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羊瘙痒因子263K感染仓鼠临床终末期脑中αB-晶体蛋白表达的研究
αB-晶体蛋白(αB-crystallin)是小热休克蛋白(Small heat shock protein,sHSP)家族的代表成员,已发现与多种神经退行性疾病发生发展密切相关,但至今为止对αB-晶体蛋白在朊病毒病发生发展中可能扮演的角色研究甚少,作用尚不清楚.本研究利用羊瘙痒因子仓鼠敏感株263K感染仓鼠建立的朊病毒实验动物模型,通过免疫印迹(Western blots)和免疫组织化学染色观察到伴随PrPSc在感染终末期动物脑组织中大量沉积,αB-晶体蛋白表达显著上调,比正常对照增高3倍.免疫荧光双染确定其分布的主要细胞类型为星形胶质细胞,神经元中未检测到表达.感染动物中高表达的αB-晶体蛋白与异常沉积的PrPSc无明显共定位.此研究为进一步探讨和揭示αB-晶体蛋白在朊病毒病中可能的作用和分子机制奠定了基础.
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老龄大鼠心肌缺血预处理后αB-晶体蛋白表达变化的研究
目的:观察小分子热休克蛋白αB-晶体蛋白在青年大鼠及老年大鼠心肌缺血预处理后mRNA和蛋白表达的变化,探讨αB-晶体蛋白表达与老龄大鼠部分丧失缺血预处理保护作用的关系.方法:2～3月龄及24月龄SD大鼠各24只,雌雄不限,分别按照随机分组原则分为老年对照组(n=4)、老年预处理组(n=20)、青年对照组(n=4)、青年预处理组(n=20).两预处理组予停灌5min、复灌5min,连续3次,制备缺血预处理模型,于末次灌注后0、5、15、45和60 min,两对照组于假手术后持续灌流60 min取左心室缺血的前壁与非缺血的后壁心肌组织分别匀浆,采用RT-PCR方法观察大鼠αB-晶体蛋白mRNA在不同时间点的表达情况;离心取上清及沉淀蛋白,用Western Blot方法检测缺血预处理不同时间αB-晶体蛋白在可溶性蛋白及不溶性细胞骨架中含量的改变;新鲜冰冻心肌组织采用免疫荧光方法标记αB-晶体蛋白,在激光共聚焦显微镜下观察αB-晶体蛋白的分布情况.结果:①老龄大鼠αB-晶体蛋白mRNA的基础表达量与青年大鼠相比未见明显差异;缺血预处理后约15 min,其表达在老龄大鼠及青年大鼠均有所增加;②青年大鼠心脏缺血预处理后即刻前壁缺血组织αB-晶体蛋白从胞浆(上清液)移至不溶性成分细胞骨架(沉淀),至15 min时大部分移到沉淀中,在45 min时则几乎全部复位到上清中,而老龄大鼠心肌中αB-晶体蛋白在各时间点均未发生明显移位.③免疫荧光检查显示青年大鼠αB-晶体蛋白在缺血预处理后15 min向Z线及润盘部位聚集;老年大鼠中αB-晶体蛋白移位程度与成年大鼠相比明显减弱.结论:老年大鼠心肌组织中αB-晶体蛋白移位能力降低,从而减弱了与各相应蛋白结合的能力,这可能是老年大鼠缺血预处理保护作用减弱的重要原因之一.
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αB-晶体蛋白在放射性白内障大鼠眼晶状体中的表达
目的 检测受不同剂量X射线照射的大鼠晶状体中可溶性口αB-晶体蛋白的表达水平,探讨αB-晶体蛋白与放射性白内障形成之间的关系.方法 用直线加速器X射线一次性照射SD雄性大鼠双眼,建立放射性白内障模型.将大鼠分为健康对照组、实验对照组和5、15及25 Gy照射组.于照射后3个月将大鼠处死,取晶状体作匀浆,取其上清液(可溶性晶状体蛋白质)采用免疫印迹法(Western blot)检测αB-晶体蛋白的表达.结果 健康对照组、实验对照组和5 Gy组未出现晶状体混浊,15和25 Gy的照射组逐渐形成典型放射性白内障.蛋白免疫印迹结果显示随着照射剂量的增加,SD大鼠眼晶状体内可溶性αB-晶体蛋白逐渐减少,差异有统计学意义(F=40.764,P＜0.05).结论 在放射性白内障中晶状体内可溶性αB-晶体蛋白表达减少,在白内障形成中起重要作用.
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αB-晶体蛋白对乳鼠心肌细胞在缺氧/复氧条件下的表达及保护作用的实验研究
目的 研究在缺氧/复氧条件下随着缺氧时间延长αB-晶体蛋白对原代培养心肌细胞中caspase-3的影响.方法 以阳离子脂质体(LipofectamineTM 2 000)介导,将原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞分为转染组(转染pEGFP-αB-crystallin-C3)、空载组(转染pEGFP-C3)和空白组(无任何质粒转染),转染后分别缺氧培养6、12、18h后复氧12h,Westem Blot半定量检测αB-晶体蛋白和caspase-3活化产物p17表达.结果 转染组心肌细胞αB-晶体蛋白表达有下降趋势,但差异无显著性(P>0.05);转染组p17与空白组和空载组比较,明显降低(P<0.05),在缺氧6～18h内,随着缺氧时间延长,表达相对稳定,有下降趋势但差异无显著性(P>0.05);在缺氧12h后,各组p17表达量趋于平稳.结论 在缺氧/复氧条件下,αB-晶体蛋白可能具有抑制caspase-3活化,抗细胞凋亡作用;在缺氧6～18h内,随着缺氧时间延长,αB-晶体蛋白抑制caspase-3活化的作用虽有下降趋势,但基本相对稳定.
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aB－晶状体蛋白在“三阴”性乳腺癌组织中的表达及其临床意义的研究
目的：比较αB－晶状体蛋白在“三阴”性与非“三阴”性乳腺癌中表达的差异，探讨其临床意义。方法乳腺癌标本均来自肿瘤科2006～2008年乳腺癌手术患者（共160例），并经病理证实。其中浸润性导管癌82例，浸润性小叶癌36例，髓样癌42例。αB－crystallin，ER，PR，c－erbB2， p53蛋白检测均采用免疫组织化学S－P法。免疫组化法检测c－erbB2表达为（＋＋）及（＋＋＋）者进一步行FISH检测，以确定HER－2基因的扩增水平。结果 aB－晶状体蛋白在“三阴”性和非“三阴”性乳腺癌中的表达率分别为47．2％和9．7％（ P ＝0．000）；αB－晶状体蛋白的表达与腋淋巴结转移阳性（ P＝0．014）、“三阴”性（ P＝0．000）相关。结论 aB－晶状体蛋白在“三阴”性乳腺癌患者中高表达，与淋巴结转移明显相关，能为判断预后提供依据，并可能为“三阴”性乳腺癌提供新的治疗靶点。
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αB-晶体蛋白与放射性白内障的关系
目的 检测受大剂量X射线照射的大鼠晶状体中可溶性αB-晶体蛋白的表达水平,探讨αB-晶体蛋白与放射性白内障形成之间的关系.方法 取8周龄SD大鼠24只,随机分为3组,每组8只.正常对照组未予干预措施;实验照射组采用直线加速器(X射线25 Gy)一次性照射SD大鼠双眼,建立放射性白内障模型;实验对照组予假照射(照射源不含射线,余条件同照射组).照射后3个月处死大鼠,取晶状体作匀浆,取其上清(可溶性晶状体蛋白)用Western blot检测α B-晶体蛋白的表达.结果 正常对照组、实验对照组均未出现晶状体混浊,25 Gy照射组逐渐形成典型放射性白内障;Western blot结果显示,照射组SD大鼠眼晶状体内可溶性α B-晶体蛋白含量较实验对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.01).结论 X射线可降低晶状体中可溶性α B-晶体蛋白的含量,从而导致白内障.
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αB-晶体蛋白的特性与神经疾病
αB-晶体蛋白(αB-crystallin,αB-C)与缺血再灌注损伤、神经肌肉病变等多种疾病相关,在发挥分子伴侣保护作用的同时,αB-C本身的改变也可能致病.
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αB-晶体蛋白对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞轴突再生作用的研究
目的:研究αB-晶体蛋白对大鼠急性高眼压后视网膜组织中αB-晶体蛋白含量,视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)中生长相关蛋白-43(growth associated protein-43,GAP-43)表达和全视野视网膜电流图(full-field ERG,F-ERG)的b波振幅差异,探讨αB-晶体蛋白对急性高眼压后RGCs轴突再生的影响.方法:采用随机分组设计的实验研究.本实验选择120只健康、无眼疾SD大鼠,随机分为以下4组:αB晶体蛋白组(αB)30只,生理盐水组(S)30只,假手术组(P)30只,急性高眼压组(H)30只,均以右眼为实验眼,分别于术后7d和14d各取5只术眼的视网膜,行Western-blot法,观察急性高眼压后视网膜中αB-晶体蛋白的表达;术后7,14,21d各取5只术眼的视网膜,行免疫组织化学法,观察急性高眼压后RGCs的GAP-43表达;术前和术后1mo时应用全视野ERG的b波振幅变化测定视网膜功能.组间数据比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA),组间两两比较采用SNK-q检验.结果:αB组视网膜中αB-晶体蛋白的表达于术后7d较高,14d时表达减弱(P =0.000),但同一时间点明显高于其他三组(P=0.006,P=0.024,P=0.007;P=0.006,P=0.008,P=0.010);αB组RGCs的GAP-43表达于术后7d达高峰,14d时表达减弱,21d时仍有少量表达(P=0.000),但各时间点明显高于其他三组(P=0.001,P=0.002,P=0.001;P=0.015,P=0.002,P=0.006;P=0.005,P=0.003,P=0.005);ERG- b波振幅于术后1mo较低(P=0.014,P=0.004,P=0.003,P=0.006),其中术前各组ERG-b波振幅无明显差异(P=0.993),术后1mo时αB组ERG-b波振幅明显高于其他三组(P=0.000,P=0.004,P=0.002).结论:外源性αB-晶体蛋白能够提高视网膜αB-晶体蛋白的表达; αB-晶体蛋白通过促进RGCs中GAP-43的表达,从而促进RGCs的轴突再生;αB-晶体蛋白可促进视网膜功能的恢复,对大鼠视网膜无毒性作用.
