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单克隆抗体电荷异构体分离方法优化
单克隆抗体是复杂的四聚体糖蛋白，常呈现微观不均一性，即“异质性”，包括电荷、疏水、形态等相关的异构体[1]。这些异构体可能来自于抗体分子复杂的生物合成途径，如细胞系及培养工艺[2]，也可能来自于纯化、制剂等制造过程以及贮存过程的任何阶段[1]。其中由于抗体分子所带电荷差异造成的异质性称为电荷异构体，一般分为酸性异构体和碱性异构体，产生原因主要与翻译后修饰有关。电荷异构体宏观表现为在等电聚焦电泳图上出现弥散或多个条带；离子交换色谱图主峰前后出现小峰。由于这些异构体可能会影响抗体的稳定性、药效、免疫原性或药代动力学，特征性地识别和分离电荷异构体是至关重要的。基因泰克公司曾对上市抗体及临床前抗体药物关于电荷变化产生的药效、药代等方面的影响做过一个总结，结果表明：①当电荷变异超过一个 pH单位时，会影响药物的组织分布及药代动力学；②增加正电荷，会提高药物的组织停滞，降低血液清除；③降低正电荷，会减少药物的组织停滞，提高药物的全身清除[3]。因而分离电荷异构体，得到均一性质的抗体是一个关键的挑战，尤其在生物类似物开发过程中应尽可能控制异构体含量与原研药保持一致。
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苯磺酸贝他斯汀滴眼液中异构体分析方法研究
目的 建立苯磺酸贝他斯汀滴眼液中的异构体分析方法,并用此方法考察苯磺酸贝他斯汀滴眼液中苯磺酸贝他斯汀的异构体稳定性.方法 采用ULTRON ES-CD(6.0 mm×150 mm,5μm)手性柱,流动相为0.02 mol·L-1磷酸二氢钾-乙腈(75∶25),流速0.8mL·min-,柱温35℃,检测波长225 nm,进样量10 μL.结果 在225 nm检测波长下,苯磺酸贝他斯汀R-异构体检测限为12 ng,定量限为48 ng;在0.01 ～0.1 mg·mL-1内线性关系良好,高、中、低3个浓度重复性良好.结论 本方法准确可靠,稳定性好,可以用于苯磺酸贝他斯汀的异构体分析,并对苯磺酸贝他斯汀滴眼液中异构体稳定性进行考察.
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盐酸多塞平异构体的非水毛细管电泳分离
目的用非水毛细管电泳法分离盐酸多塞平异构体.方法采用未涂层石英毛细管柱(50 μm×47 cm,有效分离长度为40 cm),以用200 mmol*L-1醋酸铵的甲醇-乙腈(95∶5)溶液(含3.0%冰醋酸)为运行缓冲液,压力进样,时间4 s,运行电压为25 kV,检测波长为254 nm.结果方法分离效率高,精密度和回收率较好,所选浓度范围内线性关系良好,r值为0.999 8.结论方法简单可靠,分析时间短,可有效分离盐酸多塞平异构体.
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高效毛细管电泳法分离盐酸多塞平异构体
目的用高效毛细管电泳法分离盐酸多塞平顺、反式异构体.方法采用未涂层石英毛细管柱(50 μm×53 cm,有效分离长度为47.5 cm),以0.5%羟丙基β-环糊精的50 mmol@L-1磷酸二氢钠溶液(20%磷酸调节pH为2.5)为运行缓冲液,压力进样,运行电压为18 kV,检测波长为297 nm.结果方法分离效率高,精密度和回收率较好,所选浓度范围内线性关系良好.与HPLC方法比较,结果相近.结论方法简单可靠,分析时间短,结果准确可靠.
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格隆溴铵起始物料3-羟基-1-甲基四氢吡咯异构体的分析
目的 建立高效液相色谱法对格隆溴铵起始物料3-羟基-1-甲基四氢吡咯异构体进行检验.方法 以直链淀粉-3-氯苯基氨基甲酸酯键合型硅胶柱为固定相,正己烷-无水乙醇-三乙胺(体积比97∶3∶0.5)为流动相,柱温为35℃,流速为1.0 mL·rain-1,检测器为示差折光检测器,检测器温度为40℃.结果 3-羟基-1-甲基四氢吡咯异构体能达到良好分离.供试品溶液中两个异构体峰与R型、S型对照溶液中色谱峰的出峰时间一致,专属性良好;R型、S型检测限均为30.47 mg· L-;4h内供试品溶液稳定性良好;流速在(1.0±0.05) mL·min-1、柱温在(35±5)℃内耐用性良好.结论 所建立的分析方法适用于格隆溴铵起始物料3-羟基-1-甲基四氢吡咯异构体的质量控制稳定性监测.
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用Chiralpak IC柱分离4种碱性药物异构体
目的 建立手性HPLC法分离苄氟噻嗪、甲氯噻嗪、卡维地洛和戊乙奎醚4种碱性药物异构体.方法 使用Chiralpak IC手性固定相法,通过考察流动相中酸碱添加剂种类、极性醇类改性剂种类、流动相醇烷比例、柱温和流速等因素对异构体分离度的影响,对分离条件进行优化.结果 在优化的色谱条件下,4种药物异构体均达到了基线分离.结论 以Chiralpak IC柱为手性固定相的HPLC法适于分离上述4种碱性药物的异构体.
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Droloxifene枸橼酸盐的工艺改进及其新的生物活性(摘要)
目的探索droloxifene的合成方法，并对其新的生物活性进行研究。方法以甲氧基苯和苯乙酸为原料，经酰氯化、付-克反应、烷基化、去甲基化、醚化、格氏加成、消除脱水、构型转化及成盐共9步反应，得droloxifene枸橼酸盐，8步收率14.7％(9.2％)。结果生物活性实验发现其具有缓解肿瘤细胞多药耐药性和诱导黄体细胞凋亡的两种新的生物活性、结论对droloxifene的合成工艺进行了改进，反应步骤缩短两步，异构体分离、转化方法简便，原料及试剂易得，操作简便。两种新的生物活性的发现为新药研究及扩大临床应用提供了实验依据。[全文刊登于药学学报2000,35(12):902]
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β-环糊精手性流动相添加剂法测定爱维莫潘中的异构体
目的 建立爱维莫潘的高效液相手性拆分分析法.方法 选用C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为水溶液(含0.5％冰醋酸,0.5％三乙胺,1％β-环糊精)-甲醇(80∶20),柱温为40℃,检测波长为275 nm.结果 爱维莫潘和它的3个异构体都达到良好分离,分离度符合要求.结论 本方法具有专属性强,灵敏度高,重复性良好,耐用性好,简便快捷,使用成本低廉等优点.
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流动相对西罗莫司异构体在反相液相色谱上分离效果影响的研究
研究不同流动相对西罗莫司异构体在反相液相色谱上分离效果的影响,为准确测定西罗莫司的含量提供依据.色谱柱采用YMC J'sphere ODS-H80,流动相分别采用不同体积比例的水/乙腈 (40/60, 35/65, 30/70, v/v)或水/甲醇 (20/80, 15/85, 10/90, v/v).结果表明:以水/乙腈或水/甲醇二元溶剂为流动相时,随着有机溶剂比例的增加,西罗莫司异构体(β峰与γ峰)的保留时间都变短,峰宽都变狭窄,分离度也相应降低.选择流动相水/乙腈(35/65)或水/甲醇(15/85),西罗莫司的异构体(β峰与γ峰)均能完全分离.与流动相水/乙腈(35/65)相比,以水/甲醇(15/85)作流动相,西罗莫司β异构体色谱峰的保留时间更短,峰宽更狭窄,是水/甲醇与水/乙腈流动相体系中的佳条件.
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恩曲他宾对映体拆分及其右旋体含量分析方法研究
目的:采用高效液相色谱法使用手性柱实现恩曲他宾异构体的拆分.方法:色谱柱为直链淀粉衍生物填料AS-H 4.6 mm×250 mm 5μm柱,流动相为正己烷-异丙醇(20∶80);流速为0.30 mL·min-1.结果:使用AS-H手性柱能完全分离恩曲他宾的2个异构体,分离度为4.74.结论:本法可实现恩曲他宾异构体之间的分离以及恩曲他宾中右旋体的含量分析.
