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拉米夫定--部分调节HepG2.2.15细胞干扰素诱导基因表达
为了解抗病毒核苷类似物拉米夫定(3TC)处理的Hep.2.15细胞干扰素(IFN)抗病毒基因表达谱以及3TC对IFN信号转导途径的影响而开展此项研究.具体方法:将培养的Hep2.2.15细胞用3TC处理,再以IFN-α刺激6 h,分离细胞总RNA,经逆转录、32P标记后与尼龙膜上的探针基因芯片进行分子杂交--Macroarray法,并以此来分析3TC处理的Hep2.2.15细胞IFN抗病毒基因表达谱.用ELISA、Dot b1ot、Southern blot分析3TC处理的Hep2.2.15细胞分泌HBV抗原、细胞外HBV DNA以及细胞内复制中间体HBVDNA.Northerm blot证实单个IFN抗病毒基因如MxA、2'5'-寡腺苷酸合成酶(2'5'-OAS)以及IFN信号转导途径分子STAT1等表达情况.
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2',5'寡腺苷酸合成酶及其在病毒性肝炎中的临床意义
2',5'寡腺苷酸合成酶(2',5' Oligoadenylate synthetase, 2-5AS)是干扰素(Interferon, IFN)抗病毒、抗细胞增殖过程中的关键酶.由它催化合成的2',5'寡腺苷酸(2-5A)能激活细胞中的内切核糖核酸酶(RNasel)降解病毒的mRNA及细胞的RNA,从而起到抑制病毒复制和抗细胞增殖的作用.病毒感染、注射IFN或poly(Ⅰ):poly(C)都能诱导机体细胞合成2-5AS.因此,该酶可作为一项生化指标用于评价机体IFN系统的抗病毒作用.仅就2-5AS及其与IFN的抗病毒机制、2-5AS临床测定方法、2-5AS在病毒性肝炎的临床意义等作一简要介绍.
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HH胶囊体外抗乙型肝炎病毒的作用及其机制
目的:研究HH胶囊体外抗乙型肝炎病毒的作用及其对抗病毒蛋白2'5'-寡腺苷酸合成酶(2'5'-Oligoadenylate Synthetase,2'5'-OAS)、RAN依赖蛋白激酶(RAN-dependent protein kinase,PKR)的影响.方法:HepG2.2.15是目前常用的乙型肝炎病毒感染的体外实验模型,将细胞随机分为空白对照组、阳性对照组(3TC)、不同浓度的HH胶囊组.用CCK-8检测药物细胞毒性,酶联免疫法检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg);荧光定量聚合酶链反应法检测乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA);用Western blot、荧光定量PCR方法分别检测细胞内抗病毒蛋白2'5'-OAS、PKR及其mRNA水平.结果:HH胶囊的TC50是2.11g/L、312.00 mg/L、1 56.00 mg/L、78.00 mg/L、39.00 mg/L HH胶囊均可以降低细胞外HBeAg(0.285±0.007,0.462±0.008,0.565±0.009.0.733±0.008 vs1.334±0.007)和HbsAg(0.834±0.008.1.021±0.011.1.347±0.017.1.548±0.015±2.593±0.008)水平,3 12.00 mg/L、156.00 mg/LHH胶囊均可以减低细胞内乙型肝炎病毒DNA[(3.423±0.110)×109copies/L,(3.640±0.082)×109copies/L vs (6.857±0.060)×109copies/L]、细胞外乙型肝炎病毒DNAf6 547±87、7 710±62 vs 24 300±200).312.00 mg/LHH胶囊可以增加细胞内OAS mRNA(0.885±0.038 vs 0.688±0.068)、PKR mRNA(0.139±0.06 vs 0.058+0.005)表达及其OAS、PKR蛋白水平.结论:HH胶囊具有良好的抗乙型肝炎病毒作用,推测可能与增加细胞内OAS、PKR及其mRNA水平有关.
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冷水游泳对小鼠2′,5′—寡腺苷酸合成酶的影响
干扰素是重要的体液免疫调节因子,测定2′,5′—寡腺苷酸合成酶可以反映体内干扰素的水平,进一步了解机体免疫功能状况。本实验旨在观察长期冷水(4℃和10℃)和温水(25℃)游泳后,小鼠免疫功能的变化,以探讨冬泳对人机体的影响。1 材料和方法1.1 材料:将体重15~22g的48只小鼠随机分成4组,即对照组、4℃游泳组、10℃游泳组、25℃游泳组,每组12只。1.2 方法 分别将各实验水温组的小鼠在相应温度的水中游泳,1次/日,1min/次,持续3个月后,于静息状态眼眶取血(肝素抗凝)300μl,加入含有100μl ATP、100μl缓冲液和20μl上清液,点样于DE—81离子交换纤维纸,在0.4M碳酸氢胺溶液中层析3h,根据紫外吸收点剪下,在紫外分光光度计读A260 OD值,以OD值作为2′,5′—寡腺苷酸合成酶的活性单位。
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有关干扰素治疗慢性乙型肝炎的推荐意见解读
目前国内外用于抗乙肝病毒的干扰素主要为α亚型,其作用机制除通过诱导一些抗病毒蛋白(例如2,5-寡腺苷酸合成酶可降解病毒mRNA,蛋白激酶K可阻断病毒蛋白翻译)而起到直接抗病毒作用外,还可通过免疫调节(例如促进受感染的肝细胞表达HLA-I类抗原、增加NK细胞活性等)间接起到抗病毒作用.
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RT-PCR法评价干扰素α-2b干粉吸入剂的药效学
目的 对重组人干扰素α-2b(IFN α-2b)干粉吸入剂的药效学进行评价.方法 以IFN α-2b诱导的2',5'-寡腺苷酸合成酶(OAS)为替代指标,建立了一种灵敏的、半定量的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定OAS两种亚型OAS1和OAS2在外周血单个核细胞中的mRNA水平.结果 与市售注射剂相比较,自制IFN α-2b干粉吸入剂诱导的OAS1的mRNA水平相当,但OAS2的mRNA水平更高.结论 重组人干扰素α-2b干粉吸入剂有望成为一种非侵害性的、依从性良好的、发挥全身性疗效的给药途径.
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慢性丙型肝炎干扰素治疗前后PBMC中2-5AS活性变化的临床意义
干扰素( Interferon, IFN)不但能清除部分丙型肝炎病毒(HCV)的感染,还能减轻HCV感染所致肝脏的坏死性炎症和阻止/延缓肝脏纤维化,是公认治疗丙肝的首选药物.2'一5'寡腺苷酸合成酶(2' - 5' Oligoadenylate synthetase, 2 - 5AS)可显示IFN抗病毒活性,可以用来评价人体内IFN系统激活情况.在予IFN治疗前后检测患者2-5AS活性变化,可以提示患者对IFN治疗的反应性,从而避免盲目使用IFN.本研究通过检测慢性丙型肝炎(CHC)患者IFN治疗前后外周血单个核细胞(PBMC)中2-5AS活性的变化,探讨其与IFN疗效的关系.
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慢性肝病患者2',5'-寡腺苷酸合成酶测定的临床研究
我们对1996年8月至1998年3月住院的40例慢性肝病患者外周血中的2',5'-寡腺苷酸合成酶(2',5'-AS)进行了测定,并与43例健康者进行对照,现报道如下.
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寡腺苷酸合成酶家族基因的定表达与系统性红斑狼疮的临床特征
目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中寡腺苷酸合成酶(OAS)1、OAS2和OASL mRNA的实时定量表达水平与SLE疾病特异性和病情活动度的相关性.方法收集144例SLE患者、27例非SLE患者与59名正常对照人群的临床资料,取外周血抽取总RNA并反转录成cDNA,运用sybr green dye I实时定量聚合酶链反应(PCR)法在ABI PRISM 7900H基因测序仪上检测患者组和对照组的OAS1、OAS2的OASL mRNA表达水平的差异,并与病情活动度进行分组比较,分析其意义.结果①SLE患者的总体OAS1 mRNA定量表达水平显著高于非SLE对照组和正常对照组,差异有非常显著性(P=0.016,P=0.000);OAS2 mRNAP定量表达水平高于正常对照组(P=0.015);而OASL mRNA定量表达水平与非SLE对照组和正常组之间差异无显著性(P=0.698,P=0.396).②SLE活动组的OAS1和OASLmRNA定量表达水平均显著高于SLE非活动组,差异有非常显著性(P=0.011,P=0.001).但SLE活动组的OAS2表达水平与SLE非活动组之间差异无显著性(P=0.109).③SLE患者组的OAS2和OASL mRNA定量表达水平与SLEDAI积分呈正相关性(P=0.001,P=0.006).④SLE患者的肾、肺、脑、血液等器官的有无受累与OAS1、OAS2和OASL mRNA表达水平无相关性.⑤SLE患者组和正常对照组组内的OAS1、OAS2和OASL表达水平之间均呈强正相关(各组问P<0.01).结论作为干扰素(IFN)诱导表达的基因,OAS1、OAS2的mRNA定量表达水平的升高对SLE患者的诊断有一定的特异性,OAS1和OASL mRNA定量表达水平的升高对SLE患者的病情活动度判断有较大价值.OAS1、OAS2和OASL基因在体内同步表达,共同介导SLE的病理过程.抑制OAS1、OAS2和OASL基因的表达可能为SLE治疗的一种新方向.
关键词: 红斑狼疮 系统性 寡腺苷酸合成酶 实时定量聚合酶链反应 -
各型病毒性肝炎患者白细胞的2'-5'寡腺苷酸合成酶
各型干扰素(α、β、γ)作用于细胞,能诱导2'-'5寡腺苷酸合成酶(Esi).后者具有重要的抗病毒作用.
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聚乙二醇干扰素治疗丙型肝炎
干扰素目前仍是治疗丙型肝炎的主要药物[1].干扰素是人体内自然产生的一种细胞因子,具有广谱的抗病毒活性.其作用机制一是直接抑制病毒复制,通过激活细胞干扰素受体诱导细胞产生干扰素效应蛋白(如2′,5′-寡腺苷酸合成酶,新喋呤等)而发挥作用;二是通过增强免疫系统的功能而抑制病毒.目前临床用于治疗丙型肝炎的主要是α-干扰素.病毒动力学研究发现,干扰素可阻断病毒颗粒的产生或释放,随着干扰素剂量的增加(5~15 MU/次),对病毒复制的抑制率可达81%~96%[2].单用干扰素治疗慢性丙型肝炎的持续病毒应答率(SVR)约为20%(SVR指干扰素治疗结束后6~12个月的病毒应答率).其中对HCV基因1型的病毒应答率约10%,2、3型的应答率为30%~40%.近年来多项临床试验证明,干扰素与利巴韦林联合用药可获得好疗效.
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人白细胞介素29对Hela细胞抗病毒保护作用
目的 研究重组人白介素29(rhIL-29)对Hela细胞的抗病毒保护作用及其作用机制.方法 传代培养的Hela细胞按一定密度接种于24孔培养板,分别加入不同浓度的rhIL-29,培养24 h后换液一次,继续以含rhIL-29的培养基培养16 h,用水疱性口炎病毒(VSV)感染后,以不加rhIL-29为空白对照.RT-PCR分析MxA蛋白、2′,5′-寡腺苷酸合成酶(2′,5′-OAS)mRNA及VSV的RNA水平;MTT及细胞形态学检测分析rhIL-29对Hela细胞的抗病毒保护作用.结果 经rhIL-29处理的Hela细胞的MxA蛋白、2′,5′-OAS的mRNA表达明显上调,VSV RNA含量显著下降.MTT分析结果 rhIL-29对Hela细胞有保护作用且具有剂量依赖关系(P<0.01).结论 rhIL-29通过上调MxA蛋白、2′,5′-寡腺苷酸合成酶,抑制VSV增殖具有一定的保护Hela细胞免受病毒损伤的作用.