘤中p15和p16基因5'启动子区CpG岛异常甲基化的相关性进行评估,并分析其与小儿肝母细胞瘤发生发展的关系.方法采用甲基化特异性PCR法,对30例小儿肝母细胞瘤、癌旁和远癌正常组织进行巢式PCR扩增,经凝胶电泳和测序方法检测目的片段.结果30例小儿肝母细胞瘤组织中p15和p16基因5'CpG岛有30%(9/30)和67%(20/30)、癌旁组织中有20%(6/30)和57%(17/30)、远癌正常组织有13%(4/30)和33%(10/30)异常甲基化.在肝母细胞瘤中发现1例p15E2纯合缺失,缺失率为3%(1/30),E1和部分I1区域未见缺失;p16E2和部分I2区域中3例杂合缺失,缺失率为10%(3/30),E1和部分11区域未见缺失.结论p15和p16基因5'启动子区CpG岛的异常甲基化可能在肝母细胞瘤发生发展中扮演了重要角色,其主要机制可能是启动子区CpG岛甲基化抑制了基因的转录.
