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p,p'-DDE和β-BHC联合染毒对孕小鼠生殖及其胎仔发育的影响
目的研究p,p'-DDE和β-BHC联合染毒对孕小鼠生殖和胎仔发育的影响.方法对孕12～14天小鼠每天联合灌胃不同剂量的p,p'-DDE和β-BHC(各1、5、10mg/kg bw),并设植物油溶剂对照组,采用磁性分离酶联免疫法检测孕鼠血清雌二醇(E2)和孕酮(P)含量,RT-PCR检测小鼠胎盘组织中雌激素受体(α-ER)、促性腺激素释放激素(GnRH)和β-内啡肽(β-EP)mRNA表达水平.结果①生殖影响:随染毒剂量加大母鼠子宫剥离重和子宫腔内液增加,子宫着床数减少,胎仔肛殖距和雌雄比增加,孕鼠血清中雌二醇和孕酮水平上升,胎盘组织α-ER和GnRH mRNA表达上调而β-EP mRNA表达下调,且均呈现剂量依赖性关系,差异有显著性(P＜0.05).②发育影响:随染毒剂量增加孕鼠体重增长减少,肝脏的脏器系数增加,活胎数下降,不良妊娠结局(死胎、吸收胎和畸形数)增多,雌胎数所占比例加大,均呈剂量效应关系,差异有显著性(P＜0.05).结论p,p'-DDE和β-BHC可干扰孕小鼠生殖功能,导致生殖和发育障碍,造成雌雄比例失衡.
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p,p'-DDE对离体培养支持细胞DNA损伤与FasL基因表达的影响
目的研究p,p'-DDE对离体培养支持细胞DNA损伤与FasL基因表达的影响.方法从大鼠睾丸组织中分离支持细胞进行离体原代培养3天,加入不同浓度p,p'-DDE继续培养24h,应用单细胞凝胶电泳(SCGE)和反转录聚合链式反应(RT-PCR)研究p,p'-DDE诱导支持细胞DNA损伤和FasL基因表达.结果发现支持细胞DNA迁移度随着p,p'-DDE剂量的增高而增高,同时FasL的基因表达水平也随之增高.结论p,p'-DDE可诱导支持细胞DNA损伤和FasL基因表达,pp'-DDE可能是通过Fas/FasL途径诱导支持细胞损伤,破坏生精过程的动态平衡,终导致精子减少.
关键词： P p'-DDE 支持细胞 单细胞凝胶电泳 RT-PCR FasL -
孕产妇血清中p,p'-DDE暴露水平及其影响因素
目的 研究孕产妇血清中p,p'-DDE暴露水平并对其影响因素进行分析.方法 于2010年选择某市一所医院妇产科的300名孕产妇作为研究对象,测定孕产妇静脉血清中p,p'-DDE的含量,并对相关影响因素开展问卷调查.结果 p,p'-DDE在孕产妇血清中的检出率为89.47％( 221/247),Speaman分析表明孕产妇BMI和年龄与其静脉血清中p,p'-DDE的含量呈正相关,且差异有统计学意义(P＜0.05)；多因素分析结果提示:孕产妇的年龄每增加1岁和体质指数(BMI)每增加1 kg/m2,孕妇血清中p,p'-DDE的含量分别相应增加29.01 ng/g(以脂计)和23.73 ng/g(以脂计),有妊娠史的孕产妇比无妊娠史的孕产妇静脉血中p,p'-DDE的含量低161.64 ng/g(以脂计).结论 孕产妇年龄的增加及BMI的增高可能会导致静脉血清中p,p'-DDE暴露水平的升高；有妊娠史的孕产妇血清中的p,p'-DDE含量可能较无妊娠史的孕产妇低.
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p,p'-DDE对大鼠睾丸支持细胞细胞外信号调节激酶转导通路影响的机制研究
目的 研究p,p'-DDE对离体培养大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell)内的细胞外信号调节激酶(ERK)丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路影响机制.方法从大鼠睾丸组织中分离支持细胞进行离体原代培养,分别以0、10、30、50μmol/L的p,p'-DDE染毒,用MTT比色法、SABC法和Western blotting法来检测细胞活性以及p-ERK的表达情况.结果在MTT试验中,支持细胞活性随着p,p'-DDE剂量的增高而逐渐降低;在免疫组化试验中,细胞内p-ERK随P,P'-DDE剂量的增高而染色加深;同时,在western blotting实验中50μmol/L p,p'-DDE染毒组支持细胞内p-ERK在染毒后12、24h较染毒前表达上升,差异有统计学意义(P<0.05).结论 p,p'-DDE导致支持细胞细胞活性降低;同时激活细胞内ERK磷酸化,并且随着作用时间的增加,ERK的磷酸化表达于12、24h时明显增加,这预示着ERK磷酸化可能参与信号通路的传导,可能会影响下游通路进而影响到基因的转录和表达.
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p,P'-DDE对青春前期大鼠睾丸组织半胱氨酰天冬氨酸酶mRNA表达及活力的影响
目的 研究P,P'-DDE在诱导青春前期SD大鼠睾丸细胞凋亡中半胱氨酰天冬氨酸酶(caspase)的作用.方法 将22日龄清洁级雄性SD大鼠20只随机分为低(20 mg/kg)、中(60 mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量p,P'-DDE染毒组和对照组(玉米油),每组5只.采用腹腔注射染毒,注射容积为10ml/kg,隔天染毒1次,共进行10天.染毒结束后,处死大鼠,分离睾丸、肝、肾、脾、肺器官,称重后计算脏器系数.取睾丸制备组织匀浆,实时荧光定量PCR测定睾丸组织caspase-3、caspase-8、caspase-9mRNA的表达;比色法检测睾丸组织caspase-3、caspase-8、caspase-9的活力.结果 各组大鼠体重和睾丸、肾、脾、肺的脏器系数间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).与对照组比较,高剂量p,P'-DDE染毒组大鼠肝脏系数较高.差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较.高剂量P,P'-DDE染毒组大鼠睾丸组织caspase-3、caspase-8、caspase-9和中剂量P,P'-DDE染毒组大鼠睾丸组织caspase-9表达均升高.差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,高剂量P,p'-DDE染毒组大鼠睾丸组织caspase-3、caspase-8、caspase-9活力均较高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 p,P'-DDE可能通过启动caspase-8和easpase-9,进而激活下游效应caspase-3的级联反应而诱导睾丸组织细胞凋亡.
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p,p'-DDE对青春期雄性大鼠的生殖毒性
目的 探讨P,p'-DDE染毒对青春期SD雄性大鼠生殖系统的毒性作用.方法 将20只健康清洁级50日龄青春期雄性SD大鼠随机分为4组,分别为对照(玉米油)组和低(20 mg/kg)、中(60mg/kg)、高(100mg/kg)剂量p,P'-DDE染毒组,每组5只.采用腹腔注射方式进行染毒,注射容积为10ml/kg,隔天1次,共进行10d.第11天处死大鼠,称取睾丸、肝、肾、脾、肺组织重量,并计算脏器系数.采用TUNEL法检测大鼠睾丸细胞凋亡情况.采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)测定大鼠睾丸组织钙蛋白酶1(calpain-1)及兔抗半胱天冬氨酸蛋白酶-12(caspase-12)mRNA的表达水平.测定大鼠精子活力参数[精子密度(sperm concentration)、活动精子密度(motile sperm)、平均速率(average path velocity,VAP)、直线运动速率(straight line velocity,VSL)、曲线运动速率(curvilinear velocity,VCL)、精子头侧摆幅度(amplitude of lateral head displacement,ALH)、鞭打频率(beat crossfrequency,BCF)、前向性(straightness,STR)、直线性(linearity,LIN)、摆动性(wobble,WOB)]和精子畸形率.结果 与对照组比较,中、高剂量p,p'-DDE染毒组大鼠肝脏系数较高,而低、高剂量p,p'-DDE染毒组肾脏脏器系数较低,差异均有统计学意义(P＜0.05).各组大鼠睾丸、脾、肺组织脏器系数间比较,差异均无统计学意义.与对照组比较,低、中、高剂量p,p'-DDE染毒组大鼠睾丸组织细胞凋亡指数和精子畸形以及低、中剂量p,p'-DDE染毒组大鼠睾丸组织中calpain-1和caspase-12 mRNA表达水平均较高,差异有统计学意义(P＜0.05),但高剂量组均无统计学上差异.且随着p,p'-DDE染毒剂量的升高,大鼠睾丸组织细胞凋亡指数以及睾丸组织中calpain-1和caspase-12mRNA表达水平均呈先升高后下降的趋势,精子畸形率呈上升趋势.与对照组比较,低、中剂量p,p'-DDE染毒组大鼠精子密度明显减少,中剂量p,p'-DDE染毒组大鼠精子曲线运动速率、精子头侧摆幅度、鞭打频率均下降,差异有统计学意义(P＜0.05).而高剂量p,p'-DDE染毒组大鼠精子的各指标变化不明显,差异无统计学意义.结论 p,p'-DDE可对青春期大鼠的生殖系统产生毒性作用.
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p,p'-DDE对离体培养的大鼠睾丸支持细胞内钙离子的影响
目的 研究p,p'-DDE对离体培养大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell)细胞内钙离子的影响.方法从大鼠睾丸组织中分离支持细胞并进行离体原代培养,设空白对照组、溶剂对照组和低、中、高剂量p,p'-DDE染毒组(10、30、50 μmol/L),然后以Fura-2/AM为钙探针,用细胞内双波长钙荧光系统通过测定荧光值计算细胞内钙离子浓度的变化.结果 高剂量组支持细胞中Ca2+浓度高于溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 p,p'-DDE可干扰支持细胞内钙离子稳态,造成钙的超负载.钙离子稳态失衡可能诱导支持细胞凋亡,终可能导致生殖功能障碍.
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p,p'-DDE对青春前期大鼠睾丸组织氧化应激及凋亡的影响
目的 研究p,p'-DDE对青春前期大鼠睾丸组织氧化应激及凋亡的影响.方法 将健康清洁级22日龄雄性SD大鼠25只按体重随机分为5组,分别为对照组(玉米油)、低(20 ms/kg)、中(60 mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量P,p'-DDE染毒组和VitE干预组(100mg/kg p,p'-DDE+100mg/kg Vit E),每组5只.采用腹腔注射方式进行染毒,注射容积为10ml/kg,每隔1 d染毒1次,共10 d.染毒结束后,处死动物,取睾丸称重,并计算睾丸脏器系数;将睾丸制备组织切片和组织匀浆,分光光度计法测定大鼠睾丸组织超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,采用TUNEL法检测睾丸组织的细胞凋亡情况.结果 各组动物染毒前体重及染毒期间体重变化无差异.大鼠睾丸重量及其脏器系数间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组比较,高、中、低剂量p,p'-DDE染毒组SOD活力降低,中、高剂量p,p'-DDE染毒组MDA含量升高,高剂量p,p'-DDE染毒组GSH-Px活力下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).与高剂量p,p'-DDE染毒组比较,Vit E干预组SOD活力升高,差异有统计学意义(P＜0.05).Vit E干预组和高剂量p,p'-DDE染毒组MDA含量和GSH-Px活力间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).高、中、低剂量p,p'-DDE染毒组和对照组均有睾丸细胞凋亡情况发生,对照组中凋亡细胞稀少;随着p,p'-DDE染毒剂量的升高,凋亡细胞数也逐渐增多,以精原细胞和精母细胞为主,伴有支持细胞.与对照组比较,高、中、低剂量P,p'-DDE染毒组的细胞凋亡指数均升高,差异有统计学意义(P＜0.05);Vit E干预组的细胞凋亡指数低于高剂量p,p'-DDE染毒组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 p,p'-DDE可通过引发睾丸组织氧化应激而诱导细胞凋亡.
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p,p'-DDE对离体培养大鼠睾丸支持细胞转铁蛋白表达的影响
目的研究P,P'-DDE对离体培养大鼠睾丸支持细胞转铁蛋白表达的影响.方法对大鼠睾丸支持细胞离体原代培养,运用一步法RT-PCR检测给与P,P'-DDE后24 h支持细胞转铁蛋白mRNA水平.结果睾丸支持细胞转铁蛋白mRNA水平随P,P'-DDE所给剂量的增高而降低,且与对照组差异存在显著性(P＜0.05),呈剂量依赖关系.结论P,P'-DDE 可抑制睾丸支持细胞转铁蛋白的基因转录,从而抑制其合成,导致精子发生障碍和生殖功能紊乱.
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p,p'-DDE和β-BHC联合染毒对大鼠离体支持细胞脂质过氧化的影响
目的 研究p,p'-DDE和β-BHC联合染毒对大鼠离体支持细胞脂质过氧化的影响.方法 通过离体培养SD大鼠支持细胞的四甲基偶氮唑盐(MTT)实验,确定后续实验的染毒剂量,p,p'-DDE和β-BHC的染毒浓度均为10、30、50μmol/L,p,p'-DDE+β-BHC联合染毒浓度为10μmol/L p,p'-DDE+10μmol/L β-BHC,30μmol/L p,p'-DDE+30μmol/L β-BHC,50μmol/Lp,p'-DDE+50μmol/L β-BHC,检测染毒后支持细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率、总超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量的变化.结果 50μmol/L的p,p'-DDE、β-BHC均可使支持细胞的吸光度(A)值显著下降(P＜0.05).睾丸支持细胞LDH的漏出率随染毒浓度的增加而明显增加(P＜0.05),二者以不同浓度联合染毒时支持细胞LDH的漏出率均显著高于对应浓度的单独染毒(P＜0.05).不同浓度的p,p'DDE、β-BHC及二者联合染毒均可使细胞内总SOD活力显著降低(P＜0.05)、MDA的含量增加(P＜0.05),且联合染毒时MDA的含量与二者单独染毒时相比均有显著增加(P＜0.05).结论 p,p'-DDE、β-BHC单独和联合作用均可以引发睾丸支持细胞脂质过氧化,p,p'-DDE和β-BHC对支持细胞的联合毒性作用具有一定的协同效应.
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p,p'-DDE、β-BHC对大鼠支持细胞FasL mRNA表达及NF-κB活性的影响
[目的]研究有机氯农药DDT和六六六的代谢产物(p,p'-DDE)和β-BHC及联合染毒对离体培养大鼠支持细胞(sertoli cell)FasL mRNA表达及NF-κB活性的影响. [方法]分离大鼠睾丸支持细胞进行原代培养2d,以DMSO为溶剂对照,分别以终浓度为10、30、50μmol/L的p,p'-DDE、β-BHC及联合染毒支持细胞24h,应用RT-PCR法研究支持细胞FasL mRNA的表达;用激光共聚焦显微镜检测NF-κB的转位激活状况. [结果]10、30、50μmol/L的p,p'-DDE、β-BHC及其联合染毒支持细胞后,FasL mRNA表达升高,50μmol/L剂量组与对照组差异有统计学意义(P＜0.05),各组内低、中剂量组与高剂量组差异有统计学意义(P＜0.05);NF-κB活性明显增强.[结论]支持细胞经p,p'-DDE、β-BHC及其联合染毒后,FasL mRNA表达明显升高,NF-κB的活性随染毒剂量的增加而增强,且联合作用比单独作用更加明显.
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P,P'-DDE对睾丸支持细胞雄激素结合蛋白表达的影响
[目的]研究雄激素结合蛋白在p,p'-DDE致雄性大鼠生殖内分泌干扰过程中的作用机制.[方法]对大鼠睾丸支持细胞离体原代培养4～5 d;设溶剂(DMSO)及阴性对照,以终浓度为30、50、80、100μmol/L的p,p'-DDE作用于支持细胞24h,计数200个细胞,计算支持细胞存活率;分别以浓度为10、30、50μmol/Lp,p'-DDE作用于支持细胞24h,运用一步法RT-PCR检测支持细胞内雄激素结合蛋白基因mRNA水平.[结果]p,p-DDE在50 μmol/L及以下浓度作用24 h后,支持细胞存活率＞90%,而80 μmol/L组仅45%;染毒24 h后,对照组及10、30、50 μmol/L的p,p-DDE组支持细胞内雄激素结合蛋白mRNA灰度比值分别为0.3140±0.102 0、0.392 0±0.094 9、0.583 7±0.122 1、0.649 0±0.171 8,随p,p'-DDE所给浓度的增高而逐渐升高,且30、50 μmol/L组与对照组差异存在显著性(P＜0.05),呈剂量依赖关系.[结论]p,p-DDE作用于睾丸支持细胞后,雄激素结合蛋白基因转录水平可明显升高,从而表达增强,促进雄激素结合蛋白的生成,代偿性地维持生精过程.
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P,P'-DDE宫内暴露致雄性子代大鼠的生殖毒性
[目的]探讨宫内暴露p,p'-DDE对雄性子代生殖毒性的影响. [方法]母鼠交配成功后,将其随机分为对照(玉米油)组和100 mg/kg p,p'-DDE染毒组,每组8只.染毒组于孕第8～15d采用灌胃方式给予100 mg/kg p,p'-DDE处理,对照组孕鼠给予等容积玉米油.孕鼠自由分娩,观察仔鼠个数和出生性别,测量雄性仔鼠肛殖距及检查乳头存留情况;计算睾丸的脏器系数;利用计算机辅助精子分析系统测定雄性仔鼠的精子质量各相关指标;酶联免疫吸附法测定雄性子代血清睾酮水平. [结果]染毒组仔鼠肛殖距[(0.94±0.12)cm]较对照组仔鼠肛殖距[(1.11±0.13)cm]有所缩短,乳头存留率(34％)较对照组(0％)明显上调,精子数目[(50.00±4.62)×106个/mL],较对照组[(70.63±4.17)×106个/mL]明显降低,精子活力[(62.42±3.32)％],较对照组[(76.75±2.68)％]明显下降,差异均有统计学意义.2组雄性仔鼠雌雄比例、睾丸脏器系数、血清睾酮水平、睾丸重量差异均无统计学意义. [结论]宫内暴露p,p'-DDE可诱导雄性仔鼠出现雌性化特征,精子数目和活力下降,导致雄性子代生殖毒性.
