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乙型肝炎病毒表位的意义和新的定量监测方法
PreS1抗原位于乙型肝炎病毒颗粒的外表面,介导病毒-宿主之间的相互作用.是病毒组装和感染侵袭的重要参与因素.对于临床诊断方面的意义在于,它直接反映了血清中HBeAg和HBV DNA的浓度.尤其对HBeAg阴性的病例,有重要的诊断意义.新的荧光定量PCR(FQ-PCR)技术,能够比ELISA技术更快速.灵敏并且能够定量地检测乙型肝炎病毒.将这一技术应用到PreS1基因的检测,将能够一次性检测乙肝病毒的感染数量和复制情况.
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乙肝病毒标记物阳性表型血清标本HBV-DNA水平分析
目的 分析乙肝病毒标记物阳性表型(Pres1、HBcAb-IgM、HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb-IgG中两项或两项以上阳性)血清标本中HBV-DNA水平,为乙型病毒性肝炎的诊断、病情发展及预后评估提供理论依据.方法 对以ELISA法检测Pres1、HBcAb-IgM、HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb-IgG项目中两项或两项以上同时阳性的652例标本用荧光定量PCR法检测HBV-DNA水平,并对检测结果进行统计分析.结果 非活动期标记物表型组可出现高水平HBV-DNA;正常对照组和非活动期标记物表型组血清HBV-DNA平均水平均明显低于活动期标记物表型组(P＜0.01);高水平HBV-DNA标本中不一定会同时出现Pres1、HBeAg、HBcAb-IgM等活动期标记物.结论 活动期乙肝病毒标记物检测阴性不能排除患者体内是否存在乙肝病毒复制,Pres1、HBeAg、HBcAb-IgM联合检测可以提高病毒感染阳性检出率,同时可以评估疾病的进展情况.
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急性乙型肝炎患者Pres1抗原和HBVDNA与ALT的动态观察
目的 了解前S1蛋白(PreS1)、乙型肝炎病毒(HBVDNA)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)与急性乙型肝炎(AHB)病程的关系.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、核酸扩增(PCR)荧光定量检测技术和双试剂法分别检测PreS1抗原、HBVDNA和ALT.结果 不同病程AHB患者血清PreS1抗原与ALT阳性符合率较高(P＞0.05),HBVDNA与ALT相比阳性符合率较低(P＜0.01).结论 AHB患者治疗过程中,PreS1抗原与ALT阴转基本一致,先于HBVDNA阴转,提示疾病的转归及预后较好.
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联合免疫后乙肝病毒母婴传播相关因素的临床研究
目的:研究联合免疫后乙肝病毒母婴传播的相关因素.方法:对100例乙肝病毒携带孕妇在妊娠28、32、36周注射乙肝免疫球蛋白(HBIG),分娩后检查脐血、初乳乙肝二对半及初乳乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA).婴儿出生后24h内及第4周注射HBIG,并按0、1、6的程序全程接种乙肝疫苗,出生2个月取静脉血测乙肝二对半.结果:100例婴儿中92例获得保护性抗体HBsAb,保护率92.00%(92/100).孕妇血清前S1抗原(PreS1)阳性与阴性者相比较乳汁HBsAg、HBeAg、HBV-DNA阳性率明显升高(分别P＜0.01,P＜0.001,P＜0.001),婴儿保护率明显降低(78.79%:98.51%,P＜0.05).血清HBeAg阳性与阴性者相比较乳汁HBsAg、HBeAg、HBV-DNA阳性率、脐血HBeAg阳性率明显升高(均为P＜0.001),婴儿保护率明显降低(77.27%:96.15%,P＜0.05).阴道分娩与剖宫产、母乳喂养与人工喂养组婴儿感染率、保护率差异无显著性(P＞0.05).结论:联合免疫有助于减少母婴垂直传播,提高婴儿的免疫成功率.血清PreS1、HBeAg阳性孕妇的婴儿保护率低.联合免疫后阴道分娩、母乳喂养不增加婴儿感染乙肝病毒的危险性.
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HBVPreS1抗原和HBV DNA的监测及临床评价
目的 研究HBV前S1抗原检测的临床价值,即HBVPreS1抗原与具有病毒活动性复制意义的指标HBeAg和HBV-DNA之间的相关性其与肝功能指标ALT之间的关系.方法 HBV前S1抗原和血清标志物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb-IgG、HBcAb-IgM)采用ELISA法检测;肝功能(ALT)用酶学速率法检测;HBV DNA用荧光定量PCR法检测.结果 ①HBeAg阳性组其HBV PreS1抗原检出率高.②HBV PreS1抗原与具有病毒活动性复制意义的指标HBV-DNA有良好的一致性.③慢性活动性肝炎肝功能指标ALT＞40 u/l组其HBV PreS1抗原检出率高.结论 HBVPreS1抗原和HBV DNA的检测结果可以较好地反映HBV的复制及慢性肝炎的活动情况.PreS1抗原可以作为HBeAg和HBV-DNA的补充,也可作为判断慢性乙型肝炎患者病情活动性的一项指标.对乙肝的诊断、疗效判断与观察具有较高的价值.
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时间分辨免疫荧光检测乙肝病毒前S1抗原临床应用
目的 乙型肝炎病毒PreS1抗原时间分辨免疫荧光分析方法临床应用研究.方法 应用双抗体夹心免疫荧光分析方法,用抗PreS1单克隆抗体和抗-HBs作为固相抗体和铕标记抗体,若样本中存在PreS1抗原,则形成抗体-抗原-铕标记抗体复合物,加增强液解离铕离子,采用时间分辨荧光测量技术,对样本中乙型肝炎病毒PreS1抗原进行检测.结果 自制 TRFIA试剂与ELLSA试剂对300例乙型肝炎患者血清标本中PreS1抗原的检测,TRFIA方法更灵敏,有9例标本ELISA方法结果为阴性,而用TRFIA方法可检测到PreS1抗原.对这9例标本进行HBV DNA定量检测.有6例标本HBV DNA拷贝数均＞106;高、中、低三个浓度,TRFIA方法批内和批间精密度测试,CV均小于10%;TRFIA方法从低值到高值,从批内至批间CV均优于ELISA方法;对于强阳性标本,从原倍到1:16倍稀释,ELISA方法都无法区分阳性程度的强弱,而TRFIA方法结果从高到低有显著性区别.对于弱阳性标本用ELISA方法检测不到时,TRFIA方法仍可检出,一强阳性标本,ELISA方法在1:8192倍稀释时结果为阴性,而TRFIA方法在1:16384倍稀释时仍可检出PreS1抗原.结论 TRFIA方法与ELISA方法相比,测量范围、精密度和灵敏度有较大提高.
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荧光定量PCR检测HBV DNA与血清HBV 标志物和preS1相互关系研究
目的探讨荧光定量PCR法检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA与HBV血清免疫学标志(HBV M)模式,preS1之间的相互关系及临床意义.方法采用实时荧光定量PCR法(FQ-PCR)检测801例血清的HBV DNA,用ELISA方法对其免疫学标志,preS1同时进行检测.结果HBV DNA的总检出率为67.0%,preS1的总检出率为74.9%.其中,在模式HBsAg(+),HBeAg(+),HBcAb(+)中血清HBV DNA含量明显高于HBsAg(+),HBeAb(+),HcAb(+)及HBsAg(+),HBcAb(+)组.在HBsAg(-)模式中HBV DNA亦有检出.在HBsAg(+),HBeAb(+),HcAb(+)组,HBV DNA的检出率为55.8%,而preS1的检出率为69.8%,两者有显著差异(P＜0.01),其余HBV M模式,无显著差异(P＞0.05).结论HBV M和preS1提供了HBV感染的间接证据,荧光定量PCR法检测HBV DNA准确灵敏,是HBV感染及复制的直接证据,HBV M,preS1和HBV DNA的检测各有其独特的临床检测意义,在乙型肝炎的诊断治疗中均具有重要的临床指导价值.
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急性乙型肝炎患者病原学指标变化的观察
目的 探讨急性乙型肝炎患者病原学指标变化的临床意义.方法 总结34例住院急性乙型肝炎患者的HBV-M、PreS1、HBV-DNA动态变化的规律.结果 入院时在患者肝功能损害较重时已有HBeAg、PreS1、HBV-DNA、HBsAg的阴转,阳性者在数周至数月内阴转.结论 急性乙型肝炎早期即可有病毒清除发生,病原学指标在短期内发生阴转,监测HBV-M、PreS1、HBV-DNA的变化对于急性乙型肝炎的诊断、确定是否抗病毒治疗及判断预后方面具有重要意义.
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HBV DNA与preS1抗原均阳性患者HBeAg阴性的原因探讨
目的 探讨导致HBV DNA阳性、preS1抗原阳性标本ELISA检测HBeAg阴性的原因.方法 筛选76例HBeAg阴性而preS1及HBV DNA阳性的血清分别进行(1)血清1:100稀释后重新用ELISA测定HBeAg;(2)用单克隆抗-HBe固相ELISA检测血清HBeAg/IC;(3)用寡核苷酸探针斑点杂交法测定HBV前C区的基因突变.结果 76份血清稀释后重测5例HBeAg阳性;38例HBeAg/IC阳性;24例HBV前C区存在基因突变.结论 后带效应、HBeAg/IC、前C区基因突变是HBV DNA阳性血清HBeAg阴性的主要原因;HBV DNA阳性、HBeAg阴性标本多为野生型毒株感染,只是由于形成了HBeAg/IC使常规ELISA检测不出HBeAg.
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160例慢性乙型肝炎患者preS1、preS2蛋白的检测结果
我们对临床诊断的160例慢性乙型肝炎患者进行了preS1、preS2蛋白和HBV DNA的检测,报告如下.
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应用蛋白组方法筛选血浆中乙肝病毒PreS1结合蛋白
目的 筛选血浆中乙型肝炎病毒PreS1结合蛋白.方法 表达纯化了PreS1-谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferase,GST)融合蛋白,利用该蛋白与血浆进行Pull-down实验,并设立GST与血浆Pull-down,GST、PreS1-GST与PBS Pull-down对照,Pull-down 产物进行双向电泳分离(2-DE),差异蛋白点通过质谱鉴定.结果 成功表达纯化出PreS1-GST融合蛋白,通过双向电泳分析发现一个PreS1特异结合蛋白,经质谱鉴定为含锚蛋白重复序列的蛋白57(ANKRD57).结论 锚蛋白重复序列的主要功能是介导蛋白质与蛋白质之间的相互作用,ANKRD57与PreS1特异结合后的生理功能值得深入研究.
关键词： PreS1 结合蛋白 蛋白组学 含锚蛋白重复序列的蛋白57 -
血清标志物联合检测乙肝病毒感染的探讨
为探讨血清PreS1、HBeAg、HBV-DNA联合检测乙肝病毒评价.结果表明,HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)模式中的PreS1抗原阳性检出率明显高于HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)模式,含HBeAg的阳性组中PreS1阳性率高于HBeAg阴性组,各组间有不同差异(p<0.01、p<0.05 、p>0.05);179例血清同时检测HBeAg与PreS1:两者均阳性53例,PreS1在与HBV-DNA组合明显优于HBeAg与PreS1组合.提示PreS1的常规检测能替代或补充HBeAg系统和HBV-DNA的检测,可作为HBV感染、活动性复制及预后的有价值观察指标.
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乙型肝炎病毒感染者前S1蛋白检测的临床观察研究
目的观察前S1蛋白在急慢性乙型肝炎及乙肝携带者中的不同变化,评估乙肝病人的病情预后.方法采用前展性队列研究方法,选择84例不同乙肝病毒感染者,其中急性乙型肝炎10例,慢性乙型肝炎44例,乙肝病毒携带者30例.按间隔0、1、3、6月检测随访前S1蛋白,结合肝功能和临床进行观察研究.结果前S1蛋白在急慢性肝炎发作期间及恢复期间无统计学差异;急性肝炎发作期与恢复期间,慢性肝炎发作期与恢复期间,急慢性肝炎与乙肝病毒携带者间都有统计学差异.结论 PreS1与HBV的活动有关,与肝炎的病程长短无关,PreS1持续阳性的乙肝病毒携带者易发作肝炎.
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hsTR55/TR75-preS1融合蛋白的表达与应用
目的简化测定hTNFα及其突变体的受体竞争结合活性的方法.方法将乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)前S区(preS1)肽段(2～50)编码区,分别融合于hsTR55和hsTR75基因的C末端组成融合受体分子基因,并利用细小RNA病毒属脑炎心肌炎病毒EMCV的内核糖体进入位点(internal ribosome entry site, IRES),构建了hsTR55/hsTR75以及它们与preS1组成的融合受体分子hsTR55/hsTR75-preS1基因和新霉素抗性(neoR)基因的双顺反子表达载体,转染BHK-21细胞后用G-418持续筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株.结果 RT-PCR及ELISA均证实,两种融合受体分子表达,并且表达上清对hTNFα的活性均具有一定的中和作用.在对表达上清进行ELISA定量后,我们还用Biosensor方法测定了这些可溶性受体分子与hTNFα的结合常数.结果表明,在融合preS1肽段前后,hTNFα与受体分子的解离常数变化不大.结论利用表达的两种融合受体分子,成功地建立了一种检测hTNFα及其突变体的受体竞争结合活性的ELISA法,并利用该法测定了野生型hTNFα及其4种突变体的受体竞争结合活性,所获结果与利用125I-hTNFα测定的结果具有相当的可比性.
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乙型肝炎病毒表面抗原阳性孕妇血清前S1抗原检测的临床意义
目的 分析乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性孕妇血清前S1抗原感染状态与胎儿宫内感染的关系.方法 收集137例HBsAg阳性孕妇的血清与脐血,HBeAg是否阳性分为HBeAg阳性孕妇血清组和HBeAg阴性孕妇血清组,采用ELISA和PCR方法对两组标本进行preS1与HBV DNA检测.结果 HBeAg阳性孕妇血清组preSl检出率为88.5%,明显高于HBeAg阴性孕妇血清组34.1%(P＜0.01);HBeAg阳性孕妇血清组HBV DNA检出率为96.1%,明显高于HBeAg阴性孕妇血清组25.9%(P＜0.01);HBeAg阳性孕妇脐血HBV DNA检出率为46.2%,明显高于HBeAg阴性孕妇组11.8%(P＜0.01);preS1在HBV DNA阳性组中的检出率为88.8%,明显高于HBV DNA阴性组23.1%(P＜0.01).结论 育龄妇女血清乙肝病毒preS1的常规检测,有利于乙肝病毒感染的早期诊断与治疗,可作为母婴垂直传播的一项预防措施.
