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阿达木单抗ELISA定量检测方法的建立
治疗性单抗药物已经成为生物医药的重要组成部分,在疾病治疗上具有广阔的应用前景,成功用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应等多种疾病。随着研究的深入及技术的进步,治疗性单抗药物呈现出良好的发展势头[1-2]。阿达木单抗是一种全人源的 IgG1型单克隆抗体,可靶向作用于在自身免疫疾病发病机制中起重要作用的促炎细胞因子--人肿瘤坏死因子(TNF-α)。类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)、多关节型幼年特发性关节炎(juvenile idiopathic arthritis,JIA)、银屑病关节炎(psoriatic arthritis,PsA)和强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者关节滑液中均发现 TNF-α水平增高,这与炎症发生和关节破坏密切相关[3-4]。阿达木单抗可特异性、高亲和地与TNF-α结合,并阻止它与细胞表面 TNF-α受体 p55和p75结合,从而拮抗 TNF-α的生物活性,减少表皮厚度和炎性细胞浸润[5-6]。
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TNF-α基因启动子多态性与HBV感染转归的关系
目的:探讨中国汉族人肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)基因启动子单核苷酸多态性与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染结果之间的关系.方法:慢性乙型肝炎患者131例,HBV感染自愈者165组应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法,检测HBV感染自愈者和慢性乙型肝炎患者TNF-α基因启动子-238G/A,-308G/A,-857C/T和-863C/A单核苷酸多态性位点基因型.结果:对慢性乙型肝炎组和HBV感染自愈组人群TNF-α基因启动子区域的-238G/A,-308G/A,-857C/T和-863C/A 4个SNP位点进行基因型分析,共发现12种启动子基因型,以GG·GG·CC·CC,GG·GG·CC·CA,GG·GG·CT·CC和GG·GA·CC·CC基因型多见,约占85%.通过对慢性乙型肝炎患者和HBV感染自愈者TNF-α基因启动子4个位点基因型联合分析发现,GG·GG·CC·CC,GG·GG·CC·CA和GG·GA·CC·CC基因型在慢性乙型肝炎组和HBV感染自愈组分布差异有显著性,其中携带GG·GG·CC·CC基因型的个体患慢性乙型肝炎的机会比(odds ratio,OR)为2.15,95%可信区间为1.34-3.45;而携带GG·GG·CC·CA或GG·GA·CC·CC基因型的个体患慢性乙型肝炎的OR分别为0.48(95%可信区间为0.27-0.86)和0.35(95%可信区间为0.14-0.89).HBV感染的清除可能与GG·GG·CC·CA(X2=6.14,P=0.013<0.05)和/或GG·GA·CC·CC(X2=5.18,P=0.023<0.05)基因型有关.进一步对各位点单核苷酸多态性分析发现,慢性乙型肝炎患者和HBV感染自愈者TNF-α基因启动子-238G/A、-857C/T位点基因型分布频率差异无显著性,而-308G/A,-863C/A位点基因型分布频率差异有显著性(-308G/A位点,X2=6.53,P=0.011<0.05,OR=3.05;-863C/A位点,X2=4.33,P=0.037<0.05,OR=1.69).结论:TNF-α基因启动子-308G/A、-863C/A位点多态性与中国汉族人HBV感染后的结果有关,其中TNF0-α308G/A和/或-863C/A位点A等位基因的存在可能有利于HBV感染的清除.
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重组改构人肿瘤坏死因子心包腔内灌注治疗恶性心包积液
恶性心包积液是中晚期恶性肿瘤患者常见的严重并发症,以往多采用心包穿刺抽液并腔内化疗的方法,疗效不佳.我科采用心包腔内灌注重组改构人肿瘤坏死因子(rmhTNF)治疗心包积液,取得较好疗效,现将结果报告如下.
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重组改构人肿瘤坏死因子用于肝癌介入治疗后毒副反应的护理
重组改构人肿瘤坏死因子是一类基因工程抗肿瘤药物,可直接杀伤肿瘤细胞,使肿瘤出血、坏死、体积缩小.通过肝动脉插管联合化疗药物栓塞,可大大提高肿瘤局部药物浓度,降低非靶区药物浓度,减少化疗药物毒副反应,但其本身可引起一系列的不良反应,给患者的身心带来较大的痛苦.2005年4-6月,我科对20例原发性肝癌患者用rmhTNF与化疗药物联合栓塞治疗后引起的毒副反应实施了有效的护理,取得了良好的效果,现报道如下.
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心力衰竭病人肿瘤坏死因子与心功能相关性的初步研究
肿瘤坏死因子(TNF)是由激活的巨噬细胞分泌的一种具有多种生物学效应的细胞因子,已经发现它参与介导人体多种疾病的发生和发展。近年来的研究认为TNF在充血性心力衰竭(CHF)的病理过程中起着重要作用[1]。为了解心力衰竭病人TNF与心功能的关系,我们测定了43例心力衰竭病人血中TNF浓度,并与心功能参数作相关分析。现报告如下。
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哮喘病人肿瘤坏死因子基因的遗传多态性
支气管哮喘其发病涉及了遗传、免疫、环境等因素.国内外有报道支气管哮喘与HLA-B8、HLA DR3、DR4、DR7、HLA-DQ2等MHC相关.目前所发现的易感基因并不能解释支气管哮喘的所有的遗传特征,故许多学者仍在寻找新的与支气管哮喘发病有关的基因.
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检测重组人源抗人肿瘤坏死因子单克隆抗体甲氨蝶呤残留量的反相高效液相色谱法的建立及验证
目的 建立重组人源抗人肿瘤坏死因子单克隆抗体中甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)残留量检测甲反相高效液相色谱(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)法,并进行验证.方法 样品经饱和硫酸铵法沉淀蛋白,取上清液进样检测.色谱柱为Waters/ACQUITY UPLC BEH C18(1.7 μm,2.1 mm× 1OOmm),流动相为乙腈-甲醇-0.054 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(体积比6∶2∶92),pH6.5,检测波长302 nm,柱温:30℃,流速:0.25 mL/min,进样体积:10 μL,洗脱时间:15 min.同时验证方法的线性、特异性、准确度、定量限、精密性及耐用性.结果 该方法特异性良好;MTX浓度在4~ 200 ng/ mL范围内线性良好,R2>0.999;检测限为4 ng/mL;MTX浓度为20.0、50.0、100.0 ng/mL 3个加标样品的回收率分别为102.83%、100.33%、99.23%,3次重复检测结果RSD分别为1.56%、1.50%、0.42%,两位实验员6次检测结果的RSD分别为2.46%、1.27%、1.49%;MTX浓度为50.0 ng/mL的加标样品在流动相pH6.3、6.5、6.7条件下测定结果的RSD为2.02%.结论 本实验建立的方法具有良好的特异性、精密性及准确度,且操作简便,可用于重组蛋白药物研发及生产过程中残留MTX的监测.
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类风湿性关节炎治疗药阿达木单抗(adalimumab)
1商品名Humira2结构特点本品为抗人肿瘤坏死因子(TNF)的人源化单克隆抗体,是人单克隆D2E7重链和轻链经二硫键结合的二聚物.
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结核病人肿瘤坏死因子与细胞凋亡在治疗中的运用
目前,结核病仍然是世界范围内影响重大的公共健康问题,估计世界人口中1/3受到结核分支杆菌(Mtb)的感染.结核分支杆菌的主要感染途径是通过肺,是肺结核的病原.由于结核杆菌耐药株的出现和扩散,结核病正受到越来越多的重视.
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重组改构人肿瘤坏死因子胸腔灌注治疗恶性胸腔积液临床观察
目的 观察胸腔灌注重组改构人肿瘤坏死因子治疗恶性胸腔积液的疗效.方法 对32例恶性胸腔积液患者经胸腔引流管将重组改构人肿瘤坏死因子注入胸腔内治疗.结果 CR5例,PR 21例,NC6例.有效率81.2%.结论 该方法操作简单,副作用少,能有效控制恶性胸腔积液.
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人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体胞外区基因原核系统的表达与纯化
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)属于肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员之一,能够诱导前列腺癌、膀胱癌、肺癌等多种肿瘤细胞凋亡,但不影响正常细胞[1-3].本研究旨在观察重组TRAIL融合蛋白(GST-rTRAIL)的表达,探讨其包涵体蛋白的复性和纯化方法.
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钾通道在重组改构人肿瘤坏死因子抑制肺癌细胞增殖中的作用
钾(K+)通道在调节细胞的膜电位和兴奋性中起重要作用.我们应用重组改构人肿瘤坏死因子(rmhTNF)作用于人肺腺癌A-549细胞,运用膜片钳技术研究rmhTNF对细胞膜K+电流的影响,结合对细胞周期及凋亡的测定,探讨细胞膜K+通道在rmhTNF抗肿瘤过程中的作用.
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尿激酶型纤溶酶原激活物介导的肿瘤靶向性重组人肿瘤坏死因子-α的生物活性
目的 利用先前制备好的尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)介导的肿瘤靶向性重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)融合蛋白,验证uPA对融合蛋白的去封闭效果,并对融合蛋白的生物学活性进行初步研究.方法 以hTNF-α标准品为参照,对切除GST标签的融合蛋白(即foldon-uPA1-hTNF-α)和经uPA酶切后的去封闭融合蛋白(即rhTNF),用MTT法检测融合蛋白的细胞毒性、Hoechst 33258/PI荧光染色检测融合蛋白对CNE2-Z细胞的作用.结果 uPA对融合蛋白具有去封闭效果,融合蛋白和去封闭融合蛋白能诱导高表达uPA的肿瘤细胞凋亡.结论 经过改造的uPA介导的肿瘤靶向性rhTNF-α融合蛋白具有高效低毒和靶向性,为TNF的临床应用提供了理论基础.
关键词: 人肿瘤坏死因子 融合蛋白 尿激酶型纤溶酶原激活物 -
置管注入重组改构人肿瘤坏死因子治疗恶性心包积液的临床观察
恶性心包积液临床较常见,预后恶劣,治疗效果较差.自2004年5月以来我们采用经皮心包腔置管注入重组改构人肿瘤坏死因子(rmhTNF)治疗转移性心包积液16例,收到较好效果,报告如下.
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重组改构人肿瘤坏死因子胸腔内灌注治疗肺癌性胸腔积液
有效地控制胸腔积液在晚期肺癌的综合治疗中占有重要地位.我科采用胸腔内灌注超过机体大耐受剂量[1]的重组改构人肿瘤坏死因子(rmhTNF)治疗肺癌性胸腔积液取得较好疗效,现将结果报告如下.
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重组改构人肿瘤坏死因子联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌三例报告
重组改构人肿瘤坏死因子(recombinant mutant human tumor necrosis factor,rmhTNF)是利用蛋白质工程技术改造天然TNF而成的高活性、低毒性的基因工程TNF.多中心随机对照Ⅲ期临床试验已经证实rmhTNF联合化疗治疗肺癌等实体瘤有一定疗效[1].我们在2004年2月至4月间采用rmhTNF联合化疗治疗3例难治进展的晚期非小细胞肺癌(NSCLC),现将结果报道如下.
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重组改构人肿瘤坏死因子治疗恶性胸腹腔积液26例疗效观察
恶性胸腹腔积液是晚期肿瘤病人的常见并发症,多数属于疾病进展或复发的结果,也可作为癌症病人的首发临床表现.
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hsTR55/TR75-preS1融合蛋白的表达与应用
目的简化测定hTNFα及其突变体的受体竞争结合活性的方法.方法将乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)前S区(preS1)肽段(2~50)编码区,分别融合于hsTR55和hsTR75基因的C末端组成融合受体分子基因,并利用细小RNA病毒属脑炎心肌炎病毒EMCV的内核糖体进入位点(internal ribosome entry site, IRES),构建了hsTR55/hsTR75以及它们与preS1组成的融合受体分子hsTR55/hsTR75-preS1基因和新霉素抗性(neoR)基因的双顺反子表达载体,转染BHK-21细胞后用G-418持续筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株.结果 RT-PCR及ELISA均证实,两种融合受体分子表达,并且表达上清对hTNFα的活性均具有一定的中和作用.在对表达上清进行ELISA定量后,我们还用Biosensor方法测定了这些可溶性受体分子与hTNFα的结合常数.结果表明,在融合preS1肽段前后,hTNFα与受体分子的解离常数变化不大.结论利用表达的两种融合受体分子,成功地建立了一种检测hTNFα及其突变体的受体竞争结合活性的ELISA法,并利用该法测定了野生型hTNFα及其4种突变体的受体竞争结合活性,所获结果与利用125I-hTNFα测定的结果具有相当的可比性.
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hTNFα/CHO基因工程细胞的构建及其分泌蛋白功能的检定
目的:构建能够持续分泌人肿瘤坏死因子( hTNFα)的中国仓鼠卵巢细胞( CHO)基因工程细胞hTNFα/CHO细胞系,并且观察其分泌功能的变化。方法应用载体GV141构建携带hTNF基因表达的质粒;采用脂质体转染法,经G418筛选稳定转染细胞株;通过Real-Time PCR鉴定其基因表达,采用ELIAS法鉴定其蛋白分泌情况。结果经序列比对,证明GV141-hTNFα表达载体构建成功,Real-Time PCR证明转染细胞系包含hTNFα目的基因,ELIAS鉴定结果证明该细胞系可以在一定代数稳定持续内分泌hTNFα。结论构建的hTNFα/CHO细胞系可以在一定代数内稳定持续地分泌人肿瘤坏死因子。