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含热休克蛋白70和绿色荧光蛋白双顺反子慢病毒载体的构建与鉴定
目的 构建并鉴定人热休克蛋白70(Hsp70)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子慢病毒表达载体,以探索Hsp70对细胞保护作用的影响.方法 通过基因重组技术将人Hsp70连接到含EGFP的慢病毒载体中,包装并收集病毒,感染人胰腺癌细胞系Aspc-1细胞后,通过荧光显微镜观察EGFP的表达,同时利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(Westemblot)技术检测Hsp70基因的表达情况.结果 酶切和测序鉴定Hsp70-IRES-EGFP双顺反子慢病毒载体构建正确,包装病毒感染细胞后荧光显微镜观察到细胞发绿色荧光,RT-PCR和western blot检测均表明感染病毒后细胞Hsp70的表达量明显增加.结论 成功构建了Hsp70-IRES-EGFP双顺反子慢病毒载体,为后续研究Hsp70的功能和作用机制奠定了一定的基础.
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HSP70单克隆抗体诱导宫颈癌细胞凋亡的实验研究
目的:体外培养宫颈癌细胞株,免疫化学方法检测阻断HSP70前后的表达;方法:TUNEL技术观察不同浓度热休克蛋白70单抗对细胞生长的影响.探讨热休克蛋白70(HSP70)单抗对宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用;结果:经不同浓度热休克蛋白70单抗后,免疫化学方法检测HSP70的表达显著受到抑制.TUNEL技术检测出细胞凋亡;结论:表明热休克蛋白70单克隆抗体明显诱导宫颈癌细胞调亡.
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糖尿病周围神经病变与NF-κB、TNF-α和HSP70的关系
糖尿病周围神经病变(DPN)是一种常见的糖尿病并发症，主要发病机制与高血糖引起的代谢紊乱、氧化应激、神经营养障碍及遗传因素等有关。氧化应激可以通过包括多元醇途径、己糖胺途径、蛋白激酶C途径的激活以及糖基化终末产物(AGES)的形成等代谢途径间接引起神经元和轴突的损伤，同时直接损伤了神经细胞。其中NF-κB、TNF-α和HSP70在糖尿病周围神经病变的氧化应激的过程中扮演了不同角色。
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早期自然流产蜕膜组织细胞凋亡与热休克蛋白70、P53的表达
目的 观察早期自然流产蜕膜组织细胞凋亡情况及与热休克蛋白70(HSP70)、P53表达的关系.方法 采集20例正常早孕人工流产和20例早期自然流产的蜕膜组织,应用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测蜕膜组织细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测蜕膜组织中热休克蛋白70、P53的表达.结果 (1)早期自然流产组蜕膜与正常早孕蜕膜组织相比,凋亡显著增加(P<0.01);(2)蜕膜组织中HSP70、P53表达,自然流产组与正常早孕组相比显著增强(P<0.01).结论 蜕膜组织凋亡过度可能为自然流产发生机制之一,蜕膜细胞凋亡的增多与P53表达上调具有一致性;HSP70不能抑制蜕膜细胞凋亡,可能对蜕膜细胞有保护作用.
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苯并[a]芘对原代培养大鼠神经元细胞损伤及Hsp70表达的影响
目的 研究苯并[a]芘(B[a]P)对体外原代培养大鼠神经元细胞损伤及热休克蛋白70(HBpT0)表达的影响.方法 分离培养l -3 dSD大鼠皮层神经元细胞,不同剂量B[a]P+s9染毒处理24 ho光镜观察神经细胞的形态学变化,MTT法检测细胞活性,紫外分光光度法检测细胞培养液中LDH活力和MDA的含量,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,碱性单细胞凝胶电泳检测细胞DNA损伤情况,Western blot法检测细胞Hsp70的表达水平.结果 随着B[a]P剂量的增大,神经元细胞的轴突和树突的数量减少,长度缩短,部分细胞出现空泡化,细胞活力下降.培养液中LDH活力、MDA含量和细胞Olive尾距、细胞凋亡率均随B[a]P剂量增大而升高,0.5～10 μmol/L组与Oμmol/L组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).0.5～10 μmoL/L组神经细胞Hsp70表达水平随剂量增大而下降,显著低于0.1μmol/L组(P<0.05),10 μmol/L组显著低于0μmol/L组(P<0.05).相关分析显示,MDA与LDH、Olive尾距、细胞凋亡率呈显著正相关,与细胞活力、Hsp70表达水平呈显著负相关.HspT0表达水平与LDH、Olive尾距、细胞凋亡率呈显著负相关,与细胞活力（A值）呈显著正相关.LDH、Olive尾距与细胞凋亡率之间呈显著正相关.结论 B[a]P代谢产物可导致体外原代培养神经元细胞损伤和凋亡,抑制Hsp70表达.BEa]P抑制Hsp70表达可能与其神经毒性有关.
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酒精对胎鼠脑星型胶质细胞热休克蛋白70表达和细胞超微结构的影响
目的研究酒精对大鼠胚胎脑星型胶质细胞热休克蛋白HSP70表达和细胞超微结构的影响.方法对体外分离培养的大鼠胚胎脑星型胶质细胞分别施以不同剂量酒精(1、5、25、50mmol/L),以免疫细胞化学技术观察酒精对其HSP70表达的影响,并结合电镜技术观察其超微结构的变化.结果随酒精剂量增加,胎鼠脑星型胶质细胞HSP70阳性表达与剂量成正相关;25mmol/L和50mmol/L剂量组存活细胞个数减少,细胞膜和线粒体发生损伤,部分细胞出现凋亡和坏死.结论提示酒精能通过增强星型胶质细胞HSP表达抑制维持正常功能蛋白质的表达,并可通过损伤星型胶质细胞的细胞膜和线粒体导致凋亡和坏死.
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HSP7O基因多态性对煤工尘肺遗传易感性的影响
目的 探讨职业人群中HSPTO基因对煤工尘肺遗传易感性的影响.方法 随机选取河南省某煤矿的工人200例,其中100例胸片结果判定为0+的为病例组,100例胸片结果判定为正常的为对照组.采用PCR-RFLP方法检测两组观察对象中HSP70的基因型分布情况.结果 病例组HSP70-1 b2/b2基因型的频率明显高于对照组(x2=8.26,P<0.05),b2/b2基因型个体发生煤工尘肺的风险是b1/b1基因型个体的2.36倍(OR=2.36,95%CI=1.61～3.30);而HSP70-2和HSP70-hom的多态性在两组间差异无显著性.结论 HSP70-1 b2/b2基因型可能是煤工尘肺的一个易感基因型,存在该基因型的机体可能更容易罹患煤工尘肺.
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苯并[a]芘对体外培养大鼠皮层神经元HSP70表达的影响
目的 研究苯并[a]芘(B[a]P)对体外培养大鼠皮层神经元热休克蛋白70(HSP70)表达的影响.方法 分离培养SD大鼠皮层神经元,用0、0.1、0.5 、1、5和10μmol/L浓度的B[a]P染毒24h观察剂量-效应关系;用0、0.5和5μmol/L浓度的B[a]P染毒24、48和72h观察时效关系.培养液中均添加体积分数为3%的S9混合液.MTT法检测神经元活性,Western b1ot法检测神经元HSP70的表达水平,荧光免疫组化法观察神经元HSP70表达定位情况.结果 B[a]P染毒24h后,0.1μmol/L组神经元HSP70表达水平与对照组(0μmol/L组)相比差异无统计学意义(P＞0.05),而0.5～10μmol/L组神经元HSP70表达水平则逐渐下降,与0.1μmol/L组相比,差异均具有统计学意义(P＜0.05),其中10μmol/L组与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05).0、0.5、5μmol/LB[a]P分别染毒24、48、72h后,0.5、5μmol/L组各时间点神经元的HSP70表达水平均显著低于相应对照组(P＜0.05),且均有随着时间延长表达水平降低的趋势,其中72h组与24h组比较差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组化结果显示,对照组HSP70仅在细胞浆中表达,0.1μmol/L组荧光表达增强,细胞浆和核中均有表达.随着剂量增大,核内表达逐渐增多,荧光强度逐渐减弱.结论 较大剂量(0.5～10μmol/L)的B[a]P代谢产物可抑制大鼠皮层神经元HSP70表达,且存在剂量-效应关系和时效关系.随着B[a]P剂量增大,HSP70逐渐向细胞核内移位.
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热化联合对肺癌A549细胞生长、c-Jun N-末端激酶磷酸化及热休克蛋白70表达的影响
目的 研究热化联合对肺部肿瘤生长的影响及其可能的机制.方法 采用临床常用剂量(43℃加热联合50μg/L紫杉醇),通过单纯化疗、单纯热疗及热化联合的方法处理肺癌A549细胞,以未处理的A549细胞作对照,应用噻唑蓝比色法检测各处理方式下细胞增殖率的变化,进行损伤修复实验观察比较各组细胞的侵袭力,并通过蛋白免疫印记法检测JNK磷酸化和热休克蛋白70(HSPTO)的表达.结果 热化联合组细胞增殖率低于单纯化疗、单纯热疗及热化联合加JNK抑制荆SP600125组(P＜0.05),而热化联合加SP600125组的细胞增殖率与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05);热化联合组的细胞侵袭力较其他组有所减弱;热化联合组JNK磷酸化的水平高于对照组及单纯化疗组(P＜0.05);HSP70在热化联合组的表达低于单纯热疗组(P＜0.05).结论 热化联合对肺癌A549细胞生长增殖的抑制作用强于单纯热疗和单纯化疗,这种抑制作用可能是通过激活JNK信号通路或抑制HSP70的表达完成的.
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高温、苯并芘-7,8-二醇-9,10-环氧化物单独作用对人肺腺癌细胞Hsp27、Hsp70表达的影响
目的研究不同温度和不同浓度B(a)P-7,8-二醇-9,10-环氧化物(BPDE)作用A549细胞后,热休克蛋白27(HSP2)、热休克蛋白70(Hsp70)的表达规律.方法体外培养的A549细胞分为高温应激组和BPDE组.37℃培养的细胞作对照,高温应激组细胞置于高温(39℃、42℃、43℃)应激2小时.BPDE组用不同浓度的BPDE(0、2、4、8μmol/L)染毒2h.利用Western-blot技术分析A549细胞株中Hsp27、Hsp70的表达水平.结果高温应激组细胞Hsp27的表达较37℃对照明显升高,差异均有显著性(P＜0.05).在39℃,Hsp27的表达水平达到峰值.高温处理后,Hsp70的表达也增加,在42℃达到高,且与对照相比差异有显著性(P＜0.05).BPDE组Hsp27、Hsp70的表达均较对照明显升高,其中Hsp27的表达水平在实验用高浓度8μmol/L达到高,且与对照比较差异有显著性(P＜0.05),但仍处于上升阶段.Hs一0在4μmol/L达到高,在4μmol/L和8μmol/L时,Hsp70的表达水平与对照比较差异有显著性(P＜0.05).结论高温和BPDE均能诱导A549细胞Hsp27、Hsp70的表达.高温应激时,Hsp27和Hsp70的表达水平分别在39℃和42℃达到峰值.BPDE处理时,Hsp27在8μmoll/时表达高,但仍处于上升趋势,而Hsp70在4μmol/L时表达高.
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HSF1/HSP70通路抑制c-Jun氨基末端激酶的活化保护UVA诱导的HaCaT细胞凋亡
目的 观察热休克转录因子1( HSF1)与热休克蛋白70( HSP70)对紫外线A(UVA)诱导HaCaT细胞凋亡的保护作用及其机制.方法 建立8mJ/cm2 UVA辐射损伤HaCaT细胞的病理模型.将细胞随机分为对照组、8mJ/cm2 UVA照射组、HSP70转录抑制剂组(50 μmol/L槲皮素).Honechst 33258荧光染色观察细胞凋亡；蛋白质印迹法检测UVA辐射HaCaT细胞后p-HSF1和HSP70蛋白的经时变化及UVA辐射后孵育6h JNK(c-Jun氨基末端激酶)、p-JNK的蛋白表达；Real-Time PCR检测HSP70 mRNA的表达.结果 UVA辐射后HaCaT细胞内p-HSF1、HSP70蛋白表达量均出现先增加后减少的时间依赖性趋势,其中p-HSF1于lh开始增加,3h达高峰,HSP70于6h达高峰,24h基本恢复原始水平；UVA辐射前预先加入HSP70转录抑制剂槲皮素能显著抑制HSP70 mRNA的表达,增加p-JNK的表达量,同时Honechst 33258荧光染色观察其与UVA辐射组比较凋亡率明显升高.结论 8mJ/cm2 UVA辐射HaCaT细胞在一定时间内可使HSF1活化致HSP70表达增加.HSFl/HSP70通路对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡具有保护作用,其机制与HSP70大量表达后抑制JNK的活化有关.
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热休克蛋白70-1基因多态性与缺血性脑卒中易感性的前期研究
目的 探讨热休克蛋白70-1(HSP70-1)基因多态性与缺血性脑卒中的关系. 方法 采用1∶1配比病例-对照研究设计,选择深圳市两家综合性医院的116例缺血性脑卒中患者为病例组,同时选择年龄、性别匹配116例健康者作为对照组.采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)方法检测HSP70-1多态性,同时按照流行病学方法设计调查表进行问卷调查. 结果 HSP70-1基因型及等位基因频率在两组中的分布差异有统计学意义(P＜0.05),病例组b2等位基因频率(36.64%)明显高于对照组(21.99%)(P＜0.001);条件logostoc回归分析显示,HSP70、高血压和吸烟是缺血性脑卒中发病的独立危险因素,OR值分别为5.41、2.79和8.17,饮茶则为缺血性脑卒中的保护性因素OR值为0.18. 结论 HSP70-1突变基因型与缺血性脑卒中易感性有关.
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肺结核患者血浆中热休克蛋白70的表达及意义
目的 通过检测肺结核患者外周血中热休克蛋白70(HSP70)的表达情况,旨在探讨HSP70与肺结核的关系.方法 采用双抗体夹心ELISA法检测32例活动性肺结核组患者外周血中HSP70蛋白的表达情况,并与25例稳定性肺结核组及30例健康对照组进行对照分析.结果 活动性肺结核患者血浆中HSP70蛋白表达水平为(7.5±1.3)ng/ml,显著高于稳定性肺结核组(5.5±1.7)ng/ml及健康对照组(5.3±0.8)ng/m(P＜0.01);稳定性肺结核组与健康对照组比较差异无显著性(P＞0.05).结论 活动性肺结核患者存在HSP70的过度表达,提示HSP70可能通过某些未明机制参与活动性肺结核的发病,并可辅助肺结核活动性的判断.
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职业慢性心理应激与血清热休克蛋白70及肿瘤坏死因子-α表达水平的关联研究
目的 探讨职业慢性心理应激与血清热休克蛋白70 (HSP70)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的关系.方法 采用病例-对照研究设计,于2011年10月-2012年10月,选取宁夏回族自治区2家医院中确诊的20～ 60岁无血缘关系的代谢综合征(MS)患者作为病例组,共计622例.同期选取前往上述2家医院进行健康体检的健康人群作为对照组,共600名.通过问卷方式调查研究对象性别、年龄、民族、身高、体重、吸烟、饮酒、运动等情况.经知情同意,均采集空腹静脉血样10 ml进行实验室生化指标检测.采用ELISA测定血清中HSP70与TNF-α表达量.采用经修订的职业紧张量表(OSI),调查研究对象职业慢性心理应激因素及应激水平.采用偏相关分析法分析职业慢性心理应激总分与HSP70、TNF-α相关性;以HSP70、TNF-α为自变量,以职业慢性心理应激总分为因变量,构建多元线性回归分析方程,采用方程决定系数R2判断方程的拟合程度.结果 全部调查对象慢性心理应激因素总得分为(136.65±16.19)分.其中,轻度应激水平组313名、中度588名、重度321名,慢性心理应激因素得分分别为(119.96±13.30)、(135.33±3.23)、(155.33±13.55)分.病例组调查对象HSP70在轻度、中度及重度职业慢性心理应激水平组表达水平分别为(29.88±30.08)、(36.38±30.08)、(27.16±23.77) ng/ml (F=6.85,P=0.001);对照组分别为(27.64±9.89)、(39.78±29.77)、(3.94±3.09) ng/ml(F=125.71,P＜0.001).多元线性回归分析结果显示,心理应激水平与HSP70为负线性关系,与TNF-α为正线性关系,拟合回归方程为y=-0.07x1+0.01 1x2+136.88.偏相关分析结果显示,职业慢性心理应激总分与HSP70呈负相关(r=-0.11,P＜0.001),与TNF-α呈正相关(r=0.11,P＜0.001).全体调查对象中HSP70在轻度、中度及重度职业慢性心理应激水平组表达水平分别为(28.49±20.10)、(37.99±29.96)、(17.98±21.77) ng/ml(F=64.08,P＜0.001);TNF-α的表达水平分别为(133.61±129.51)、(171.23±133.69)、(169.31±196.09) pg/ml(F=6.93,P=0.001).结论 血清HSP70、TNF-α的表达水平受职业慢性心理应激的影响,职业慢性心理应激水平增高时,血清HSP70表达水平降低,TNF-α表达水平升高.
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艾灸血浆对离体人胃黏膜上皮细胞损伤的保护作用及其线粒体细胞凋亡通路机制
目的:探讨艾灸血浆对胃黏膜细胞调亡的影响,揭示艾灸对胃黏膜细胞的保护作用及其信号转导机制.方法:24名健康人随机等分为艾灸穴位组和艾灸非穴位组,分别艾灸中脘、关元和足三里穴及非穴位对照点各10d.将人体胃黏膜上皮(GES-1)细胞分为空白组、模型组、艾灸穴位血浆组、艾灸非穴位血浆组,采用含8%乙醇的培养液造成GES-1细胞损伤模型,分别加以预先提取的灸前人体血浆、艾灸穴位和非穴位血浆.流式细胞技术检测细胞凋亡率;Western-blot法检测细胞内热休克蛋白70 (HSP 70)、第二个线粒体来源的胱氨酸酶激活物(Smac),凋亡诱导因子(AIF)的表达;细胞免疫化学法检测半胱氛酸天冬酸蛋白酶-3、9(Caspase-3、9)的表达.结果:模型组与空白组比较,细胞凋亡率明显增加,HSP 70、Smac、AIF、Caspase-3、Caspase-9 表达均上调(均P<0.01);艾灸穴位血浆组与模型组比较,凋亡率明显下降(P<0.01),HSP 70表达进一步提高(P<0.01),Smac、AIF、Caspase-3、Caspase-9 表达下调(均P<0.01);艾灸非穴位血装组与模型组比较,凋亡率、Smac表达下降,Caspase-3、Caspase-9表达也下调(均P<0.01),但高于艾灸穴位血浆组(P<0.05,P<0.01).结论:艾灸中脘、关元和足三里穴位后提取的人体血浆能抑制GES-1细胞凋亡,其信号转导通路可能是:促进细胞内HSP 70合成,通过线粒体凋亡通路,抑制Smac、AIF表达,同时阻断其与Caspase-9的结合,减少Caspase-3含量,抑制细胞凋亡.
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逆针灸"关元"穴对更年期大鼠脾脏热休克蛋白70及其mRNA表达和血清白介素-2、肿瘤坏死因子-α含量的影响
目的:观察逆针灸"关元"穴对自然更年期大鼠免疫功能的影响.方法:经阴道筛查出动情周期紊乱的10月龄SD雌性大鼠160只,随机分为自然10、12、14、16月龄组,逆灸12、14、16月龄组和逆针12、14、16月龄组.另选3.5月龄健康SD雌性大鼠16只为年轻对照组.逆灸、逆针各组从大鼠10月龄开始,每周灸或针"关元"穴2次,共8周.采用免疫组化法检测脾脏热休克蛋白70(HSP 70),原位杂交法检测HSP 70mRNA表达,放射免疫法测定血清白介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量.结果:更年期大鼠随着月龄的增长脾脏HSP 70及HSP 70 mRNA的表达呈先升后降的变化,血清IL-2含量波动性降低,TNF-α含量先降后升.与自然同月龄组相比,逆灸、逆针各月龄组HSP 70及HSP 70 mRNA表达和IL-2含量均呈增加趋势,其中逆灸、逆针12月龄组HSP 70及HSP 70 mRNA,逆灸14、16月龄组HSP 70,逆针14月龄组HSP 70 mRNA的表达差异具有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05),IL-2含量逆灸14月龄组明显升高(P＜0.05);TNF-α含量逆灸、逆针12月龄组均明显升高(P＜0.01),逆灸16月龄组明显降低(P＜0.05).同月龄逆灸、逆针组相比,逆针12月龄组HSP 70 mRNA显著升高(P＜0.05).结论:逆针灸"关元"穴对调整更年期免疫功能紊乱具有一定作用,其机制可能与调节脾脏组织细胞HSP 70及其基因的表达,启动了机体内在的抗病与应变能力,从而调节血清免疫因子IL-2、TNF-α的含量有关.
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电针"三阴交"穴对痛经大鼠子宫丙二醛、β-内啡肽含量及热休克蛋白70表达的影响
目的:观察电针"三阴交"对痛经大鼠子宫的保护作用,分析其镇痛作用的机制.方法:通过阴道涂片法,筛选出处于动情间期的3月龄SD雌性大鼠48只,以苯甲酸雌二醇和缩宫素制造痛经模型.按照随机数字表法将大鼠分为盐水组、模型组、电针组(造模结束后电针双侧"三阴交"穴20 min),每组16只.采用放射免疫法检测大鼠子宫丙二醛(MDA)、β-内啡肽(β-EP)含量,免疫组化法检测子宫热休克蛋白70(HSP70)的表达.结果:与盐水组比较,痛经模型组大鼠子宫MDA含量显著升高(P<0.01),子宫β-EP含量显著降低(P%0.01),子宫HSP 70表达有降低趋势.与模型组比较,电针组大鼠子宫MDA含量明显降低(P<0.01),子宫β-EP含量显著升高(P<0.01),并有升高痛经模型大鼠子宫HSP 70表达的趋势.结论:电针"三阴交"穴可以清除痛经大鼠子宫的氧自由基,增加子宫局部镇痛物质β-EP,这可能是其对子宫保护和镇痛作用的机制之一.
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艾灸对亚急性衰老大鼠松果体细胞数及热休克蛋白70表达的影响
目的:探讨艾灸延缓衰老的可能作用机制.方法:将30只实验大鼠随机分为空白组、模型组、艾灸组,每组10只.皮下注射25%D-半乳糖溶液(125 mg/kg)造成大鼠衰老模型.艾灸组选取双侧"脾俞""肾俞"进行艾灸治疗,每日治疗1次,每次每穴灸5 min,连续治疗6周.采用组织化学染色及多克隆杭体免疫组化技术,结合细胞医学图像分析及病理图文图像分析方法,测定各组大鼠松果体细胞数及HSP 70表达.结果:与空白组相比,模型组大鼠松果体细胞数显著减少(P<0.001),HSP 70表达显著降低(P<0.01).与模型组相比,艾灸组大鼠松果体细胞数显著增多(P<0.01),HSP 70表达显著增加(P<0.05).结论:艾灸可能通过上调脑区松果体中HSP 70表达、减缓机体衰老过程中松果体细胞减少的速度,在一定程度上维持松果体的正常形态及功能,延缓松果体衰退,从而起到抗衰老的作用.这可能是艾灸延缓机体衰老机制之一.
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针灸预处理对心肌缺血再灌注损伤兔不同时间热休克蛋白27、70、90表达的影响
目的:探讨针灸预处理诱导热休克蛋白(HSP)表达对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)兔延迟保护作用的机制.方法:新西兰大耳白兔随机分为假手术组、模型组、电针组和艾灸组,每组18只,各组按预处理后不同时相再分为0、24、48h3个亚组,每组6只.电针组及艾灸组造模前电针或艾灸“内关”,每次20 min,每日1次,共治疗5d.各组于预处理5d后0、24、48 h行冠脉结扎法复制心肌缺血再灌注模型.HE染色观察左心室肌病理变化,电镜观察左心室肌超微结构变化.免疫组化法检测兔心肌组织HSP 27、HSP 70、HSP 90的表达.结果:各组预处理家兔的HE染色及超微结构结果显示,与假手术组比较,模型组心肌损伤较严重,肌纤维紊乱,部分溶解,小血管扩张;与模型组比较,电针组及艾灸组心肌损伤较轻,肌纤维大多正常,肌丝间局灶性水肿减少,线粒体丰富.在不同时相,模型组心肌HSP 27、HSP 70、HSP 90表达与假手术组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).在0h时,各组兔心肌HSP 27表达差异均无统计学意义(P＞0.05);在24、48 h时,电针及艾灸组比模型组的心肌HSP 27表达均明显增强(P＜0.05,P＜0.01).在0、24 h时,艾灸组的HSP 70表达均高于模型组(P＜0.05,P＜0.01),而且在24 h时,艾灸组HSP 70的表达明显高于电针组(P＜0.05);在48 h时,艾灸组及电针组HSP 70的表达均明显高于模型组(P＜0.01).0、24、48 h各组的HSP 90表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:电针与艾灸“内关”对兔MIRI均有预保护作用,可减轻兔心肌组织病理改变,其作用与心肌组织HSP 27及HSP 70表达的增强有关,且这种预保护效应存在时间差异,体现在24、48 h时更为明显,提示电针与艾灸均具有延迟性保护作用.
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针灸预处理对不同时间心肌缺血再灌注损伤兔血浆内皮素、血清肌酸激酶和心肌组织热休克蛋白70表达的影响
目的:探讨针灸预处理对心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)兔的心肌预防保护机制.方法:将新西兰大耳白兔随机分为假手术组、模型组、电针预处理组和艾灸预处理组,各组按预处理后造模时间再分3个亚组,每组6只.电针预处理组及艾灸预处理组造模前电针或艾灸“内关”,每次20 min,每日1次,共治疗5d.各组分别于预处理5d后0、24、48 h行冠脉结扎法复制兔心肌缺血再灌注模型.酶联免疫法检测血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)及血浆内皮素(endothelin,ET),用免疫组化法检测心肌组织热休克蛋白70(heat shock protein,HSP 70)表达.结果:与假手术组比较,模型组各不同时间段血浆ET含量和血清CK含量明显升高(P＜0.01,P＜0.05),HSP 70表达虽有所增强,但差异无统计学意义(P＞0.05).与模型组比较,电针预处理24、48 h血浆ET含量及血清CK含量均降低(P＜0.01,P＜0.05),艾灸预处理48 h血浆ET含量降低(P＜0.01);电针预处理后48 h及艾灸预处理后0、24、48 h HSP 70表达较模型组显著升高(P＜0.01,P＜0.05),其中艾灸24h组HSP 70表达又显著高于电针24 h组(P＜0.01).结论:电针与艾灸预处理对MIRI均具有预防保护作用,其作用机制可能与血浆ET含量、血清CK含量减少,及心肌组织HSP 70表达增强有关,这种预防保护效果还存在时间的差异,电针与艾灸均具有延迟保护作用.
