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酒精对胎鼠脑星型胶质细胞热休克蛋白70表达和细胞超微结构的影响
目的研究酒精对大鼠胚胎脑星型胶质细胞热休克蛋白HSP70表达和细胞超微结构的影响.方法对体外分离培养的大鼠胚胎脑星型胶质细胞分别施以不同剂量酒精(1、5、25、50mmol/L),以免疫细胞化学技术观察酒精对其HSP70表达的影响,并结合电镜技术观察其超微结构的变化.结果随酒精剂量增加,胎鼠脑星型胶质细胞HSP70阳性表达与剂量成正相关;25mmol/L和50mmol/L剂量组存活细胞个数减少,细胞膜和线粒体发生损伤,部分细胞出现凋亡和坏死.结论提示酒精能通过增强星型胶质细胞HSP表达抑制维持正常功能蛋白质的表达,并可通过损伤星型胶质细胞的细胞膜和线粒体导致凋亡和坏死.
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羊瘙痒因子263K感染仓鼠临床终末期脑中αB-晶体蛋白表达的研究
αB-晶体蛋白(αB-crystallin)是小热休克蛋白(Small heat shock protein,sHSP)家族的代表成员,已发现与多种神经退行性疾病发生发展密切相关,但至今为止对αB-晶体蛋白在朊病毒病发生发展中可能扮演的角色研究甚少,作用尚不清楚.本研究利用羊瘙痒因子仓鼠敏感株263K感染仓鼠建立的朊病毒实验动物模型,通过免疫印迹(Western blots)和免疫组织化学染色观察到伴随PrPSc在感染终末期动物脑组织中大量沉积,αB-晶体蛋白表达显著上调,比正常对照增高3倍.免疫荧光双染确定其分布的主要细胞类型为星形胶质细胞,神经元中未检测到表达.感染动物中高表达的αB-晶体蛋白与异常沉积的PrPSc无明显共定位.此研究为进一步探讨和揭示αB-晶体蛋白在朊病毒病中可能的作用和分子机制奠定了基础.
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脑部类淋巴系统研究进展
目的 探讨脑部类淋巴系统生理机制及其在相关疾病应用研究的进展.方法 在PubMed数据库中,以"glymphatic"为关鍵词,查阅2013年1月-2016年10月有关脑部类淋巴系统的相关文献,进行归纳总结.结果;脑部存在一种清理内部代谢产物(如β-淀粉样物质等)的类淋巴系统,该系统以星型胶质细胞为结构基础,在多种神经退行性疾病中起到一定的作用(例如清理β-淀粉样物质).;结论 活跃的类淋巴系统能够降低神经退行性疾病的发病,同时对神经退行性疾病的发生起到较好的预防作用.为使类淋巴系统能够更好地指导临床,需要进一步对类淋巴系统进行更深入的分析研究.
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大鼠延髓内脏带星形胶质细胞与神经元对选择性神经病理性痛的反应
目的 研究大鼠延髓内脏带(MVZ)内星形胶质细胞与神经元对选择性性神经病理性痛的反应.方法 25只成年 SD 大鼠,其中15只为接受左侧坐骨神经分支选择性损伤(SNI)组,5只作为假手术组,5只为对照组.在术前、术后10d、20d、30d(每时段5只)观察大鼠疼痛行为学并检测机械刺激缩足反射阈值(PWMT)的变化;应用抗Fos蛋白与抗胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)或抗Fos蛋白与抗酪氨酸羟化酶(TH)的单一或双重免疫荧光法染色,Confocal显微镜下观察延髓MVZ内GFAP标记的星形胶质细胞的荧光强度,Fos/ GFAP双标记星形胶质细胞以及Fos/TH双标记神经元的平均数. 结果 SNI组大鼠与对照组或假手术组相比,术后10d其痛敏增高(PWMT值降低),20d痛敏达到高峰(PWMT值低).免疫荧光染色显示:SNI术后MVZ内星形胶质细胞表现为激活型,GFAP免疫荧光强度明显增加;孤束核及腹外侧区的Fos/GFAP双标记星形胶质细胞及Fos/TH双标记神经元的平均值显著增高,SNI术后20d达到高峰. 结论 SNI术后MVZ内的星形胶质细胞和神经元均被激活.
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神经干细胞移植对大鼠全横断性脊髓损伤修复的影响
我们先前探讨了移植的神经干细胞在大鼠半横断损伤脊髓内存活及分化的情况,结果表明神经干细胞在损伤脊髓内可以存活、迁移并分化为神经元和星型胶质细胞.在此基础上,本研究应用神经干细胞移植,观察其对大鼠全横断性脊髓损伤后结构与功能的影响.取SD新生大鼠海马,剪碎后,用胰酶消化,制成细胞悬液,用含B27和bFGF的DMEM/F12培养液进行培养.神经干细胞在无血清培养基中呈悬浮生长,5～6!d形成克隆球,7～9!d后进行传代.
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白藜芦醇通过抑制海马NF-κB减轻慢性坐骨神经挤压损伤大鼠神经病理性疼痛
目的 评价白藜芦醇对大鼠神经病理性疼痛的治疗效应.方法 雄性SD大鼠32只,随机分为4组(n=8):假手术+二甲基亚砜组(sham+ DMSO)、假手术+白藜芦醇组(sham+ Res)、慢性坐骨神经挤压损伤(CCI)+ DMSO组、CCI+白藜芦醇组(CCI+ Res).假手术组仅暴露坐骨神经不做结扎,其他各组采用坐骨神经结扎术制备神经病理性痛模型,CCI术后5d,分别经侧脑室注射DMSO 5μl和30 μg Res(溶于DMSO5μl),注射时间20s,留针5min.手术前,给药前,及侧脑室给药后1、7、14 d应用热辐射仪测定热缩足潜伏期(TWL),同时测定海马星型胶质细胞和NF-κB p65的表达变化.结果 与sham+ DMSO组相比,CCI+ DMSO组各时间点TWL缩短,热痛阈(WTL)降低(P＜0.05),CCI+ Res与CCI+ DMSO组相比TWL延长;同时海马星型胶质细胞活化受到抑制,NF-κB p65表达下调(P＜0.05).结论 白芦藜醇可以减轻大鼠CCI神经病理性痛,其机制可能与抑制海马星型胶质细胞活化,抑制NF-κB p65表达有关.
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炎症反应影响脑缺血再灌注损伤的研究进展
脑缺血再灌注损伤是脑损伤的因素之一,而局部过度炎症反应是造成再灌注损伤主要原因之一.许多炎症细胞及炎症介质均参与了炎症反应.本文主要综述炎症细胞、细胞因子、趋化因子、黏附分子等炎症因子对脑组织损伤的影响.
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水通道蛋白与神经病理性疼痛的相关研究
水通道蛋白是细胞膜上具有高度选择性的自由水分子跨膜转运通道蛋白.近年来,许多研究证实水通道蛋白在神经系统中高表达,提示其与神经病理性疼痛的发生有一定的相关性.水通道蛋白在神经病理性疼痛中的作用逐渐引起关注,在治疗神经病理性疼痛方面显示出良好的应用前景.本文就AQPs与神经病理性疼痛的相关性做一综述.
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阿尔兹海默病轴突病变的研究进展
阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）是一种由于脑海马和皮层神经细胞死亡而造成的、发生于老年和老年前期以进行性认知障碍和记忆力损坏为主的中枢神经系统退行性疾病。AD的发生是典型的渐进过程，在发病早期，短期记忆能力下降，并伴随有空间识别能力的下降；随着时间推移，记忆损伤严重；终，患者的认知能力下降，语言和空间方向感缺失并丧失自主能力[1]。AD有两个特征病理症状：主要由β淀粉样蛋白（Amyloid β，Aβ）构成的淀粉样老年斑和细胞内的由纤维状聚集的过磷酸化Tau蛋白构成的神经纤维缠结（neurofibrillary tangle， NFT）[2-3]。AD病程的发展往往还伴随着星型胶质细胞的激活[4]和反应性增生[5]、小胶质细胞的增生[6]以及神经元和少突胶质细胞的减少[7]。AD是多病因性的、异质性的重大脑疾病，其发病机制较复杂。目前有多种关于AD的发病机制假说，如基因突变和多态性学说、Aβ级联联反应学说、tau蛋白学说，但尚无一种假说可较完整地解释AD的发病机制。
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宫内缺氧缺血对新生大鼠不同脑区白细胞介素-18表达的影响
宫内缺氧缺血是造成胎儿及新生儿脑白质损害的常见原因,近年来白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)在缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)发病中的作用日益受到关注.Culhane等[1]发现,成年大鼠小脑、海马、丘脑下部、大脑皮质及纹状体中皆有IL-18表达,主要表达于小胶质细胞.体外培养的小胶质细胞、星型胶质细胞、神经元亦可检测到IL-18受体的表达[2].
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亚历山大病的诊断
亚历山大病(Alexander's disease,AXD)也曾被称为纤维蛋白样白质营养不良脑病,是一种由于星型胶质细胞功能异常导致的脑白质营养不良性疾病,属于中枢神经系统退行性病变.
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α－细辛醚对大鼠海马星型胶质细胞活化的影响
目的：研究α－细辛醚对大鼠星型胶质细胞活化的影响。方法诱发大鼠癫痫持续状态（SE）1 h，用胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫组化染色观察正常组、模型组和实验组的大鼠海马区的星型胶质细胞活化情况；原代大鼠海马星型胶质细胞传代后，分为正常组、脂多糖诱导活化模型组和实验组；用CCK－8试剂盒检测各组细胞的增殖情况，用Western －blotting 法检测各组 GFAP表达。结果模型组在SE后第1天的海马星型胶质细胞活化明显，在第28天恢复至正常水平；实验组的星型胶质细胞活化水平在第1天、第3天和第7天均低于模型组（ P＜0.05）。高、低2个剂量（50，100μg · mL－1）α－细辛醚对体外脂多糖诱导的星型胶质细胞的增殖有明显抑制作用（ P＜0.05）；高浓度实验组对脂多糖诱导星型胶质细胞的 GFAP 表达增多有明显抑制作用（ P ＜0.05）。结论α－细辛醚对大鼠海马星型胶质细胞的活化有抑制作用。
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柳氮磺胺吡啶在神经病理性疼痛大鼠中的镇痛作用
目的:研究柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine,SFZ)对大鼠坐骨神经结扎(CCI)引起的神经病理性疼痛的镇痛作用,并探讨其对脊髓背角胶质细胞活化、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6 (IL-6)产生的影响.方法:将SD大鼠随机分为3组,即假手术(Sham)组、CCI组与SFZ组.建立大鼠CCI模型,按65 mg· kg-1灌胃(ig)给予SFZ,使用von Frey纤维丝测定大鼠机械缩足阈值(MWT).应用免疫荧光染色法和Western blot法检测小胶质细胞标记物Iba-1及星型胶质细胞标记物GFAP的表达变化.采用RT-qPCR法检测TNF-α,IL-1β和IL-6的mRNA水平.结果:CCI组MWT值与Sham组相比显著降低(P＜0.05);SFZ组MWT值较CCI组显著升高(P＜0.05).CCI组Iba-1和GFAP表达水平明显高于Sham组(P＜0.05);SFZ组Iba-1表达水平与CCI组相比没有显著差异(P＞0.05),SFZ组GFAP表达水平低于CCI组(P＜0.05).CCI组TNF-α,IL-1 β和IL-6 mRNA水平与Sham组相比显著升高(P＜0.05);SFZ组TNF-α,IL-1β和IL-6 mRNA水平较CCI组显著降低(P＜0.05).结论:SFZ可能通过抑制脊髓星型胶质细胞激活和炎症因子释放从而缓解CCI引起的神经病理性疼痛.
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京尼平苷对关节炎大鼠的镇痛作用及机制
目的:研究京尼平苷对类风湿关节炎大鼠的镇痛作用及其可能的作用机制.方法:通过注射Ⅱ型胶原和弗氏佐剂建立胶原诱导大鼠关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型,以机械刺激缩足反射阈值(mechanical withdraw threshold,MWT)为痛阈指标,观察免疫后d 18～24连续腹腔注射给予京尼平苷对CIA大鼠机械痛觉的过敏作用;行为学测试结束后,取L4～5段脊髓背角组织,采用免疫荧光组织化学及Westren Blot观察脊髓背角星型胶质细胞标记物GFAP水平的变化情况,酶联免疫吸附法(ELISA)检测致炎细胞因子TNF-α,IL-1 β的水平.结果:与模型组相比,京尼平苷(10和100 mg·kg-1)可显著抗CIA大鼠机械痛过敏作用,同时抑制脊髓背角星型胶质细胞标记物GFAP及致炎细胞因子TNF-α,IL-1β的水平.结论:京尼平苷对CIA诱导的类风湿性关节炎大鼠有显著的镇痛作用,该作用与其抑制脊髓背角胶质细胞活化、降低致炎细胞因子水平有关.
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盐酸氯苯哌酮对星形胶质细胞炎症反应的抑制作用及机制研究
目的 评价新型抗炎药物盐酸氯苯哌酮对神经胶质细胞炎性反应的抑制作用及机制.方法 Griess法检测一氧化氮(NO)释放、Boyden小室测定巨噬细胞趋化、ELISA法测定白细胞介素(IL)-6及RANTES分泌水平.RT-PCR法检测IL-6及RANTES基因表达,Confocal检测胞内游离Ca2+水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力.结果 盐酸氯苯哌酮可有效抑制NO释放及巨噬细胞趋化,显著抑制IL-6及RANTES分泌及基因表达,并降低胶质细胞胞内游离Ca2+水平上升.结论 盐酸氯苯哌酮对炎性介质介导的神经胶质细胞活化、巨噬细胞趋化及胶质细胞钙离子升高具有显著抑制作用.其中,盐酸氯苯哌酮对星形胶质细胞RANTES表达、分泌和对胶质瘤细胞内游离Ca2+水平的调控作用尚属首次报道.
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多聚左旋赖氨酸对大脑皮层星形胶质细胞体外培养的影响
目的 探讨不同浓度多聚左旋赖氨酸(PLL)对体外培养大脑皮层星形胶质细胞(AS)的影响.方法 采用酶消法、差速贴壁获得大脑皮层AS细胞,细胞分为四组,分别种植于对照组(未包被PLL)、25 μg/mL PLL包被组、50 μg/mL PLL包被组、100μg/mL PLL包被组包被的培养瓶或板内,运用细胞计数检测细胞贴壁率及CCK检测法绘制原代细胞生长曲线;待细胞铺满瓶底,予振荡及传代法去除其他类型细胞.第三代AS,通过胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光计数细胞纯度及CCK检测细胞活性.结果 细胞贴壁率随PLL包被浓度的增加而增加;原代AS生长曲线显示对照组生长速度较三组PLL包被组慢;除100μg/mL PLL包被组[(90±0.53)％]外,其余各组细胞纯化率均大于95％;对照组第4、6天细胞活性均明显低于各PLL包被组,差异均有高度统计学意义(P＜0.01).结论 PLL能有效地促进AS的贴壁和生长,适宜包被浓度为25～50 μg/mL.
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GJIC与中枢神经系统疾病的研究
中枢神经系统的结构和功能虽然极具独特性，但其细胞和组织的基本特性与其他部位也是大同小异的，比如说细胞间缝隙连接（gap junction intercellular，GJ），而作为一种通讯方式细胞间隙连接通讯（gap junction intercellular communication，GJIC）普遍存在于多细胞生物体内，该研究在中外已经成为了炙手可热的研究对象，指明了很多疾病可能的发病和治疗机制，尤其是在中枢神经系统疾病方面，本文针对GJIC在中枢神经系统相关疾病发病机制中所起的作用作简要综述。
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内毒素脂多糖对体外血脑屏障模型通透性的影响及其机制研究
感染性脑损伤时血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性增加在血管源性脑水肿发生发展中起重要作用,因此,阐明感染性脑损伤时BBB通透性改变及其调控机制具有十分重要的临床意义.本研究利用同种属的星型胶质细胞(astrocytes,AS)与脑微血管内皮细胞(bain microvascular endothelial cell,BMEC)共同培养,建立体外BBB模型,探讨BBB紧密连接蛋白和细胞骨架肌动蛋白(actin)在内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BBB通透性增高中的变化及其与Rho/Rho激酶细胞信号转导通路的关系.对这一问题的深入探讨,有助于进一步阐明感染性脑损伤的发病机制,为其临床防治提供新的思路.
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脑缺血再灌注损伤后血脑屏障通透性研究进展
血-脑屏障(blood brain barrier,BBB)为中枢神经系统毛细血管腔与神经组织之间存在的所有结构,是脑与血液及脑脊液之间的一种屏障,与中枢神经的变性、损伤和炎症密切相关[1-3].一般来说,BBB包括三部分:BBB、血-脑脊液屏障(blood cerebrospinal fluid barrier,BLB)和脑脊液-脑屏障(cerebrospinal fluid brain barrier,LBB),其中BBB和BLB屏障解剖结构有类似之处,生理和病理意义重大.BBB的组织结构包括脑毛细血管内皮细胞(brain microvessel endothelial cells,BMECs)及其间的紧密连接(tight junction,TJ)、基膜和周细胞、星型胶质细胞终足形成的胶质膜和细胞外基质(extracelluler matrix,ECM).
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自噬对炎性痛大鼠痛敏和星形胶质细胞活化的影响
目的 探讨自噬对炎性痛大鼠疼痛行为学和星形胶质细胞活化的影响.方法 清洁级雄性SD成年大鼠78只,按随机数字表法分为对照组(n=12)、模型组(n=42)、自噬诱导剂雷帕霉素(Rap)预处理组(n=12)和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)预处理组(n=12).经足底皮下注射完全弗式佐剂(CFA)100μL复制大鼠炎性痛模型;对照组注射100μL生理盐水.Rap预处理组和3-MA预处理组于制模前1 h经腹腔注射Rap 10 mg/kg或3-MA 15 mg/kg;对照组和模型组注射等量生理盐水.于制模前和制模后6、12、24 h及3 d取模型组大鼠6只,取脊髓L4~6组织,采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测自噬蛋白膜型微管轻链相关蛋白3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、自噬相关基因Beclin-1表达;各组分别取6只大鼠,于制模后6、12、24 h及3 d、7 d观察疼痛行为学指标机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)的变化;各组另取6只大鼠,于制模后24 h取脊髓组织,采用免疫荧光法,于共聚焦显微镜下观察星形胶质细胞的变化及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性表达,并采用Western Blot检测GFAP表达量.结果 ① 炎性痛可诱发大鼠脊髓自噬蛋白LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达增加,24 h达峰值(A值分别为0.59±0.07、0.51±0.06),随后逐渐下降.② 模型组大鼠MWT、TWL随时间延长呈先降低后升高趋势,24 h达谷值〔MWT(g):17.8±1.9,TWL(s):6.8±0.4〕,且12 h起即明显低于对照组〔12 h MWT(g):21.5±2.4比43.4±5.1,TWL(s):12.0±1.1比17.6±1.2,均P<0.05〕,制模后3 d起有所升高.与模型组比较,给予自噬诱导剂Rap 12 h起,MWT即明显增加(g:36.8±4.9比21.5±2.4),TWL即明显延长(s:14.3±1.1比12.0±1.1,均P<0.05);而给予自噬抑制剂3-MA 12 h起,MWT即进一步减少(g:18.6±1.9比21.5±2.4),TWL即进一步缩短(s:8.4±0.6比12.0±1.1,均P<0.05).③ 共聚焦显微镜下显示,对照组星形胶质细胞无明显变化,仅有少量GFAP表达.炎性痛可诱导星形胶质细胞活化,表现为胶质细胞肥大、增生、胶质网络变形,且GFAP表达较对照组明显增加(A值:0.54±0.09比0.16±0.02,P<0.05).自噬诱导剂Rap可减轻胶质细胞活化,抑制GFAP表达,与模型组比较差异有统计学意义(A值:0.33±0.06比0.54±0.09,P<0.05);而自噬抑制剂3-MA可进一步加重胶质细胞的活化,GFAP表达较模型组进一步上调(A值:0.73±0.08比0.54±0.09,P<0.05).结论 自噬参与了炎性痛大鼠疼痛行为学和胶质细胞的激活过程.
