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采用集合转化的方法构建HIV-1蛋白酶区和反转录酶区T-A克隆载体
DNA重组技术是将两个或多个单独的DNA片段连接起来产生一个能在特定宿主中自主复制的DNA分子。重组DNA分子简单的构建方法是将基因片段克隆到质粒或噬菌体等克隆载体上。常用的质粒载体有pBR322、pUC和pGEM等。这些载体含有不同的多克隆位点,适于将含有不同酶切位点的DNA片段连接起来[1]。
获得性免疫缺陷综合征(acquired immune defi-ciency syndrome, AIDS)又称艾滋病,是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)引起的一种严重危害人类健康的致死性传染病。在HIV感染的所有阶段,都有持续高水平的HIV复制[2]。这种病毒的持续复制与耐药的发生和发展密切相关。HIV-1为单链RNA病毒,基因组全长约9.8 kb,中央编码区由3个结构基因gag、pol、env组成,其中pol基因片断覆盖 HIV 蛋白酶和反转录酶的编码区,目的片段长度为1865 bp[3,4]。我们采用集合转化方法对HIV-1反转录酶区进行T-A克隆,以得到重组质粒,为表型耐药下游实验摸索一套较为成熟的方法,报告如下。 -
分组和单体人参皂苷的批量制备
近年来,人参皂苷的药效活性受到广泛关注,尤其是其抗肿瘤方面,如抑制肿瘤内新生血管形成[1],诱导肿瘤细胞凋亡的活性[2][3],阻止脱落癌细胞在血管壁的着床,有显著抗浸润、抗转移、抑制癌细胞增殖的作用[4~6]等有大量的研究和报道.随着人参皂苷药用活性研究的深入,单体皂苷生物活性的不断明确,制备新皂苷的化学[7][8]和生物[9][10]转化方法等相关研究极为活跃.天然二醇组人参皂苷、三醇组人参皂苷和单体人参皂苷的制备已成为人参皂苷研究和开发的基础.
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口腔医学专业八年制学生学业不良的原因分析及转化策略
为提高口腔医学专业八年制学业不良学生的成绩,通过对口腔医学专业八年制学业不良学生学习状况进行调查,发现影响学生学业成绩的因素主要有学习动机、学习方式、学习时间、思维能力.根据主要影响因素,将学业不良学生分为缺乏学习动机型、学习方式不良型、学习时间不足型、思维能力不足四种类型,并提出了相应的教育策略.
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TSS及CaCl2转化方法的比较
目的:比较TSS及CaCl2二种转化方法的转化效率.方法:用TSS及CaCl2方法转化质粒pQE,并比较二者的转化效率及简便性.结果:CaCl2方法的转化效率为5.6×106转化子/μgDNA,TSS方法转化效率为8.2×107转化子/μgDNA;TSS转化方法不需要42℃热休克.结论:TSS转化方法优于CaCl2转化方法.
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Droloxifene枸橼酸盐的工艺改进及其新的生物活性(摘要)
目的探索droloxifene的合成方法,并对其新的生物活性进行研究。方法以甲氧基苯和苯乙酸为原料,经酰氯化、付-克反应、烷基化、去甲基化、醚化、格氏加成、消除脱水、构型转化及成盐共9步反应,得droloxifene枸橼酸盐,8步收率14.7%(9.2%)。结果生物活性实验发现其具有缓解肿瘤细胞多药耐药性和诱导黄体细胞凋亡的两种新的生物活性、结论对droloxifene的合成工艺进行了改进,反应步骤缩短两步,异构体分离、转化方法简便,原料及试剂易得,操作简便。两种新的生物活性的发现为新药研究及扩大临床应用提供了实验依据。[全文刊登于药学学报2000,35(12):902]
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毕赤酵母高效电转化方法的探讨
建立一种高效的毕赤酵母电转化方法,探讨影响转化效率的因素,采用该方法可明显提高转化效率,高可达到3 300个/μgDNA,明显提高TGF-β(转化生长因子-β)的表达量,为研究创伤后的组织修复奠定基础.
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中职后进生转化之我见
绝大多数后进生之所以“差”,具体讲,就是因为他们大多数缺乏自信心,因此,要解决后进生“差”的问题,应该先解决其自信心缺失的问题,让其克服自卑心理,恢复自信心,满怀信心地学习和生活,这才算是真正的转化.